專利名稱：一種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選方法及測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物絮凝領(lǐng)域，具體涉及ー種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選方法及測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
絮凝技術(shù)是目前國內(nèi)外一種既經(jīng)濟(jì)又簡(jiǎn)便的高效水處理技木，生物絮凝劑因其具有超強(qiáng)的絮凝能力，而受到廣泛的關(guān)注，因此是ー種有著良好發(fā)展前景的新型絮凝劑。目前國內(nèi)外的生物絮凝劑主要通過篩選高產(chǎn)絮凝劑菌株獲得，我國生物絮凝劑的開發(fā)仍處于ー個(gè)相對(duì)落后的階段，生物絮凝劑的生產(chǎn)成本較高，針對(duì)性不強(qiáng)，環(huán)境適應(yīng)性差，因此篩選高產(chǎn)絮凝劑菌株從而獲得生物絮凝劑應(yīng)用的前景廣闊。目前關(guān)于絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選，主要將分離得到的菌株進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，并在利用高嶺土懸浮液在三角瓶中篩選菌株。此方法，需要配置大量的絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基和高嶺土懸浮液，消耗大量的人力物力。篩選的過程中，通常利用分光光度計(jì)逐一檢測(cè)樣品的絮凝效果，耗時(shí)長(zhǎng)，檢測(cè)效率低。因此，為了提高凝劑產(chǎn)生菌的篩選效率，必須建立一種絮凝劑產(chǎn)生菌的高效篩選方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選方法。本發(fā)明提供的篩選方法，其為將10-100 UL絮凝劑產(chǎn)生菌的發(fā)酵液加入裝有
0.5-5mL高嶺土懸浮液的1-1OmL EP管中，振蕩1-lOmin，靜置5_20min，取1/2處深度的液層50-200 ii L，加入96孔板中，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm的光密度值。同時(shí)以蒸餾水代替發(fā)酵液作對(duì)照，確定菌株發(fā)酵液的絮凝活性。絮凝活性計(jì)算公
式為:絮凝率=(0D對(duì)照一OD樣品)/OD對(duì)照X 100%。其中，所述的高嶺土懸浮液含有0.2-0.8wt%的高嶺土和0.01-0.05wt%的CaCl2。在本發(fā)明ー個(gè)實(shí)施方案中，利用裝有0.5-5mL絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基的1-1OmL EP管對(duì)絮凝劑產(chǎn)生菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得發(fā)酵液。其中，所述的絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖10_30g/L，KH2P04l-3g/L, K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L,酵母膏 0.2-lg/L, (NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4 7H200.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。另ー方面，本發(fā)明還提供一種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌絮凝率的測(cè)定方法，其為將IO-1OOiI L絮凝劑產(chǎn)生菌的發(fā)酵液加入裝有0.5-5mL高嶺土懸浮液的1-1OmL EP管中，振蕩1-lOmin，靜置5-20min，取1/2處深度的液層50-200 y L，加入96孔板中，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm的光密度值。同時(shí)以蒸餾水代替發(fā)酵液作對(duì)照，確定菌株發(fā)酵液的絮凝活性。絮凝活性計(jì)算公 式為:絮凝率=(0D對(duì)照一OD樣品)/OD對(duì)照X 100%。其中，所述的高嶺土懸浮液含有0.2-0.8wt%的高嶺土和0.01-0.05wt%的CaCl2。
在本發(fā)明ー個(gè)實(shí)施方案中，利用裝有0.5-5mL絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基的1-1OmL EP管對(duì)絮凝劑產(chǎn)生菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得發(fā)酵液。其中，所述的絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖10-30g/L，KH2P04l-3g/L, K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L,酵母膏 0.2-lg/L, (NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4 7H200.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選方法或水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌絮凝率的測(cè)定方法進(jìn)行改進(jìn)，建立了ー種快速、高效、經(jīng)濟(jì)的獲得絮凝劑產(chǎn)生菌的方法。該方法的產(chǎn)絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)過程和絮凝劑產(chǎn)生菌篩選過程，全部采用1-1OmL EP管代替?zhèn)鹘y(tǒng)三角瓶，采用96孔板和酶標(biāo)儀替代傳統(tǒng)的分光光度計(jì)測(cè)定光密度值。本發(fā)明方法避免了傳統(tǒng)篩選方法效率低，成本大，篩選勞動(dòng)強(qiáng)度大等缺點(diǎn)，大大提高了絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選效率，利用該方法從樣品中可以篩選得到高效產(chǎn)絮凝劑的菌株。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1將50株從污泥中分離到的菌株，分別接種于裝有ImL絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基(葡萄糖 20g/L, KH2P042g/L, K2HP045g/L,尿素 0.5g/L，酵母膏 0.5g/L，(NH4)2SO40.2g/L，MgSO4 7H200.2g/L, NaCl0.lg/L, pH7.0-7.4。)的 2mL EP 管中，37 °C，180r/min 進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)24小吋。用無菌水將培養(yǎng)后的50株菌的OD值調(diào)節(jié)一致。利用高嶺土制成高嶺土懸浮液(蒸餾水1し高嶺土 4g，CaCl20.2g)，將20 y L發(fā)酵液加入裝有ImL高嶺土懸浮液的2mL EP管中，在200r/min的搖床中震蕩2min，靜置lOmin，用移液槍吸取1/2處深度的液層100 u L，加入96孔板中，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm的光密度值。同時(shí)以蒸餾水代替發(fā)酵液作對(duì)照，確定菌株發(fā)酵液的絮 凝活性，絮凝活性以絮凝率表示。絮凝率=(ODw- OD) /OD5tfM X100%。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表:表150株不同來源的菌株絮凝活性
權(quán)利要求
1.一種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選方法，其為將10-100 UL絮凝劑產(chǎn)生菌的發(fā)酵液加入裝有0.5-5mL高嶺土懸浮液的1-1OmL EP管中，振蕩1-lOmin，靜置5_20min，取1/2處深度的液層50-200 u L，加入96孔板中，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm的光密度值。
2.按權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述的高嶺土懸浮液含有0.2-0.8wt%的高嶺土和 0.01-0.05wt% 的 CaCl20
3.按權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，發(fā)酵液的培養(yǎng)方法為:利用裝有0.5-5mL絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基的1-1OmL EP管對(duì)絮凝劑產(chǎn)生菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得發(fā)酵液。
4.按權(quán)利要求3所述的篩選方法，其特征在于，所述的絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖 10-30g/L, KH2P04l-3g/L，K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L，酵母膏 0.2-lg/L，(NH4)2SO40.1-0.5g/L, MgSO4 7H200.1-0.5g/L, NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。
5.一種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌絮凝率的測(cè)定方法，其為將10-100 u L絮凝劑產(chǎn)生菌的發(fā)酵液加入裝有0.5-5mL高嶺土懸浮液的1-1OmL EP管中，振蕩1-lOmin，靜置5_20min，取1/2處深度的液層50-200 u L，加入96孔板中，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm的光密度值。
6.按權(quán)利要求5所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述的高嶺土懸浮液含有0.2-0.8wt%的高嶺土和 0.01-0.05wt% 的 CaCl20
7.按權(quán)利要求5所述的測(cè)定方法，其特征在于，發(fā)酵液的培養(yǎng)方法為:利用裝有 0.5-5mL絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基的1-1OmL EP管對(duì)絮凝劑產(chǎn)生菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得發(fā)酵液。
8.按權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述的絮凝劑發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖 10-30g/L, KH2P04l-3g/L，K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L,酵母膏 0.2-lg/L,(NH4)2SO40.1-0.5g/L, MgSO4 7H200.1-0.5g/L, NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種水產(chǎn)用絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選方法，其為將10-100μL絮凝劑產(chǎn)生菌的發(fā)酵液加入裝有0.5-5mL高嶺土懸浮液的1-10mL EP管中，振蕩1-10min，靜置5-20min，取1/2處深度的液層50-200μL，加入96孔板中，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm的光密度值。該方法避免了傳統(tǒng)篩選方法效率低，篩選勞動(dòng)強(qiáng)度大等缺點(diǎn)，大大提高了絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選效率，利用該方法從樣品中篩選得到高效產(chǎn)絮凝劑的菌株。
文檔編號(hào)G01N21/00GK103088107SQ201310029598
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者陳慧鑫, 吳雅琨, 何增國, 王安如, 付維來, 孫曉雯, 汪攀, 張軍 申請(qǐng)人:北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司, 天津昌農(nóng)科技有限責(zé)任公司, 湖南大北農(nóng)農(nóng)業(yè)科技有限公司