專利名稱：一種測定它波寧含量的高效液相色譜方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種它波寧含量的高效液相色譜測定方法。
背景技術：
它波寧(Tabersonine)是一種吲哚生物堿(結構式見附圖1)，本身有小的降壓活性，為合成一線抗腦缺血和老年癡呆藥物長春胺、長春西汀和長春布寧的關鍵原料，是非常重要的藥物合成中間體。該化合物天然來源于非洲產(chǎn)小灌木Voacanga africana果籽、還有夾竹桃科植物長春花和柳葉水甘草，所以又名柳葉水甘草堿。其中，以Voacanga africana種子中它波寧含量最高，達到2.0 % -2.5 %以上。Voacanga africana的其他部分如樹皮和根皮除含有它波寧外，還含有大量其他生物堿如Voacangine, Vocamine, Vobtusine,Amataine, Akuammidine, Coronaridine 和 Vobtusine,它們均有良好的生理活性。由于它波寧是Voacanga aficana種子中主要的生物堿(占生物總堿含量的95%以上,HPLC檢測)，且含量高,所以目前天然它波寧的生產(chǎn)主要是從Voacanga aficana種子提取分離得到。關于它波寧的高效液相含量檢測方法相關報道并不多，所以研究它波寧含量分析方法具有非常重要的意義。該化合物天然來源于非洲產(chǎn)小灌木Voacanga africana果籽中，以Voacangaafricana種子中它波寧含量最高可達2.0% -2.5%以上。黃色或淡黃色粉末，熔點199°C-199.5°C，比旋度-333°。溶于甲醇和乙醇，在水中微溶。研究表明，它波寧有抗腫瘤、降壓作用，主要用于缺血性高血壓腦病、中風后遺癥及腦血管病引起的抑郁、焦躁不安等，適于早衰性腦退化癥狀的消除，如頭痛、記憶力減退、眩暈、失語、記憶力減退等，也可用于視網(wǎng)膜出血。神經(jīng)性心動過速和其他植物神經(jīng)功能紊亂等癥狀。
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目前，關于測定Voacanga aficana種子中它波寧含量的方法并不多，而且這些測定方法濃度與線性關系曲線中的濃度范圍均較窄，本發(fā)明中濃度與峰面積線性關系中濃度范圍最小可至10μ g/ml，最大可達ΙΟΟΟμ g/ml，線性關系中濃度范圍較大。本發(fā)明還具有分離效果好，測定準確，靈敏度高，分析簡便快速等技術特點，對于準確測定原料藥中它波寧的含量具有十分重要的應用價值。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種更穩(wěn)定、分離效果更好、精密度和準確性更高的它波寧含量檢測方法。為達上述目的，本發(fā)明采用了如下技術方案:本發(fā)明方法選用了流動相中甲醇成分體積百分比由65%遞增至85%。優(yōu)選甲醇體積分數(shù)為70%。在上述優(yōu)化實驗中，確定本發(fā)明方法中流動相成分含15%的乙腈和15%的0.2M的乙酸銨溶液。本發(fā)明HPLC方法中，其特點在于選用上述的流動相，按上述流動相所得它波寧樣品圖譜有較好的峰形，圖譜見附圖2。
在本發(fā)明分析方法中，樣品制備方法為:精密量取25mg樣品，置于25ml容量瓶中，加流動相溶解稀釋并定容至刻度線。本發(fā)明HPLC分析方法進樣量為10 μ I，利用標準品溶液多次進樣來進行進樣精密度試驗，進樣次數(shù)為6次，RSD值為0.12%，進樣精密度良好。


圖1為它波寧結構式；圖2為它波寧圖譜；圖3為它波寧標樣濃度與峰面積線性關系。
具體實施方式
:在下面的實施例中進一步說明本發(fā)明的詳細分析方法，但本發(fā)明并不局限于下述詳細分析方法，所屬技術領域的技術人員應該明了，對本發(fā)明的任何改進，均落在本發(fā)明的保護范圍和公開范圍之內。實施例1:它波寧含量的高效液相色譜方法I色譜條件:采用美國Agilem-1260高效液相色譜儀，Chemstation Edition色譜工作站色譜柱:ThermoC18 (4.6mm X 250mm, 5 μ m)柱溫:30°C檢測器:紫外檢測器檢測波長:280nm真空泵:SHB_III循環(huán)水式真空泵流動相的制備:A溶液:稱取7.72g乙酸銨(AR)，溶解在IOOOml水(蒸餾水)中，醋酸調PH至4.0。流動相按照甲醇:乙腈:A溶液=7: 1.5: 1.5體積比混合，0.2μm孔徑過濾器過濾，SCQ-250W超聲波超聲脫氣。采用外標法，需要分別對標準品和待測樣品溶液進行測定。標準品溶液制備:精密稱取25mg標準品，置于25ml容量瓶中，加少量流動相超聲IOseconds使樣品完全溶解后再用流動相稀釋定容至刻度線。待測樣品制備:精密稱取與標準品同等重量的待測樣品，置于25ml容量瓶中，力口少量流動相超聲lOseconds使樣品完全溶解后再用流動相稀釋定容至刻度線。根據(jù)含量計算公式:
權利要求
1.一種它波寧高效液相色譜(HPLC)含量檢測方法，其特征在于流動相為甲醇(色譜純)與乙腈(色譜純)及0.2M乙酸銨(分析級)溶液的混合溶液，流動相組成的體積比例為甲醇65% 85%，乙腈5% 20%，0.2M乙酸銨溶液5% 20%，優(yōu)選其中體積比例甲醇70%，乙腈15%，0.2M乙酸銨溶液15%。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱。
3.如權利要求1所述的方法，使用紫外檢測器，檢測波長為280nm，柱溫30°C，流速為1.0ml/min,進樣體積為10 μ I。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于配制的樣品溶液濃度為lmg/ml。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于本HPLC法采用外標法進行它波寧的含量測定；濃度與峰 面積線性關系中濃度范圍為10 ΙΟΟΟμ g/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種它波寧含量檢測的高效液相色譜方法，色譜柱C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相甲醇∶乙腈∶0.2M乙酸銨(7∶1.5∶1.5，體積比)；柱溫在30℃，進樣量為10μl；流速1.0ml/min；紫外檢測器，檢測波長為280nm。它波寧在10～1000μg/ml濃度范圍內與峰面積呈良好線性關系，線性相關系數(shù)r＝1。高效液相色譜法檢測它波寧含量的方法，精確度高，重復性好，并能夠縮短樣品分析時間，降低流動相配制費用和樣品配制成本，更能提高樣品分析結果的準確性。
文檔編號G01N30/28GK103235071SQ20131012538
公開日2013年8月7日 申請日期2013年4月12日 優(yōu)先權日2013年4月12日
發(fā)明者彭學東, 張梅, 趙金召, 楊艷麗 申請人:張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司