專利名稱：以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，尤其是涉及ー種以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
蜂膠是蜜蜂采集植物的樹脂，并混以自身分泌物而成的膠粘性物質(zhì)。蜂膠可以補(bǔ)虛弱，化濁脂，止消渴；外用解毒消腫，收斂生肌。蜂膠已經(jīng)被廣泛用作保健食品原料。蜂膠中組分復(fù)雜，不溶于水，提純后的蜂膠呈褐色塊狀，既不方便服用，也不利于吸收，因此加工成保健食品時(shí)往往需要加入輔料保證蜂膠能夠以細(xì)微粉末的狀態(tài)分散在產(chǎn)品中。以蜂膠為原料的保健食品中，可同時(shí)配有西洋參、人參等含皂苷類化合物的原料，這類保健食品往往將總黃酮與總皂苷確定為產(chǎn)品的功效成分。文獻(xiàn)報(bào)道的總皂苷測(cè)定方法有:香草醛比色法、薄層色譜法、GC法、HPLC法、LC 一 MS法，CE法等；如沈向紅，任一平，陳翊.HPLC法與香草醛比色法測(cè)定保健品中的人參皂甙.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2004, 14(6):681-683中就公開了香草醛比色法和HPLC法。保健食品評(píng)價(jià)與技術(shù)規(guī)范(2003年版)提供的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，是目前保健食品中總皂苷的經(jīng)典測(cè)定方法，用此法測(cè)定含有蜂膠原料的保健食品時(shí)，由于受蜂膠、崩解劑、填充劑等輔助物料的保護(hù)，產(chǎn)品中總皂苷難以被有效提取，總皂苷含量測(cè)定結(jié)果往往與實(shí)際配方量不符，準(zhǔn)確度差?，F(xiàn)在也有其他的用于測(cè)定總皂苷含量的方法，如
公開日為2012年10月31日，公開號(hào)為CN102759514A的中國(guó)專利中，公開了ー種注射用益氣復(fù)脈制劑中人參總皂苷的含量的測(cè)定方法，該方法包括以下步驟:1)對(duì)照品的制備分別精密稱取人參總皂苷對(duì)照品，加甲醇溶解，制得溶液，2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液，3)測(cè)定方法分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，紫外分光光度法測(cè)定樣品中人參總皂苷的含量。該方法不能測(cè)定以蜂膠為原料的保健食品中的總皂苷。綜上所述，目前還沒有一種提取方法簡(jiǎn)單，回收率高，準(zhǔn)確性好，簡(jiǎn)便快速的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，而提供一種提取方法簡(jiǎn)單，回收率高，準(zhǔn)確性好，簡(jiǎn)便快速的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法。本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是:該以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:該測(cè)定方法包括標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序、樣品處理工序、試液過柱エ序、顯色エ序和總皂苷計(jì)算エ序；
所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，分別吸取Oml、10ml、20ml、40ml、60ml、80ml、IOOml和120ml已知濃度的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液置于八個(gè)蒸發(fā)皿中，待蒸發(fā)皿中的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液干燥后，先加入5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉溶液,再加水20ml,搖勻后用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為
6.5-7.0，從而得八份標(biāo)準(zhǔn)母液，將八份標(biāo)準(zhǔn)母液置于45-55°C的水浴中超聲20_40min破乳，冷卻到常溫，分別采用50ml的容量瓶用水定容到50ml，搖勻后過濾，棄去5ml初濾液，取1.0ml續(xù)濾液做為標(biāo)準(zhǔn)試液，從而得到八份標(biāo)準(zhǔn)試液；采用層析柱對(duì)每份標(biāo)準(zhǔn)試液進(jìn)行過柱操作，先用25mL體積百分比為70%的こ醇洗柱，棄去洗脫液,再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL標(biāo)準(zhǔn)試液，過柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，用25mL體積百分比為70%的こ醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，放水浴中揮干，從而得到八個(gè)揮發(fā)后的蒸發(fā)皿；在已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL體積百分比為5%的香草醛冰こ酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.SmL高氯酸，混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，放在60°C以下的水浴中加熱lOmin，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰こ酸
5.0mL，搖勻后，以Icm比色皿于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定，從而得到八個(gè)吸光度值；ー個(gè)吸光度值和ー個(gè)蒸發(fā)皿中含有的人參皂苷的質(zhì)量相對(duì)應(yīng)，采用吸光度值和人參皂苷的質(zhì)量做曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；
所述樣品處理工序中，取以蜂膠為原料的保健食品0.3g置于50ml容量瓶中，加入5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉溶液來(lái)溶解保健食品,待保健食品溶解后,加水20ml，搖勻后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值為6.5-7.0，在45-55°C的水浴中超聲20_40min破乳，冷卻到常溫，用水定容到50ml，搖勻后過濾，棄去5ml初濾液，取1.0ml續(xù)濾液做為待測(cè)試液；
所述試液過柱エ序中，采用層析柱對(duì)待測(cè)試液進(jìn)行過柱操作，先用25mL體積百分比為70%的こ醇洗柱，棄去洗脫液,再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL待測(cè)試液，過柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液,用25mL體積百分比為70%的こ醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，放水浴中揮干，得到待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿；所述顯色エ序中，在待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL體積百分比為5%的香草醛冰こ酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.SmL高氯酸，混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，放在60°C以下的水浴中加熱lOmin，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰こ酸5.0mL，搖勻后，以Icm比色皿于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定，從而得到待測(cè)試液的吸光度值，該吸光度值和以蜂膠為原料的保健食品相對(duì)應(yīng)；
所述總皂苷計(jì)算エ序中，將待測(cè)試液的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到待測(cè)試液中含有的人參皂苷的質(zhì)量，從而得到以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的含量。本發(fā)明采用氫氧化鈉水溶液溶解以蜂膠為原料的保健食品，釋放被蜂膠、崩解劑和填充劑包埋的總皂苷成分，使之溶于水中，然后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至6.5-7.0，保證總皂苷在水中的穩(wěn)定性，并使蜂膠重新析出，排除了蜂膠的干擾，從而有效地提取了總皂苷。用本方法測(cè)定含有蜂膠、崩解劑、填充劑的樣品中的總皂苷，具有提取方法簡(jiǎn)單，回收率高，準(zhǔn)確性好，簡(jiǎn)便快速的特點(diǎn)，可以用于以蜂膠為原料以總皂苷為功效成分的保健食品的質(zhì)量控制，也可以用于一般保健食品中的總皂苷的測(cè)定。作為優(yōu)選，本發(fā)明在標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中和試液過柱エ序中，所用的層析柱的長(zhǎng)20cm-25cm,內(nèi)徑0.6cm_0.8cm,頂部接30ml的！)&液漏斗；層析柱內(nèi)裝6cm高的Amberlite-XAD-2大孔樹脂,上加高Icm的中性氧化招。作為優(yōu)選，本發(fā)明在樣品處理工序中，使用氫氧化鈉溶液來(lái)溶解保健食品時(shí)，采用振搖分散的方式或者超聲輔助分散的方式進(jìn)行溶解。作為優(yōu)選，本發(fā)明在樣品處理工序中，向已經(jīng)溶解的保健食品中加入20ml水并搖勻后，用于調(diào)節(jié)PH值的鹽酸為體積百分比為10%的鹽酸。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=ax+b，其中，Y表示吸光度值，X表示人參皂甙的質(zhì)量，a為正數(shù)，b為任意數(shù)。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.0036x-0.0043,表示吸光度值的y的單位為A,表示人參阜式的質(zhì)量的x的單位為mg。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2=0.9937，說明在20mg-240mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述樣品處理工序中，以蜂膠為原料的保健食品是磨成粉末狀的。由此使得本發(fā)明能夠更快更有效的溶解保健食品。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為2.0mg/mL。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果:采用氫氧化鈉水溶液溶解以蜂膠為原料的保健食品，釋放被蜂膠、崩解劑和填充劑包埋的總皂苷成分，使之溶于水中，然后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至6.5-7.0，保證總皂苷在水中的穩(wěn)定性，并使蜂膠重新析出，排除了蜂膠的干擾，從而有效地提取了總皂苷。用本方法測(cè)定含有蜂膠、崩解劑、填充劑的樣品中的總皂苷，具有提取方法簡(jiǎn)單，回收率高，準(zhǔn)確性好，簡(jiǎn)便快速的特點(diǎn)，可以用于以蜂膠為原料以總皂苷為功效成分的保健食品的質(zhì)量控制，也可以用于一般保健食品中的總皂苷的測(cè)定。本發(fā)明在提取試劑的選擇上做出了創(chuàng)新，皂苷結(jié)構(gòu)中的酚羥基與香草醛結(jié)構(gòu)中的醛基進(jìn)行羥醛縮合反應(yīng)生成紅色的縮合物，將甙元的酚羥基氧化為羧基，與醛縮合反應(yīng)，糖類、黃酮類化合物因含有酚羥基而干擾測(cè)定。本發(fā)明曾采用甲醇提取總皂苷，因?yàn)榉淠z易溶于甲醇，所以用甲醇作為提取劑，可完全提取總皂苷，但是樣品在用甲醇提取總皂苷的同時(shí)，也提取了蜂膠，為了排除蜂膠的干擾需將甲醇吹干，再加水溶解總皂苷，由于蜂膠依然存在于甲醇提取物中，并牢牢將總皂苷包埋，所以用水難以溶出總皂苷，導(dǎo)致結(jié)果偏低。本發(fā)明也曾采用熱水回流法提取，雖然比甲醇法好ー些，回收率有所提高，但是依然偏低，且檢驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，這可能是因?yàn)榧訜峥梢詨埣颖澜鈩⑻畛鋭┑娜芙舛?，但不能提高蜂膠在水中的溶解度，此外，結(jié)果不穩(wěn)定與樣品粗細(xì)、提取溫度、時(shí)間等因素有夫。分析蜂膠與總皂苷的性質(zhì)，本發(fā)明采用氫氧化鈉水溶液提取總皂苷，蜂膠易溶于堿性水溶液，總皂苷得以從蜂膠中被釋放到堿性水溶液中，再調(diào)節(jié)PH值至酸性，蜂膠被沉淀，而總皂苷仍留在水中，用氫氧化鈉水溶液提取總皂苷，回收率可達(dá)到90.3%-109.7%。本發(fā)明在提取液濃度的選擇上做出了創(chuàng)新，總皂苷在堿性水溶液中不穩(wěn)定，最適pH值為6.03，這在1998年8月出版的《中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志》第15卷增刊中由許文祥研究的人參液體制劑人參總皂甙PHm測(cè)定中有記載。樣品中的蜂膠含有大量酸性成分，提取劑氫氧化鈉水溶液首先與蜂膠中的酸性物質(zhì)進(jìn)行中和反應(yīng)，從而溶解蜂膠，蜂膠的量決定了提取劑的用量。如果提取液濃度過高，會(huì)加速皂苷的水解，濃度過低，則蜂膠不被溶解，皂苷成分不能充分溶出。本發(fā)明在大量試驗(yàn)的前提下，最終重點(diǎn)考察了摩爾濃度為0.1M、0.5M和IM這三種濃度，以及2mL、3mL和5mL這三種用量對(duì)樣品的溶解情況，發(fā)現(xiàn)稱樣量在0.3g吋，使用5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉可很好地溶解樣品，調(diào)節(jié)pH值時(shí)鹽酸的用量最少。
本發(fā)明在提取pH值的選擇上做出了創(chuàng)新，樣品被氫氧化鈉溶液溶解后，需要調(diào)節(jié)PH值，保證總皂苷被充分提取而不被水解。本發(fā)明在大量試驗(yàn)的前提下，最終重點(diǎn)研究了pH值為5、6、7吋，總皂苷的回收率，發(fā)現(xiàn)在pH值為7時(shí)的回收率最好，可能原因是由于在酸性條件下，蜂膠重新析出時(shí)包埋了部分皂苷所致。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步的詳細(xì)說明，以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實(shí)施例。實(shí)施例。本實(shí)施例中以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法包括標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序、樣品處理工序、試液過柱エ序、顯色エ序和總皂苷計(jì)算エ序。在標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，分別吸取Oml、10ml、20ml、40ml、60ml、80ml、IOOml和120ml濃度為2.0mg/mL的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液置于八個(gè)蒸發(fā)皿中，待蒸發(fā)皿中的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液干燥后，先加入5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉溶液，再加水20ml，搖勻后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值為6.5-7.0，從而得八份標(biāo)準(zhǔn)母液，將八份標(biāo)準(zhǔn)母液置于50°C的水浴中超聲30min破乳，冷卻到常溫，分別采用50ml的容量瓶用水定容到50ml，搖勻后過濾，棄去5ml初濾液，取1.0ml續(xù)濾液做為標(biāo)準(zhǔn)試液，從而得到八份標(biāo)準(zhǔn)試液。采用層析柱對(duì)每份標(biāo)準(zhǔn)試液進(jìn)行過柱操作，所用的層析柱的長(zhǎng)20cm-25cm，內(nèi)徑0.6cm-0.8cm,頂部接30ml的！)&液漏斗；層析柱內(nèi)裝6cm高的Amberlite_XAD_2大孔樹脂，上加高Icm的中性氧化鋁。先用25mL體積百分比為70%的こ醇洗柱，棄去洗脫液，再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL標(biāo)準(zhǔn)試液，過柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，用25mL體積百分比為70%的こ醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，放水浴中揮干，從而得到八個(gè)揮發(fā)后的蒸發(fā)皿。在已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL體積百分比為5%的香草醛冰こ酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.SmL高氯酸，混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，放在60°C以下的水浴中加熱lOmin，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰こ酸5.0mL，搖勻后，以Icm比色皿于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定，從而得到八個(gè)吸光度值。ー個(gè)吸光度值和ー個(gè)蒸發(fā)皿中含有的人參皂苷的質(zhì)量相對(duì)應(yīng)，采用吸光度值和人參皂苷的質(zhì)量做曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用EXCEL軟件，求得該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.0036x-0.0043，其中，y表示吸光度值，I的單位為A，X表示人參皂甙的質(zhì)量，X的單位為mg，該回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2=0.9937，說明在20mg-240mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。本發(fā)明中的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程可以為y=ax+b，其中，y表示吸光度值，x表示人參皂甙的質(zhì)量，a為正數(shù)，b為任意數(shù)。在樣品處理工序中，取以蜂膠為原料的保健食品0.3g置于50ml容量瓶中，加入5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉溶液來(lái)溶解保健食品，待保健食品溶解后，加水20ml，搖勻后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值為6.5-7.0，在50°C的水浴中超聲30min破乳，冷卻到常溫，用水定容到50ml，搖勻后過濾，棄去5ml初濾液，取1.0ml續(xù)濾液做為待測(cè)試液。本發(fā)明在使用氫氧化鈉溶液來(lái)溶解保健食品時(shí)，可以采用振搖分散的方式或者采用超聲輔助分散的方式進(jìn)行溶解；用于調(diào)節(jié)PH值的鹽酸可以為體積百分比為10%的鹽酸；以蜂膠為原料的保健食品通常是磨成粉末狀的。
在試液過柱エ序中，采用層析柱對(duì)待測(cè)試液進(jìn)行過柱操作，所用的層析柱的長(zhǎng)20cm-25cm,內(nèi)徑0.6cm_0.8cm,頂部接30ml的！)&液漏斗；層析柱內(nèi)裝6cm高的Amberl ite-XAD-2大孔樹脂，上加高Icm的中性氧化鋁。先用25mL體積百分比為70%的こ醇洗柱，棄去洗脫液，再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL待測(cè)試液，過柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，用25mL體積百分比為70%的こ醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，放水浴中揮干，得到待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿。在顯色エ序中，在待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL體積百分比為5%的香草醛冰こ酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.SmL高氯酸，混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，放在60°C以下的水浴中加熱lOmin，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰こ酸5.0mL,搖勻后，以1cm比色皿于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定，從而得到待測(cè)試液的吸光度值，該吸光度值和以蜂膠為原料的保健食品相對(duì)應(yīng)。在總皂苷計(jì)算エ序中，將待測(cè)試液的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程中，得到待測(cè)試液中含有的人參皂苷的質(zhì)量，從而得到以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的含量。本發(fā)明可以采用由北京普析通用儀器有限責(zé)任公司制造的TU-1810SPC紫外可見分光光度計(jì)來(lái)測(cè)定吸光度值，可以采用Sartorius BS224S分析天平來(lái)稱取樣品，可以采用PH精密試紙來(lái)測(cè)pH值。本發(fā)明中以蜂膠、西洋參提取物為主要原料生產(chǎn)的片劑是由杭州蜂之語(yǔ)蜂業(yè)股份有限公司提供的；所用的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品是中國(guó)藥品生物制品檢定所的，批號(hào)是110754-200822，質(zhì)量百分含量是88.8% ;所用的正丁醇、氫氧化鈉、鹽酸、甲醇、こ醇、冰こ酸、高氯酸均為分析純；中性氧化鋁是層析用的；水可以是雙重蒸餾水。下面對(duì)本發(fā)明中的測(cè)定方法的線性范圍、檢測(cè)限、回收率和精密度進(jìn)行分析。線性關(guān)系:將濃度為2.0mg/mL的人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)溶液0ml、10ml、20ml、40ml、60ml,80mlUOOml和120ml放在蒸發(fā)皿中，放在低于60°C的水浴中揮干，或熱風(fēng)吹干(勿使過熱)。以y表示吸光度值(A)，X表示人參皂甙Re質(zhì)量(mg)，用EXCEL軟件，求得方法的回歸方程為y=0.0036x-0.0043，相關(guān)系數(shù)R2=0.9937，說明在20mg_240mg的范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
權(quán)利要求
1.ー種以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:該測(cè)定方法包括標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序、樣品處理工序、試液過柱エ序、顯色エ序和總皂苷計(jì)算エ序； 所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，分別吸取Oml、10ml、20ml、40ml、60ml、80ml、IOOml和120ml已知濃度的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液置于八個(gè)蒸發(fā)皿中，待蒸發(fā)皿中的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液干燥后，先加入5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉溶液,再加水20ml,搖勻后用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.0，從而得八份標(biāo)準(zhǔn)母液，將八份標(biāo)準(zhǔn)母液置于45-55°C的水浴中超聲20_40min破乳，冷卻到常溫，分別采用50ml的容量瓶用水定容到50ml，搖勻后過濾，棄去5ml初濾液，取1.0ml續(xù)濾液做為標(biāo)準(zhǔn)試液，從而得到八份標(biāo)準(zhǔn)試液；采用層析柱對(duì)每份標(biāo)準(zhǔn)試液進(jìn)行過柱操作，先用25mL體積百分比為70%的こ醇洗柱，棄去洗脫液,再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL標(biāo)準(zhǔn)試液，過柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，用25mL體積百分比為70%的こ醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，放水浴中揮干，從而得到八個(gè)揮發(fā)后的蒸發(fā)皿；在已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL體積百分比為5%的香草醛冰こ酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.SmL高氯酸，混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，放在60°C以下的水浴中加熱lOmin，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰こ酸5.0mL，搖勻后，以Icm比色皿于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定，從而得到八個(gè)吸光度值；ー個(gè)吸光度值和ー個(gè)蒸發(fā)皿中含有的人參皂苷的質(zhì)量相對(duì)應(yīng)，采用吸光度值和人參皂苷的質(zhì)量做曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線； 所述樣品處理工序中，取以蜂膠為原料的保健食品0.3g置于50ml容量瓶中，加入5ml摩爾濃度為0.1M的氫氧化鈉溶液來(lái)溶解保健食品,待保健食品溶解后,加水20ml，搖勻后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值為6.5-7.0，在45-55°C的水浴中超聲20_40min破乳，冷卻到常溫，用水定容到50ml，搖勻后過濾，棄去5ml初濾液，取1.0ml續(xù)濾液做為待測(cè)試液； 所述試液過柱エ序中，采用層析柱對(duì)待測(cè)試液進(jìn)行過柱操作，先用25mL體積百分比為70%的こ醇洗柱，棄去洗脫液,再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL待測(cè)試液，過柱，用25mL的水洗柱，以洗 去糖份等水溶性雜質(zhì),棄去洗脫液,用25mL體積百分比為70%的こ醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，放水浴中揮干，得到待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿；所述顯色エ序中，在待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL體積百分比為5%的香草醛冰こ酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.SmL高氯酸，混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，放在60°C以下的水浴中加熱lOmin，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰こ酸5.0mL，搖勻后，以Icm比色皿于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定，從而得到待測(cè)試液的吸光度值，該吸光度值和以蜂膠為原料的保健食品相對(duì)應(yīng)； 所述總皂苷計(jì)算エ序中，將待測(cè)試液的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到待測(cè)試液中含有的人參皂苷的質(zhì)量，從而得到以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:在標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中和試液過柱エ序中，所用的層析柱的長(zhǎng)20cm-25cm，內(nèi)徑0.6cm-0.8cm,頂部接30ml的！)&液漏斗；層析柱內(nèi)裝6cm高的Amberlite_XAD_2大孔樹脂，上加高Icm的中性氧化鋁。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在干:在樣品處理工序中，使用氫氧化鈉溶液來(lái)溶解保健食品時(shí)，采用振搖分散的方式或者超聲輔助分散的方式進(jìn)行溶解。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:在樣品處理工序中，向已經(jīng)溶解的保健食品中加入20ml水并搖勻后，用于調(diào)節(jié)pH值的鹽酸為體積百分比為10%的鹽酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=ax+b，其中，y表示吸光度值，x表示人參阜式的質(zhì)量，a為正數(shù)，b為任意數(shù)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作エ序中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.0036x-0.0043，表示吸光度值的I的單位為A，表示人參皂甙的質(zhì)量的X的單位為mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:所述回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2=0.9937，說明在20mg-240mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，其特征在于:所述樣品處理工序中，以蜂膠為原料的保健食品是磨成粉末狀的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法， 其特征在于:所述人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為2.0mg/mL。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種保健食品中總皂苷的測(cè)定方法，尤其是涉及一種以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的測(cè)定方法。本發(fā)明包括標(biāo)準(zhǔn)曲線制作工序、樣品處理工序、試液過柱工序、顯色工序和總皂苷計(jì)算工序，標(biāo)準(zhǔn)曲線制作工序中，采用吸光度值和人參皂苷的質(zhì)量做曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品處理工序中，取以蜂膠為原料的保健食品0.3g得到待測(cè)試液，試液過柱工序中，采用層析柱對(duì)待測(cè)試液進(jìn)行過柱操作，得到待測(cè)試液揮干蒸發(fā)皿，顯色工序中，得到待測(cè)試液的吸光度值，總皂苷計(jì)算工序中，得到以蜂膠為原料的保健食品中總皂苷的含量。本發(fā)明提取方法簡(jiǎn)單，回收率高，準(zhǔn)確性好，簡(jiǎn)便快速。
文檔編號(hào)G01N1/34GK103115887SQ20131003576
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月30日
發(fā)明者周萍 申請(qǐng)人:杭州蜂之語(yǔ)蜂業(yè)股份有限公司