專利名稱：用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，具體是用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法。
背景技術(shù)：
胱氨酸是氨基酸類藥物，有促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞氧化和還原功能，增加白血球和阻止病原菌發(fā)育等作用，主要用于繼發(fā)性脫發(fā)癥、慢性肝炎的治療。因此，藥物的質(zhì)量監(jiān)控具有十分重要的意義。目前，檢測胱氨酸的方法主要有單掃描極譜法，原子吸收光譜法，滴定法，比色法，熒光光譜法，分光光度法，化學(xué)發(fā)光法，溶出伏安法，共振散射光譜法等。這些測定胱氨酸的方法當(dāng)中，有的操作復(fù)雜，有的靈敏度不夠，因此尋求一種靈敏的方法十分必要。表面增強(qiáng)拉曼光譜是ー種非常有效的探測界面特性和分子間相互作用、表征表面分子吸附行為和分子結(jié)構(gòu)的工具，具有快速、靈敏、信息豐富、選擇性高等特點(diǎn)。近年來，表面增強(qiáng)拉曼光譜被廣泛地應(yīng)用于表面吸附、電化學(xué)和催化反應(yīng)、化學(xué)和生物傳感器、生物醫(yī)學(xué)檢測及痕量分析等領(lǐng)域，并對(duì)表面增強(qiáng)拉曼光譜活性基底、增強(qiáng)機(jī)理、探針分子、檢測技術(shù)等方面進(jìn)行了研究，取得了較好的結(jié)果。但表面增強(qiáng)拉曼光譜定量分析的研究報(bào)道不多，這與重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性好的表面增強(qiáng)拉曼光譜活性基底不多有夫。納米銀溶膠基底具有生物相容性好、制備簡便、價(jià)格低廉、表面增強(qiáng)拉曼光譜活性高等特點(diǎn)，但聚集納米銀溶膠基底穩(wěn)定性和重現(xiàn)性有待改善。2-巰基吡啶分子具有較強(qiáng)的表面增強(qiáng)拉曼光譜活性，可以作為表面增強(qiáng)拉曼光譜的探針分子。基于納米銀ー2-巰基吡啶表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供ー種用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法。該方法選擇性好、穩(wěn)定性好、靈敏度高，操作簡便，試劑易得。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的技術(shù)方案是在pH 6. 6的磷酸氫ニ鈉-磷酸ニ氫鈉緩沖溶液中，納米銀分散均勻，加入2-巰基吡啶溶液時(shí)，拉曼信號(hào)極弱；但當(dāng)加入氯化鈉溶液后，納米銀發(fā)生聚集，2-巰基吡啶吸附在納米銀聚集體表面產(chǎn)生表面增強(qiáng)拉曼散射效應(yīng)。在選定條件下，2-巰基吡啶濃度與表面增強(qiáng)拉曼強(qiáng)度增強(qiáng)值呈良好線性關(guān)系。當(dāng)有胱氨酸存在吋，可導(dǎo)致2-巰基吡啶分子的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度線性減弱，據(jù)此可建立測定胱氨酸的定量分析方法。用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法，包括如下步驟
(O制備已知濃度的胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)測試體系于5 mL刻度試管中，依次加入350 1000 19.9 mg/L納米銀溶液、30 200 μ 0.2 mo I/L pH 6.6的磷酸氫ニ鈉-磷酸ニ氫鈉緩沖溶液，10 100 μ 1·0Χ1(Γ5 mol/L 2-巰基吡啶溶液、10 60 μ 2. OXlO-5 mol/L胱氨酸，20 100 μ 2.0 mol/L氯化鈉溶液，搖勻，用二次蒸餾水定容到2. O mL，置于超聲波儀超聲15分鐘；
(2)按步驟(I)的方法不加胱氨酸制備空白對(duì)照體系；(3)取上述體系的溶液分別置于石英比色皿中，在拉曼光譜儀上，設(shè)定儀器參數(shù)，掃描獲得體系的表面增強(qiáng)拉曼光譜，測定1002 cm-1處的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為I，同時(shí)測定空白對(duì)照體系的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為Jtl，計(jì)算△/ =I0- I'
(4)以ΛJ對(duì)胱氨酸的濃度關(guān)系做工作曲線；
(5) 依照步驟(I)的方法制備待檢測樣品分析溶液，其中加入的胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液替換為被測樣品溶液，并按步驟(3)的方法測定被測樣品分析溶液的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值
為i樣品，計(jì)算樣品=Aゴ樣品；
(6)依據(jù)步驟(4)的工作曲線，計(jì)算出被測樣品中胱氨酸的含量。所述的胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法是每100毫克胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品加O. I mol/L鹽酸溶液10 mL使溶解，再用二次蒸餾水稀釋至需要的濃度。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是
與已有的方法相比，本測定方法的儀器簡單，選擇性好、穩(wěn)定性好、靈敏度高，操作簡便，試劑易得。


圖I為本發(fā)明具體實(shí)施方式
中的部分表面增強(qiáng)拉曼散射光譜圖。圖中，a:是空白對(duì)照體系，含有7. 46 mg/L納米銀溶液-pH 6.6磷酸氫ニ鈉-磷酸ニ氫鈉緩沖溶液-2. O X 10_7 mol/L 2-巰基吡啶溶液-O. 07 mol/L氯化鈉溶液；b :標(biāo)準(zhǔn)測試體系，含有7. 46 mg/L納米銀溶液-pH 6.6磷酸氫ニ鈉-磷酸ニ氫鈉緩沖溶液-2. O X 10_7 mol/L 2-巰基吡啶溶液-O. 07 mol/L氯化鈉溶液-2. O X 10_7 mol/L胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；c :標(biāo)準(zhǔn)測試體系，含有7. 46 mg/L納米銀溶液-pH 6.6磷酸氫ニ鈉-磷酸ニ氫鈉緩沖溶液-2. OX 10_7 mol/L 2-巰基吡啶溶液-O. 07 mol/L氯化鈉溶液-6. OX 10_7 mol/L胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步的闡述。實(shí)施例
用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法，包括如下步驟
(1)胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)測試體系制備在5mL刻度試管中，依次加入750 μ 19.9 mg/L納米銀溶液，100 μ 0.2 mol/L pH 6.6的磷酸氫ニ鈉-磷酸ニ氫鈉緩沖溶液，40 μ I. 0Χ10_5mol/L 2-巰基吡啶溶液，10、20、30、50、60 μ 2. OXlO-5 mol/L 胱氨酸，70 μ 2. O mol/L氯化鈉溶液，搖勻，用二次蒸餾水定容到2. O mL，置于超聲波儀超聲15分鐘；
(2)按步驟(I)的方法不加胱氨酸制備空白對(duì)照體系；
(3)取上述體系的溶液分別置于石英比色皿中，在DXRsmart拉曼光譜儀上，設(shè)定儀器參數(shù)，掃描獲得體系的表面增強(qiáng)拉曼散射光譜，測定1002 cm—1處的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為/，同時(shí)測定空白對(duì)照體系的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為Z0,計(jì)算Λ J =I0- I'
(4)以ΛJ對(duì)胱氨酸的濃度關(guān)系做工作曲線，獲得工作曲線為Λ/=1. 38 C+51.2，胱氨酸濃度C的單位為mol/L，線性范圍為I. OX 10_7 6. OX 10_7 mol/L ；
(5)制備兩個(gè)樣品測試體系取規(guī)格為50mg的胱氨酸片20片,稱定重量為I. 3262 g,研細(xì)，稱取O. 0652g兩份，置于100 mL容量瓶中，按每IOOmg胱氨酸加入10 mL O. I mol/L鹽酸溶液，振搖，使胱氨酸溶解，再用二次蒸餾水稀釋至100 mL，混勻；移取I. O mL，置于10mL容量瓶中，再用二次蒸餾水稀釋至10 mL，混勻；再移取O. 2 mL，依照步驟(I)的方法制備待檢測樣品分析溶液，其中加入的胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液替換為被測樣品，并按步驟(3)的方法測定被測樣品分析溶液的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為，計(jì)算NI關(guān)ニI0-I關(guān);
(6)依據(jù)步驟(4)的工作曲線，計(jì)算出被測樣品中胱氨酸的含量為99. 89%，99. 92%。
權(quán)利要求
1.用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法，其特征是包括如下步驟 (1)制備胱氨酸的標(biāo)準(zhǔn)測試體系于5mL刻度試管中，依次加入350 1000 ML 19. 9mg/L納米銀溶液、30 200 ML 0.2 mo I/L pH 6.6的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液，10 100 ML LOXKT5 mol/L 2-巰基吡啶溶液、10 60 ML 2. OXKT5 mol/L胱氨酸，20 100 ML 2.0 mol/L氯化鈉溶液，搖勻，用二次蒸餾水定容到2. 0 mL，置于超聲波儀超聲15分鐘； (2)按步驟(I)的方法不加胱氨酸制備空白對(duì)照體系； (3)取上述體系的溶液分別置于石英比色皿中，在拉曼光譜儀上，設(shè)定儀器參數(shù)，掃描獲得體系的表面增強(qiáng)拉曼光譜，測定1002 cm-1處的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為I，同時(shí)測定空白對(duì)照體系的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為Jtl，計(jì)算△/ =I0- I' (4)以AJ對(duì)胱氨酸的濃度關(guān)系做工作曲線； (5)依照步驟(I)的方法制備待檢測樣品分析溶液，其中加入的胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液替換為被測樣品溶液，并按步驟(3)的方法測定被測樣品分析溶液的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為I樣品，計(jì)算A J樣品=A-J樣品； (6)依據(jù)步驟(4)的工作曲線，計(jì)算出被測樣品中胱氨酸的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是所述的胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法是每100毫克胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品加0.1 mol/L鹽酸溶液10 mL使溶解，再用二次蒸餾水稀釋至需要的濃度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用表面增強(qiáng)拉曼光譜測定胱氨酸的方法，包括如下步驟1、制備已知濃度胱氨酸的分析溶液，測定其1002cm-1處的表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為I；2、制備不含胱氨酸的空白對(duì)照體系，亦測定其表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為I0；3、計(jì)算ΔI=I0-I；4、以ΔI對(duì)胱氨酸的濃度C做工作曲線；5、制備被測樣品分析溶液，測定其表面增強(qiáng)拉曼散射峰強(qiáng)度值為I樣品，計(jì)算ΔI樣品=I0-I樣品；6、依據(jù)工作曲線，計(jì)算出被測樣品中的胱氨酸的濃度。本發(fā)明與已有的方法相比，本測定方法操作簡便，試劑易得，靈敏度高，選擇性好。
文檔編號(hào)G01N21/65GK102661943SQ201210123459
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者梁愛惠, 蔣治良, 韋燕燕 申請(qǐng)人:廣西師范大學(xué)