專利名稱：一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方3 的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，特別涉及一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
益腎養(yǎng)元合劑是由何首烏、狗脊、補(bǔ)骨脂、黃精、菟絲子、金櫻子、當(dāng)歸、陳皮八味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有補(bǔ)益肝腎，健脾益氣，澀精止遺的功效，用于肝腎不足，脾氣虛弱，面色萎黃，倦怠納差，腰膝酸痛，遺精夢(mèng)泄。該產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第20冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為WS3-B-3971-98，標(biāo)準(zhǔn)中只有三個(gè)簡(jiǎn)單的化學(xué)鑒別項(xiàng)目，無含量測(cè)定指標(biāo)，現(xiàn)有技術(shù)中沒有關(guān)于益腎養(yǎng)元合劑含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道，為了更好的控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，保證患者服用的藥物確實(shí)有效，有必要對(duì)含量測(cè)定方法進(jìn)行研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法可以同時(shí)測(cè)定益腎養(yǎng)元合劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素2種有效成分的含量。具體的技術(shù)方案如下一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方法，所述益腎養(yǎng)元合劑是由何首烏、狗脊、補(bǔ)骨脂、黃精、菟絲子、金櫻子、當(dāng)歸、陳皮八味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，采用HPLC測(cè)定益腎養(yǎng)元合劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，包括如下步驟(1)制備供試品溶液取益腎養(yǎng)元合劑25ml置IOOml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，取濾液5ml 置IOml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得；(2)制備對(duì)照品溶液精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥后的補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，甲醇溶解定容，制成每Iml各含補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素10 μ g的對(duì)照品溶液；(3)測(cè)定色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為體積比35 65 的甲醇和水；檢測(cè)波長(zhǎng)為M6nm ；流速為0. 5-1. 5ml · mirT1 ；柱溫35°C ；峰面積外標(biāo)法定量；精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液和供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。優(yōu)選地，所述步驟(3)中流速為1. Oml · mirT1。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明的質(zhì)量分析方法在同一色譜條件下檢出補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素兩個(gè)有效成分，檢測(cè)方法經(jīng)過參數(shù)的最優(yōu)化組合，從而使本發(fā)明的檢測(cè)方法靈敏度高，具有很好的分離度，基線穩(wěn)定，陰性對(duì)照無干擾，檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性、線性關(guān)系、穩(wěn)定性均能達(dá)到科研和生產(chǎn)的要求。


圖1補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素對(duì)照?qǐng)D譜(1峰為補(bǔ)骨脂素，2峰為異補(bǔ)骨脂素)；圖2陰性空白對(duì)照?qǐng)D譜；圖3實(shí)施例1供試品溶液圖譜。
具體實(shí)施例方式益腎養(yǎng)元合劑是由何首烏、狗脊、補(bǔ)骨脂、黃精、菟絲子、金櫻子、當(dāng)歸、陳皮八味中藥組成的中藥復(fù)方制劑。以下通過具體實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例1 一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方法采用HPLC法測(cè)定益腎養(yǎng)元合劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，包括以下步驟(1)制備供試品溶液樣品溶液的制備取益腎養(yǎng)元合劑25ml置IOOml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻， 過濾，取續(xù)濾液5ml置IOml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得；(2)制備對(duì)照品溶液精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥Mh的補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，甲醇溶解定容，制成每Iml各含補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素10 μ g的對(duì)照品溶液；(3)測(cè)定色譜條件色譜柱為AgilentClS柱(以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 150mmX4. 6mm, 5m)；流動(dòng)相為體積比35 65的甲醇和水；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm ；流速 1. Oml · min-1 ；柱溫35 °C ；峰面積外標(biāo)法定量；精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液和供試品溶液20 μ 1 (供試品溶液圖譜見圖幻，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本發(fā)明所檢測(cè)的益腎養(yǎng)元合劑中按補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算的理論塔板數(shù)不應(yīng)低于4000，分離度大于1. 5。取三批樣品，按照該實(shí)施例的方法進(jìn)行補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算樣品補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，測(cè)定結(jié)果如表1。表1樣品含量測(cè)定結(jié)果
補(bǔ)骨脂素(pg/ml )異補(bǔ)骨脂素(pg/ml )
批號(hào) -
12 平均值 12 平均值批號(hào)1 50. 89 49. 01 49. 95 70. 59 68. 72 69. 66 批號(hào) 2 48. 76 46.99 47. 88 66.45 64. 28 65.36 批號(hào) 3 52.11 53. 50 52. 80 60. 22 61.65 60. 94實(shí)施例2 —種益腎養(yǎng)元合劑的質(zhì)量分析方法的條件篩選及方法學(xué)驗(yàn)證1、提取溶劑的選擇補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在乙醇和甲醇中的溶解度一致，但乙醇稀釋得到的樣品溶液較粘稠，雜質(zhì)和樣品中的糖分在乙醇中較甲醇中溶解多，故選用甲醇作為溶劑。2、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取上述補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品混合溶液，在紫外分光光度計(jì)上于波長(zhǎng) 200nm 500nm處掃描，結(jié)果在M6nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，故以M6nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。3、流動(dòng)相的選擇甲醇與水的體積比例達(dá)到35 65時(shí)，主峰與雜質(zhì)峰之間有較好的分離，而且整個(gè)分析過程在25min內(nèi)可以完成。4、柱溫的選擇在25 45°C范圍內(nèi)選擇25°C、35°C、45°C試驗(yàn)，結(jié)果35°C時(shí)分離度達(dá)到1. 58，達(dá)到很好的分離效果，故選用35°C。5、方法學(xué)驗(yàn)證(1)線性關(guān)系的考察精密稱取補(bǔ)骨脂素10. Olmg、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品10. 22mg,分別置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用流動(dòng)相按比例稀釋成補(bǔ)骨脂素濃度為2. 002、 4. 004,8. 008、10. 01,20. 02,40. 04 μ g · ι Γ1,異補(bǔ)骨脂素濃度為 2. 044,4. 088,8. 176、 10. 22,20. 44,40. 88 μ g -πιΓ1的標(biāo)準(zhǔn)液。按上述色譜條件進(jìn)樣20 μ 1，記錄峰面積。以峰面積 (y)為縱坐標(biāo)、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素進(jìn)樣濃度(χ)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 補(bǔ)骨脂素Y = 179. 879X-18. 008，r為0. 99995，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂素在40. (Mng 800. 8ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；異補(bǔ)骨脂素線性方程Y = 164. 772128X-16. 595372，r為0. 99996， 結(jié)果表明異補(bǔ)骨脂素在40. 88ng 817. 6ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。(2)專屬性試驗(yàn)按處方比例，制備缺味(補(bǔ)骨脂)中藥的陰性空白對(duì)照液，照上述樣品溶液的制備方法制成陰性空白對(duì)照溶液，進(jìn)樣，陰性對(duì)照色譜圖在補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品出峰處沒有干擾峰出現(xiàn)，故樣品中的其他組分對(duì)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素測(cè)定無干擾作用(見圖 1、圖 2、圖 3)。(3)精密度試驗(yàn)取同一補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照溶液進(jìn)樣20μ 1，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積測(cè)得補(bǔ)骨脂素分別為 1438. 8、1436. 8、1433. 5、1436. 1,1434. 6、1439. 5，RSD ^ 0. 17% (n = 6)，異補(bǔ)骨脂素分別為 1351. 9,1348. 1,1345. 8,1344. 2、1346. 6,1345. 2，RSD 為 0. 21 % (η =
6)。結(jié)果表明精密度良好。(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批樣品溶液(批號(hào)Dl 1001)，按上述色譜條件測(cè)定6次，分別在第0，2，5，7，12，24h進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得補(bǔ)骨脂素RSD為2. 78%，異補(bǔ)骨脂素RSD為2. 61 %。 表明樣品溶液在Mh內(nèi)穩(wěn)定性良好。(5)重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批樣品溶液(批號(hào)D11001)按3. 1. 1項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制備供試液，平行測(cè)定，得補(bǔ)骨脂素的含量分別為46. 26,45. 25,48. 36,47. 17,47. 15、 46. 471^.1111-1,平均含量為46. TSygir1, RSD為2. 24% (n = 6)。異補(bǔ)骨脂素的含量分別 63. 62,61. 39,65. 38,64. 06,65. 55,63. 78 μ g · πιΓ1，平均含量為 63. 96 μ g · ι Γ1, RSD 為2. 36% (η = 6)。結(jié)果表明本方法重現(xiàn)性良好。(6)回收率試驗(yàn)采用加樣回收試驗(yàn)方法，取已知補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量的樣品(補(bǔ)骨脂素含量為46. 78 μ g .πιΓ1，異補(bǔ)骨脂素為63. 96 μ g .ml—1)的樣品6份，每份取樣12. 5ml，精密加入一定量的對(duì)照品，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定，計(jì)算結(jié)果(見表2、表3)。表2補(bǔ)骨脂素回收率測(cè)定結(jié)果(n = 6)
權(quán)利要求
1.一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方法，所述益腎養(yǎng)元合劑是由何首烏、狗脊、補(bǔ)骨脂、黃精、 菟絲子、金櫻子、當(dāng)歸、陳皮八味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，其特征在于，采用HPLC測(cè)定益腎養(yǎng)元合劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，包括如下步驟(1)制備供試品溶液取益腎養(yǎng)元合劑25ml置IOOml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，取濾液5ml置 IOml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得；(2)制備對(duì)照品溶液精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥后的補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，甲醇溶解定容，制成每Iml各含補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素10 μ g的對(duì)照品溶液；(3)測(cè)定色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為體積比35 65的甲醇和水；檢測(cè)波長(zhǎng)為M6nm ；流速為0. 5-1. 5ml · mirT1 ；柱溫35°C ；峰面積外標(biāo)法定量；精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液和供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟⑶流速為1.Oml · mirT1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種益腎養(yǎng)元合劑的檢測(cè)方法，該方法采用HPLC可以同時(shí)測(cè)定益腎養(yǎng)元合劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素2種有效成分的含量。該檢測(cè)方法靈敏度高，具有很好的分離度，基線穩(wěn)定，陰性對(duì)照無干擾，檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性、線性關(guān)系、穩(wěn)定性均能達(dá)到科研和生產(chǎn)的要求。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102539562SQ20111044355
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者侯勤, 盧其福, 彭惠炫, 李春芳, 陳世斌, 魏大華 申請(qǐng)人:廣州潘高壽藥業(yè)股份有限公司