一種檢測(cè)中黑盲蝽抗藥性的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測(cè)中黑盲蝽抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下制作診斷玻璃管，快速檢測(cè)中黑盲蝽田間種群對(duì)藥劑的抗性水平，所述藥劑為吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯或毒死蜱；藥劑的診斷劑量：吡蟲啉為824ng/cm2，硫丹為20ng/cm2，三氟氯氰菊酯為861ng/cm2，毒死蜱為7ng/cm2。本發(fā)明方法使用簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀明了，適用于田間快速檢測(cè)中黑盲蝽抗性水平，克服了傳統(tǒng)生測(cè)方法用樣本數(shù)量大、操作繁瑣、費(fèi)時(shí)等缺點(diǎn)，可用于快速檢測(cè)中黑盲蝽田間種群抗性水平。
【專利說明】一種檢測(cè)中黑盲蝽抗藥性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種對(duì)農(nóng)業(yè)害蟲抗藥性進(jìn)行監(jiān)測(cè)的測(cè)定技術(shù)方法，具體地說，涉及一種檢測(cè)中黑盲蝽抗藥性的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，隨著轉(zhuǎn)Bt基因棉在我國(guó)的大面積種植，棉鈴蟲得到了有效控制，但由于棉田中減少了化學(xué)藥劑的使用，盲蝽蟓上升為主要害蟲，同時(shí)由于農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整，果樹和蔬菜的種植面積大幅度增加，為盲蝽蟓提供了豐富的寄主植物和適宜的越冬場(chǎng)所，發(fā)生和危害日趨嚴(yán)重。盲蝽蟓的寄主范圍非常廣泛，有38科147種之多，其中主要有錦葵科、豆科、菊科、十字花科及多種果樹林木等，在田間有轉(zhuǎn)主危害的特征，且具有發(fā)生世代長(zhǎng)、世代重疊嚴(yán)重的特點(diǎn)，在田間十分活躍，活動(dòng)隱蔽，給防治帶來(lái)了很大困難。目前對(duì)盲蝽蟓的防治仍以化學(xué)防治為主，但殺蟲劑的短期使用會(huì)使盲蝽蟓產(chǎn)生亞致死效應(yīng)，長(zhǎng)期不合理使用會(huì)導(dǎo)致抗藥性的發(fā)生，從而加大防治難度。
[0003]因此，如何快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)盲蝽蟓抗藥性水平是非常重要的?，F(xiàn)在用于抗藥性檢測(cè)的方法主要包括傳統(tǒng)的生物測(cè)定、生化檢測(cè)、免疫學(xué)方法及分子生物學(xué)方法。通常情況下，生物測(cè)定最直接、最接近田間檢測(cè)的抗性水平。
[0004]由于各種藥劑作用機(jī)理的不同，短時(shí)間內(nèi)昆蟲的中毒反應(yīng)也各不相同，因此利用這個(gè)特點(diǎn)發(fā)展的玻璃管藥膜診斷劑量，能夠快速檢測(cè)田間種群的抗性水平，這一應(yīng)用也是田間快速檢測(cè)抗性的重要手段。
[0005]毒力測(cè)定是室內(nèi)了解害蟲抗藥性常用的方法，但傳統(tǒng)的葉片藥膜法和點(diǎn)滴法進(jìn)行毒力測(cè)定，操作繁瑣，要設(shè)定若干濃度和重復(fù)，以保證結(jié)果的可信度。玻璃管藥膜法是新出現(xiàn)的一種快速檢測(cè)害蟲抗藥性的方法，由于其作用效果明顯，縮短了檢查結(jié)果的時(shí)間，但對(duì)于濃度和重復(fù)問題上仍然與傳統(tǒng)方法一樣，沒有改進(jìn)。利用本發(fā)明的診斷劑量，輔以玻璃管藥膜法，不僅利用了玻璃管藥膜法的快速檢測(cè)特點(diǎn)，而且在診斷劑量下可快速了解害蟲抗性，解決的傳統(tǒng)毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)繁瑣的程序，提高了效率，并可用于田間害蟲抗藥性的快速檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種使用簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀明了，適用于田間快速檢測(cè)中黑盲蝽抗性水平的方法。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)中黑盲蝽抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下制作診斷玻璃管，檢測(cè)中黑盲蝽田間種群個(gè)體對(duì)藥劑的抗性水平，所述藥劑為吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯或毒死蜱；藥劑的診斷劑量:吡蟲啉為824ng/cm2，硫丹為20ng/cm2,三氟氯氰菊酯為861ng/cm2,毒死蝶為7ng/cm2。
[0008]其中，藥劑的診斷劑量是通過不同濃度的藥劑采用玻璃管藥膜法對(duì)室內(nèi)飼養(yǎng)中黑盲蝽敏感種群進(jìn)行藥劑毒力測(cè)定，計(jì)算LC99作為藥劑的診斷劑量。[0009]上述中黑盲蝽敏感種群為室內(nèi)飼養(yǎng)的未接觸任何藥劑的中黑盲蝽敏感種群。
[0010]進(jìn)一步地，所述藥劑的診斷劑量是通過如下步驟確定的:
[0011](I)中黑盲蝽田間種群的室內(nèi)飼養(yǎng):采集中黑盲蝽田間種群，以新鮮四季豆為飼料，進(jìn)行繁殖；
[0012](2)丙酮稀釋供試殺蟲藥劑至不同濃度梯度作為毒力測(cè)定濃度；
[0013](3)玻璃管藥膜的制作:用步驟(2)中丙酮稀釋的各梯度藥劑制作毒力測(cè)定所用的玻璃管藥膜，每管加入220 μ L各濃度藥液，滾動(dòng)玻璃管使藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁上，直至丙酮完全揮發(fā)；
[0014](4)毒力測(cè)定:用步驟(3)中制備的玻璃管進(jìn)行中黑盲蝽的毒力測(cè)定，至少進(jìn)行三次生物學(xué)重復(fù)；
[0015](5)結(jié)果及診斷劑量:對(duì)步驟(4)的結(jié)果做毒力回歸曲線，并計(jì)算LC99得出各個(gè)藥劑的診斷劑量。
[0016]其中，步驟(2)中所用的殺蟲藥劑均為95%以上的原藥，并且用丙酮溶解，稀釋至5?7個(gè)濃度梯度。
[0017]其中，步驟(4)中每次毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)做三次簡(jiǎn)單獨(dú)立重復(fù)。
[0018]其中，步驟(5)用POLO軟件計(jì)算結(jié)果及診斷劑量。
[0019]本發(fā)明的有益效果在于:
[0020]本發(fā)明方法使用簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀明了，適用于田間快速檢測(cè)中黑盲蝽的抗性水平。利用本發(fā)明的診斷劑量進(jìn)行田間抗性診斷，大大減少了傳統(tǒng)毒力測(cè)定的繁瑣步驟，可用于快速檢測(cè)中黑盲蝽田間種群抗性水平，且用于田間的快速檢測(cè)方便可靠，解決了傳統(tǒng)毒力測(cè)定方法用蟲量大的問題，也解決了田間操作問題，簡(jiǎn)單易操作，田間實(shí)時(shí)檢測(cè)抗性，了解中黑盲蝽抗性水平，指導(dǎo)田間用藥。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1為實(shí)驗(yàn)所用玻璃管。
[0022]圖2為實(shí)驗(yàn)選用的供試中黑盲蝽。
【具體實(shí)施方式】
[0023]以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實(shí)施例1診斷劑量的獲得
[0025]1.研究對(duì)象
[0026]本發(fā)明的研究對(duì)象為實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的未接觸任何藥劑的中黑盲蝽敏感種群。
[0027]2.方法
[0028]供試藥劑為吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯和毒死蜱，采用玻璃管藥膜法，進(jìn)行毒力測(cè)定。
[0029]2.1原藥母液的配置及稀釋
[0030]將原藥溶解于丙酮中，定容后裝于藥劑瓶中，封口膜封口，保存于4°C冰箱中。毒力測(cè)定前，用丙酮將原藥母液稀釋到各濃度，備用。
[0031]2.2玻璃管藥膜的制作[0032]實(shí)驗(yàn)所用玻璃管(如圖1所示)必須經(jīng)過嚴(yán)格的洗滌，確保沒有任何藥物殘留。從稀釋好的藥液中吸取220 μ L加入到直徑1.7cm,高7.5cm的玻璃管(內(nèi)表面積40cm2)中，滾動(dòng)玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁，直至丙酮完全揮發(fā)，對(duì)照單獨(dú)用丙酮處理，制作好的玻璃管藥膜室溫下過夜使用。
[0033]2.3毒力測(cè)定供試中黑盲蝽的選擇
[0034]選用室內(nèi)飼養(yǎng)的中黑盲蝽敏感種群，挑取健康一致的成蟲期3-5天成蟲進(jìn)行試驗(yàn)(如圖2所示)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每個(gè)制備好的藥膜管放置15頭中黑盲蝽，在室內(nèi)正常飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)(溫度24?28°C，相對(duì)濕度50%?60%，光照16L:8D)。
[0035]2.4檢查結(jié)果及死亡標(biāo)準(zhǔn)的判斷
[0036]3h后檢查結(jié)果，其中以輕觸足不動(dòng)記為死，以對(duì)照死亡率小于10%為有效測(cè)定，并用對(duì)照死亡率進(jìn)行校正。每個(gè)藥劑6?7個(gè)濃度，每個(gè)濃度3次重復(fù)，數(shù)據(jù)處理采用POLO分析軟件，計(jì)算LC99，即診斷劑量，該診斷劑量可用于快速檢測(cè)中黑盲蝽田間種群對(duì)吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯和毒死蜱的抗性水平。
[0037]藥劑的診斷劑量為批蟲啉為824ng/cm2,硫丹為20ng/cm2,三氟氯氰菊酯為861ng/cm2，毒死蝶為7ng/cm2。
[0038]實(shí)施例2診斷劑量對(duì)中黑盲蝽抗藥性檢測(cè)
[0039]1.研究對(duì)象
[0040]本實(shí)施例的研究對(duì)象為中黑盲蝽田間待測(cè)種群。
[0041]2.方法
[0042]供試藥劑為吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯和毒死蜱，利用本發(fā)明診斷劑量制作玻璃管藥膜，田間進(jìn)行中黑盲蝽抗性水平的檢測(cè)。
[0043]2.1原藥母液的配置及稀釋
[0044]將原藥溶解于丙酮中，用丙酮將原藥母液稀釋實(shí)施例1得到的診斷劑量，備用。
[0045]2.2玻璃管藥膜的制作
[0046]實(shí)驗(yàn)所用玻璃管(如圖1所示)必須經(jīng)過嚴(yán)格的洗滌，確保沒有任何藥物殘留。從稀釋好的藥液中吸取220 μ L加入到直徑1.7cm,高7.5cm的玻璃管(內(nèi)表面積40cm2)中，滾動(dòng)玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁，直至丙酮完全揮發(fā)，對(duì)照單獨(dú)用丙酮處理，制作好的玻璃管藥膜室溫下過夜使用。
[0047]2.3田間抗性診斷
[0048]田間挑選成蟲期3-5天成蟲置于2.2制作玻璃管中，每管15頭，3h后觀察死亡率，死亡率低于99%的種群為抗性種群。
[0049]利用本發(fā)明的診斷劑量進(jìn)行田間抗性診斷，不但大大減少了傳統(tǒng)毒力測(cè)定的繁瑣步驟，而且用于田間的快速檢測(cè)也方便可靠，解決了傳統(tǒng)毒力測(cè)定方法用蟲量大的問題，也解決了田間操作問題，簡(jiǎn)單易操作。用于田間實(shí)時(shí)檢測(cè)抗性，了解中黑盲蝽抗性水平，指導(dǎo)田間用藥。
[0050]實(shí)施例3傳統(tǒng)玻璃管藥膜法對(duì)田間中黑盲蝽種群的抗藥性測(cè)定
[0051]1.研究對(duì)象
[0052]本實(shí)例研究對(duì)象為田間中黑盲蝽待測(cè)種群。
[0053]2.方法[0054]供試藥劑為吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯和毒死蜱，采用玻璃管藥膜法，進(jìn)行毒力測(cè)定。
[0055]2.1原藥母液的配置及稀釋
[0056]將原藥溶解于丙酮中，定容后裝于藥劑瓶中，封口膜封口，保存于4°C冰箱中。
[0057]毒力測(cè)定前，用丙酮將原藥母液稀釋至5~7個(gè)濃度，備用。
[0058]2.2玻璃管藥膜的制作
[0059]實(shí)驗(yàn)所用玻璃管(如圖1所示)必須經(jīng)過嚴(yán)格的洗滌，確保沒有任何藥物殘留。從稀釋好的藥液中吸取220 μ L加入到直徑1.7cm,高7.5cm的玻璃管(內(nèi)表面積40cm2)中，滾動(dòng)玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁，直至丙酮完全揮發(fā)，對(duì)照單獨(dú)用丙酮處理，制作好的玻璃管藥膜室溫下過夜使用。
[0060]2.3毒力測(cè)定供試中黑盲蝽的選擇
[0061]選用室內(nèi)飼養(yǎng)的田間中黑盲蝽種群，挑取成蟲期3-5天成蟲(如圖2所示)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每個(gè)制備好的藥膜管放置15頭中黑盲蝽，在室內(nèi)正常飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)(溫度24~28°C，相對(duì)濕度50%~60%，光照16L:8D)。
[0062]2.4檢查結(jié)果及死亡標(biāo)準(zhǔn)的判斷
[0063]3h后檢查結(jié)果，其中以輕觸足不動(dòng)記為死，以對(duì)照死亡率小于10%為有效測(cè)定，并以對(duì)照死亡率進(jìn)行校正。每個(gè)藥劑5~7個(gè)濃度，每個(gè)濃度3次重復(fù)，數(shù)據(jù)處理采用POLO分析軟件。
[0064]傳統(tǒng)玻璃管藥膜生測(cè)方法，操作步驟繁瑣，每次生測(cè)重復(fù)操作步驟，且用蟲量大，不適合用于田間實(shí)時(shí)檢測(cè)。采用本發(fā)明的診斷劑量，制作玻璃管，可帶到田間進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，快速了解田間種群抗性。
[0065]采用傳統(tǒng)玻璃管藥膜法對(duì)田間采集中黑盲蝽種群進(jìn)行毒力測(cè)定，被測(cè)種群為:河南新鄉(xiāng)、山東濱州、安徽無(wú)為。傳統(tǒng)方法測(cè)定得到三個(gè)被測(cè)種群對(duì)六種藥劑的LD5tl，見如下表格。同時(shí)采用本發(fā)明玻璃管診斷劑量對(duì)三個(gè)被測(cè)種群進(jìn)行以上六種藥劑的抗性診斷，操作方法如實(shí)施例2，各種群對(duì)診斷藥劑的死亡率，結(jié)果見表1。
[0066]表1四種藥劑玻璃管診斷劑量對(duì)中黑盲蝽的抗性診斷
[0067]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)中黑盲蝽抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下制作診斷玻璃管，檢測(cè)中黑盲蝽田間種群個(gè)體對(duì)藥劑的抗性水平，其特征在于，所述藥劑為吡蟲啉、硫丹、三氟氯氰菊酯或毒死蜱；所述藥劑的診斷劑量:吡蟲啉為824ng/cm2，硫丹為20ng/cm2，三氟氯氰菊酯為861ng/cm2,毒死蝶為 7ng/cm2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，藥劑的診斷劑量是通過不同濃度的藥劑采用玻璃管藥膜法對(duì)室內(nèi)飼養(yǎng)中黑盲蝽敏感種群進(jìn)行藥劑毒力測(cè)定，計(jì)算LC99作為藥劑的診斷劑量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述中黑盲蝽敏感種群為室內(nèi)飼養(yǎng)的未接觸任何藥劑的中黑盲蝽敏感種群。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，藥劑的診斷劑量是通過如下步驟確定的: (O中黑盲蝽的室內(nèi)飼養(yǎng):以新鮮四季豆為飼料，進(jìn)行繁殖； (2)丙酮稀釋供試殺蟲藥劑至不同濃度梯度作為毒力測(cè)定濃度； (3)玻璃管藥膜的制作:用步驟(2)中丙酮稀釋的各梯度藥劑制作毒力測(cè)定所用的玻璃管藥膜，每管加入220 μ L各濃度藥液，滾動(dòng)玻璃管使藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁上，直至丙酮完全揮發(fā)； (4)毒力測(cè)定:用步驟(3)中制備的玻璃管進(jìn)行中黑盲蝽的毒力測(cè)定，至少進(jìn)行三次生物學(xué)重復(fù)； (5)結(jié)果及診斷劑量:對(duì)步驟(4)的結(jié)果做毒力回歸曲線，并計(jì)算LC99得出各個(gè)藥劑的診斷劑量。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所用的殺蟲藥劑均為95%以上的原藥，并且用丙酮溶解，稀釋至5?7個(gè)濃度梯度。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(4)中每次毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)做三次簡(jiǎn)單獨(dú)立重復(fù)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(5)用POLO軟件計(jì)算結(jié)果及診斷劑量。
【文檔編號(hào)】G01N33/00GK103675208SQ201310671587
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
【發(fā)明者】高希武, 劉曉嵐, 譚瑤, 許新新, 馮晶晶, 甄從愛, 張帥 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)