一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體位置和污染的膠體金膜，包括含有膠體金探針的金標(biāo)墊、PVC膠板、濾樣紙以及金探針復(fù)溶液。本實(shí)用新型的膠體金膜應(yīng)用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜生產(chǎn)起始階段中敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)以及兩種抗體是否被相互污染，具有操作安全、簡便、快速、準(zhǔn)確、適合生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)操作等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種膠體金膜，尤其涉及一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜，適用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)以及質(zhì)控抗體和捕獲抗體是否被相互污染。
【背景技術(shù)】
[0002]將質(zhì)控抗體、捕獲抗體包被到硝酸纖維素膜上生產(chǎn)敏化硝酸纖維素膜是免疫層析試紙條生產(chǎn)制作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。目前的噴膜技術(shù)即將抗體包被到硝酸纖維素膜上，分為兩種，一種是接觸劃點(diǎn)工藝，即在接觸噴點(diǎn)系統(tǒng)中，噴頭劃過硝酸纖維素膜表面，同時(shí)泵推動(dòng)一定量的液體從噴頭處釋放到硝酸纖維素膜表面上；另一種是噴點(diǎn)工藝，使用電磁閥連接高精度步進(jìn)泵，將噴點(diǎn)液體噴點(diǎn)到硝酸纖維素膜上且以緊密的交迭點(diǎn)構(gòu)成連續(xù)的線條，噴點(diǎn)過程與成像系統(tǒng)連接，能檢查噴點(diǎn)線條的質(zhì)量同時(shí)標(biāo)記任何不好的部分。這兩種工藝均能夠?qū)①|(zhì)控抗體和捕獲抗體分別均勻地噴點(diǎn)在硝酸纖維素膜上指定區(qū)域(分別為質(zhì)控線區(qū)域、檢測(cè)線區(qū)域)。
[0003]由于目前的噴膜技術(shù)均無法區(qū)分質(zhì)控抗體和捕獲抗體，不能夠確定質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置對(duì)調(diào)或者檢測(cè)兩種抗體之間相互污染(例如，因噴膜抗體與捕獲抗體配制/使用時(shí)混料而導(dǎo)致的抗體污染)，從而導(dǎo)致整批敏化硝酸纖維素膜報(bào)廢。
[0004]因此，亟需開發(fā)一種可用于快速檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)以及質(zhì)控抗體和捕獲抗體是否被相互污染的新產(chǎn)品。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜，用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)和兩種抗體是否被相互污染。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型提供一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜，該敏化硝酸纖維素膜上設(shè)有包被質(zhì)控抗體的質(zhì)控線和包被捕獲抗體的檢測(cè)線，該膠體金膜包括含有膠體金探針的金標(biāo)墊以及配套使用的PVC膠板、濾樣紙和金探針復(fù)溶液。在PVC膠板上依次疊合有濾樣紙，含有膠體金探針的金標(biāo)墊，以及待檢敏化硝酸纖維素膜；金探針復(fù)溶液滴加在濾樣紙上。
[0007]作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述金標(biāo)墊是包被金探針的玻璃纖維。所述含有膠體金探針的金標(biāo)墊為兔抗體金標(biāo)墊或羊抗鼠抗體金標(biāo)墊；所述兔抗體金標(biāo)墊是兔多克隆抗體標(biāo)記的金探針包被在玻璃纖維上，所述羊抗鼠抗體金標(biāo)墊是羊抗鼠多克隆抗體標(biāo)記的金探針包被在玻璃纖維上。
[0008]作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述金探針是偶聯(lián)抗體的膠體金顆粒，即所述膠體金探針采用膠體金顆粒與抗體分子通過物理吸附的作用偶聯(lián)結(jié)合。
[0009]作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述膠體金顆粒的直徑范圍是20_60nm。[0010]作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述抗體分子是兔多克隆抗體或羊抗鼠多克隆抗體。即所述兔抗體膠體金膜包括包被兔多克隆抗體標(biāo)記的金探針的金標(biāo)墊以及配套使用的PVC膠板、濾樣紙和金探針復(fù)溶液。所述羊抗鼠抗體膠體金膜包括包被羊抗鼠多克隆抗體標(biāo)記的金探針的金標(biāo)墊以及配套使用的PVC膠板、濾樣紙和金探針復(fù)溶液。
[0011]作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述金探針復(fù)溶液包括以下組分(質(zhì)量百分比):
[0012]Triton X-1000.05% ；
[0013]NaH2PO4.2H20 0.38% ；
[0014]Na2HP04.12H20 2.95% ；
[0015]該金探針復(fù)溶液的ρΗ=8.0±0.I。
[0016]本實(shí)用新型采用物理吸附膠體金顆粒標(biāo)記法，分別制備兔抗體膠體金膜和羊抗鼠抗體膠體金膜，其中兔抗體膠體金膜用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體，羊抗鼠抗體膠體金膜用于檢 測(cè)敏化硝酸纖維素膜上捕獲抗體。
[0017]本實(shí)用新型的膠體金膜檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的原理是將20_60nm膠體金顆粒與抗體分子如兔多克隆抗體/羊抗鼠多克隆抗體通過物理吸附的作用偶聯(lián)結(jié)合，當(dāng)此結(jié)合物通過敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體(羊抗兔多克隆抗體)和捕獲抗體(鼠單克隆抗體)時(shí)能夠發(fā)生特異性地結(jié)合，形成肉眼可見的紅色線條，從而可以快速準(zhǔn)確地判斷敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體/捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)以及兩種抗體是否被相互污染。
[0018]和現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的膠體金膜具有以下有益效果:本實(shí)用新型用于檢測(cè)生產(chǎn)的起始階段的敏化硝酸纖維素膜，能夠在生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)方便快速檢測(cè)和判斷敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)、兩種抗體是否被相互污染，及時(shí)避免因質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置對(duì)調(diào)或者兩種抗體被相互污染而導(dǎo)致的整批次敏化硝酸纖維素膜產(chǎn)品報(bào)廢及時(shí)間/人力浪費(fèi)，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益。本實(shí)用新型所述的膠體金膜，具有操作安全、簡便、快速、準(zhǔn)確、適合生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)操作等優(yōu)點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1是本實(shí)用新型實(shí)施例2中試紙條的組裝示意圖；
[0020]圖2是本實(shí)用新型實(shí)施例2中兔抗體膠體金膜檢測(cè)結(jié)果示意圖。其中，圖2A1為合格，圖2B1為不合格，圖2C1為不合格。
[0021]圖3是本實(shí)用新型實(shí)施例2中羊抗鼠抗體膠體金膜檢測(cè)結(jié)果示意圖。其中，圖3A2為合格，圖3B2為不合格，圖3C2為不合格。
[0022]其中，附圖標(biāo)記說明如下:
[0023]I為濾樣紙,2為含有膠體金探針的金標(biāo)墊,3為檢測(cè)線,4為質(zhì)控線,5為待檢敏化硝酸纖維素膜，6為PVC膠板，7為金探針復(fù)溶液。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0025]如圖1所示，本實(shí)用新型涉及的一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜由含有膠體金探針的金標(biāo)墊2、濾樣紙1、PVC膠板6和金探針復(fù)溶液7組成，在PVC膠板6上依次疊合濾樣紙1，含有膠體金探針的金標(biāo)墊2，以及待檢敏化硝酸纖維素膜5 ;金探針復(fù)溶液7滴加在濾樣紙I上；待檢敏化硝酸纖維素膜5上設(shè)有包被質(zhì)控抗體的質(zhì)控線4和包被捕獲抗體的檢測(cè)線3。含有膠體金探針的金標(biāo)墊2可以為兔抗體金標(biāo)墊或羊抗鼠抗體金標(biāo)墊。所述兔抗體金標(biāo)墊是兔多克隆抗體標(biāo)記的金探針包被在玻璃纖維上，所述羊抗鼠抗體金標(biāo)墊是羊抗鼠多克隆抗體標(biāo)記的金探針包被在玻璃纖維上。含有膠體金探針的金標(biāo)墊2中的膠體金顆粒直徑在20-60nm。
[0026]實(shí)施例1膠體金膜的制備
[0027]A.膠體金溶液的制備:取0.01%HAuC14水溶液100ml，煮沸后加入1%檸檬酸鈉水溶液0.63ml，繼續(xù)加熱20分鐘，室溫冷卻后2_8°C保存?zhèn)溆茫?br> [0028]B.金探針復(fù)溶液的制備:
[0029]所述金探針復(fù)溶液包括如下重量百分比的組分:
[0030]Triton X-1000.05% ；
[0031]NaH2PO4.2H20 (二水合磷酸二氫鈉) 0.38%
[0032]Na2HPO4.12H20 (十二水合磷酸氫二鈉) 2.95%
[0033]該金探針復(fù)溶液的ρΗ=8.0±0.I。[0034]配制100mL 金探針復(fù)溶液:稱取 0.38g NaH2PO4.2H20, 2.95g Na2HPO4.12H20 和
0.05gTriton X_100，依次加入到60ml去離子水中，緩慢攪拌直至完全溶解，用0.1N NaOH和0.1N HCl調(diào)整其PH至8.0 ±0.1，然后定容至100ml。
[0035]C.兔抗體金探針的制備:
[0036]I)兔多克隆抗體最佳標(biāo)記量的確定
[0037]1.1)取IOml,用0.1M碳酸鉀溶液調(diào)整PH到8.0-8.4，攪拌20分鐘后分裝10管，每管1ml。
[0038]1.2)將兔多克隆抗體(購自Dako)以IOOmM PH8.2±0.2硼酸鹽緩沖液做系列稀釋，抗體終濃度分別為20-100 μ g/ml，濃度梯度為10μ g/ml，分別取1ml，加入上述膠體金溶液中，混勻。對(duì)照管只加ImllOOmM PH8.2±0.2硼酸鹽緩沖液。
[0039]1.3) IOmin后，在上述各管中加入0.lmllO%NaCl溶液，混勻后靜置2h，觀察結(jié)果。
[0040]1.4)結(jié)果觀察，對(duì)照管和兔多克隆抗體量不足以穩(wěn)定膠體金的各管，均呈現(xiàn)出由紅變藍(lán)的聚沉現(xiàn)象，加入兔多克隆抗體量達(dá)到或超過最低穩(wěn)定量的各管仍保持紅色。以穩(wěn)定Iml膠體金溶液紅色不變的最低兔多克隆抗體用量作為兔多克隆抗體的最低標(biāo)記用量，在此基礎(chǔ)上增加10-20%即兔多克隆抗體的最佳標(biāo)記量。
[0041]2)兔抗體金探針的制備:取100mL膠體金溶液，用0.1M碳酸鉀溶液調(diào)整PH到
8.0-8.4，加入兔多克隆抗體，室溫?cái)嚢?0min，加入終濃度為1%牛血清白蛋白，繼續(xù)攪拌30分鐘，4°C 11000RTC轉(zhuǎn)速離心，棄上清，沉淀用金探針復(fù)溶液重懸，2-8°C保存?zhèn)溆谩?br> [0042]D.羊抗鼠抗體金探針的制備:
[0043]I)羊抗鼠多克隆抗體最佳標(biāo)記量的確定
[0044]1.1)取IOml,用0.1M碳酸鉀溶液調(diào)整PH到8.0-8.4，攪拌20分鐘后分裝10管，每管1ml。
[0045]1.2)將羊抗鼠多克隆抗體(購自夏門波生生物技術(shù)有限公司)以IOOmMPH8.2±0.2硼酸鹽緩沖液做系列稀釋，抗體終濃度分別為20-100 μ g/ml，濃度梯度為10μ g/ml，分別取1ml，加入上述膠體金溶液中，混勻。對(duì)照管只加ImllOOmM PH8.2±0.2硼酸鹽緩沖液。
[0046]1.3) IOmin后，在上述各管中加入0.lmllO%NaCl溶液，混勻后靜置2h，觀察結(jié)果。
[0047]1.4)結(jié)果觀察，對(duì)照管和羊抗鼠多克隆抗體量不足以穩(wěn)定膠體金的各管，均呈現(xiàn)出由紅變藍(lán)的聚沉現(xiàn)象，加入羊抗鼠多克隆抗體量達(dá)到或超過最低穩(wěn)定量的各管仍保持紅色。以穩(wěn)定Iml膠體金溶液紅色不變的最低羊抗鼠多克隆抗體量作為羊抗鼠多克隆抗體的最低標(biāo)記用量，在此基礎(chǔ)上增加10-20%即羊抗鼠多克隆抗體的最佳標(biāo)記量。
[0048]2)羊抗鼠抗體金探針的制備:取100mL膠體金溶液，用0.1M碳酸鉀溶液調(diào)整PH到
8.0-8.4，加入羊抗鼠多克隆抗體，室溫?cái)嚢?0min，加入終濃度為1%牛血清白蛋白，繼續(xù)攪拌30分鐘，4°C 11000RTC轉(zhuǎn)速離心，棄上清，沉淀用金探針復(fù)溶液重懸，2-8°C保存?zhèn)溆谩?br> [0049]E.金探針稀釋液的配制
[0050]所述金探針稀釋液包括以下組分(質(zhì)量百分比):
[0051]
Triton X-100 1.0%；
BSA (牛血清白蛋白)1%
蔗糖2% ；
NaCl (氯化鈉) 1%;
PEG20000 (聚乙二醇 20000) 0.5%;
NaH2PO4.2Η20 (二水合磷酸二氫鈉) 0.38%;
Na2HPO4.12ΗΛ (十二水合磷酸氫二鈉)2.95%;
[0052]ρΗ=8.0±0.1。
[0053]配制100mL 金探針稀釋液:稱取 0.38g NaH2PO4.2Η20、2.95g Na2HPO4.12H20、lgNaCl、2g 蔗糖、0.5g PEG20000 和 1.0g Triton X-100，依次加入到 60ml 去離子水中，待完全溶解后加入Ig BSA,緩慢攪拌直至完全溶解，用0.1N NaOH和0.1N HCl調(diào)整其PH至
8.0±0.1，然后定容至100ml。
[0054]F.兔抗體金標(biāo)墊溶液的制備:將兔抗體金探針用金探針稀釋液稀釋到0D530濃度為 1-2。 [0055]G.兔抗體金標(biāo)墊的制備:將玻璃纖維浸泡在兔抗體金標(biāo)墊溶液中，待玻璃纖維充分浸潤后取出，37°C干燥6小時(shí),密封保存?zhèn)溆谩?br> [0056]H.羊抗鼠抗體金標(biāo)墊溶液的制備:將羊抗鼠抗體金探針用金探針稀釋液稀釋到0D530濃度為1-2。
[0057]J.膠體金膜的制備，由上述制得的金標(biāo)墊和金探針復(fù)溶液及PVC膠板和濾樣紙所組成，PVC膠板及濾樣紙是成熟商品，可購自市場(chǎng)。
[0058]實(shí)施例2利用膠體金膜進(jìn)行敏化硝酸纖維素膜檢測(cè)
[0059]當(dāng)開始生產(chǎn)敏化硝酸纖維素膜時(shí)，將起始敏化硝酸纖維素膜5剪下一小段，粘貼在PVC膠板6上，然后依次粘貼兔抗體金標(biāo)墊2 (或羊抗鼠抗體金標(biāo)墊)和濾樣紙I (見圖1)，然后裁剪成約4_寬的試紙條，將200 μ I金探針復(fù)溶液7滴加在試紙條的濾樣紙I上，3-5分鐘內(nèi)觀察敏化硝酸纖維素膜5上質(zhì)控線4和檢測(cè)線3的顯色情況，以此判斷敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)、兩種抗體是否被污染。
[0060]1.檢測(cè)的準(zhǔn)備
[0061] 羊抗鼠抗體金標(biāo)墊(按實(shí)施例1制備)
[0062]兔抗體金標(biāo)墊(按實(shí)施例1制備)
[0063]金探針復(fù)溶液(按實(shí)施例1制備)
[0064]PVC 膠板
[0065]濾樣紙
[0066]2.檢測(cè)步驟
[0067]A.敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控線檢測(cè):當(dāng)開始生產(chǎn)敏化硝酸纖維素膜時(shí)，將起始敏化硝酸纖維素膜剪下一小段，粘貼在PVC膠板上，剪切一段已粘貼敏化硝酸纖維素膜的PVC膜板，然后依次粘貼兔抗體金標(biāo)墊和濾樣紙，再裁剪成約4mm寬的試紙條，將200 μ I膠體金探針復(fù)溶液滴加在試紙條的濾樣紙上，3-5分鐘內(nèi)觀察敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控線和檢測(cè)線的顯色情況，以此判斷敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)、兩種抗體是否被污染。
[0068]B.敏化硝酸纖維素膜上檢測(cè)線檢測(cè):當(dāng)開始生產(chǎn)敏化硝酸纖維素膜時(shí)，在檢測(cè)步驟A中另一段已粘貼敏化硝酸纖維素膜的PVC膠板上依次粘貼羊抗鼠抗體金標(biāo)墊和濾樣紙，然后裁剪成約4_寬的試紙條，在試紙條的濾樣紙上滴加200 μ I金探針復(fù)溶液，3-5分鐘內(nèi)觀察敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控線和檢測(cè)線的顯色情況，以此判斷敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控抗體和捕獲抗體位置是否對(duì)調(diào)、兩種抗體是否被污染。
[0069]3檢測(cè)結(jié)果和判定
[0070]通過查看試紙條上敏化硝酸纖維素膜上質(zhì)控線和檢測(cè)線是否顯紅色線條，判定結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果見圖2和圖3。
[0071]結(jié)果判斷方法如下表1:
[0072]
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測(cè)敏化硝酸纖維素膜上抗體的膠體金膜，該敏化硝酸纖維素膜上設(shè)有包被質(zhì)控抗體的質(zhì)控線和包被捕獲抗體的檢測(cè)線，其特征在于，該膠體金膜包括含有膠體金探針的金標(biāo)墊，PVC膠板、濾樣紙；在PVC膠板上依次疊合有濾樣紙，含有膠體金探針的金標(biāo)墊，以及待檢敏化硝酸纖維素膜。
2.如權(quán)利要求1所述的膠體金膜，其特征在于，所述金標(biāo)墊是包被金探針的玻璃纖維；所述含有膠體金探針的金標(biāo)墊為兔抗體金標(biāo)墊或羊抗鼠抗體金標(biāo)墊；所述兔抗體金標(biāo)墊是兔多克隆抗體標(biāo)記的金探針包被在玻璃纖維上，所述羊抗鼠抗體金標(biāo)墊是羊抗鼠多克隆抗體標(biāo)記的金探針包被在玻璃纖維上。
【文檔編號(hào)】G01N33/531GK203705451SQ201320799086
【公開日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】張展英, 杜昕光 申請(qǐng)人:美艾利爾（上海）診斷產(chǎn)品有限公司