專利名稱：酶法甘油三酯測定方法及測定試劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗技術領域，具體涉及一種酶法甘油三酯測定方法及測定試劑。
背景技術：
甘油三酯(Triglyceride，TG)是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用TG分解產(chǎn)物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進行TG的合成，在脂肪組織中貯存。中華醫(yī)學會檢驗分會于1995年推薦兩步酶法作為血清TG常規(guī)測定方法，該法用脂蛋白脂肪酶(LPL)水解TG生成甘油和脂肪酸；水解后的甘油和三磷酸腺苷(ATP)在甘油激酶(GK)和甘油磷酸氧化酶(甘油-3-磷酸氧化酶GP0)的催化下生成H2O2,在過氧化物酶 ( ( )催化下，11202，4氨基安替比林(444 )和2，4-二氯酚(也有使用4-氯酚、苯酚的衍生物、苯胺鹽和苯磺酸鹽，下面就以2，4-二氯酚為代表敘述，其他色原不再重復提起，)形成有色染料(常為醌亞胺類)，這些物質(zhì)的生成量與樣本中的TG含量成正比，最后通過分光光度法計算出相應的TG濃度。具體反應見化學反應式f 4。
權利要求
1.一種酶法甘油三酯測定方法，其特征在于利用酶法甘油三酯測定試劑的試劑I中的過氧化氫酶消除游離甘油產(chǎn)生的H2O2，進而由試劑2中的過氧化氫酶抑制劑抑制試劑I中的過氧化氫酶，從而測定樣本中甘油三酯含量的方法。
2.—種權利要求I所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于該試劑由試劑I和試劑2組成，其中試劑I、試劑2中的各組分及組分濃度范圍為 試劑I : 緩沖液(pH7.0~8.5) 50-500 mmol/L 甘油激酶1-100 KU/L甘油磷酸氧化酶1-100 KU/L三磷酸腺苷1-100 mmol/L抗壞血酸氧化酶1-100 KU/L過氧化氫酶0. i-20 KU/L色原1-100 mmol/L硫酸鎂1-100 mmol/L表面活性劑0. 1-100 g/L穩(wěn)定劑1-100 mmol/L防腐劑0. 1-I0O ml/L； 試劑2 緩沖液(pH 6. 0-8. 0) 50-500 mmol/L 脂蛋白脂肪酶1-100 KU/L4_氨基安替比林0.5-50 mmol/L過氧化物酶1-100 KU/L抑制劑1-100 ram 1/L穩(wěn)定劑1-100 mmol/L防腐劑0. 1-100 ml/L。
3.根據(jù)權利要求2所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述緩沖液可以是磷酸緩沖液、三羥甲基氨基緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、N-2羥乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸緩沖液、N-三(羥甲基)甲氨基-2-羥基丙磺酸緩沖液、N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸緩沖液、哌嗪-N，N-雙(2-羥基乙烷磺酸)緩沖液、3-嗎啉-2-羥基丙磺酸鈉緩沖液、3-(N-嗎啡啉)乙磺酸鈉緩沖液、4- (2-羥乙基)哌嗪-1-2-羥基丙磺酸緩沖液、N-(2-羥乙基)哌嗪-N’ -4- 丁磺酸緩沖液、3-雙(2-羥乙基)氨基-2-羥基丙磺酸緩沖液、3-(環(huán)已胺)-2-羥基-I-丙磺酸緩沖液、4- (2-羥乙基)-I-哌嗪丙磺酸緩沖液、3_(環(huán)已胺)-1_丙磺酸緩沖液、3-嗎啉丙磺酸緩沖液、N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液中的一種或幾種。
4.根據(jù)權利要求2所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述色原包括酚類化合物，和/或苯胺類似物，3-羥基-2，4，6-三碘苯甲酸的一種。
5.根據(jù)權利要求4所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述的酚類化合物為2-氯酚，2，4- 二氯苯酚，4-氯酚，2，6- 二氯苯酚；所述的苯胺類似物為N-乙基-N-(2-羥基-3-丙磺基)間甲苯胺，N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽，N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基1)-3-甲氧基苯胺鈉鹽(二水合物)，N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺鈉鹽，N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺鈉鹽，N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺鈉鹽，N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3，5- 二甲氧基苯胺鈉鹽，N- (2-羥基-3-磺丙基)-35- 二甲氧基苯胺鈉鹽，N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)_3，5- 二甲基苯胺鈉鹽。
6.根據(jù)權利要求2所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述的抑制劑為疊氮化物，羥胺，氟化物，醋酸鹽，甲酸鹽，乙醇、甲醇中的一種。
7.根據(jù)權利要求2所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述的防腐劑為自山梨酸鉀、苯甲酸鈉、亞硝酸鈉、proclin系列防腐劑中的一種或幾種。
8.根據(jù)權利要求2所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述的穩(wěn)定劑為聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、牛血清白蛋白中的一種或者幾種。
9.根據(jù)權利要求2所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述的表面活性劑為非離子表面活性劑。
10.根據(jù)權利要求9所述的酶法甘油三酯測定方法的測定試劑，其特征在于所述的表面活性劑為為TWEEN系列、SPAN系列、TRITON系列中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開一種利用酶法甘油三酯測定試劑的試劑1中的過氧化氫酶消除游離甘油產(chǎn)生的H2O2，進而由試劑2中的過氧化氫酶抑制劑抑制試劑1中的過氧化氫酶，從而測定樣本中甘油三酯含量的方法。本發(fā)明采用過氧化氫酶消除游離甘油產(chǎn)生的H2O2，產(chǎn)生的水和氧氣不會造成本底升高，試劑中的過氧化氫酶在檢測反應時被抑制劑完全抑制，不會對反應造成影響；因此本發(fā)明可規(guī)避以過氧化物酶氧化H2O2造成不穩(wěn)定地本底升高、致使檢測結(jié)果準確度、精密度不好的問題；因此，本發(fā)明具有準確度、精密度均較好的優(yōu)點。
文檔編號G01N21/31GK102706818SQ20121018783
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月5日 優(yōu)先權日2012年6月5日
發(fā)明者沃燕波, 鄒炳德, 鄒繼華 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司