專利名稱：定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物分析檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種用于風(fēng)寒喘咳，胸腹脹滿，亦可用于支氣管哮喘，支氣管炎的藥物，具體涉及定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
定喘止咳膠囊為已收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊(cè)的定喘止咳糖漿的改劑品種，具有宣肺平喘，理氣止咳的功效。是一種用于風(fēng)寒喘咳，胸腹脹滿，支氣管哮喘，支氣管炎的良藥。定喘止咳膠囊的內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微甜。定喘止咳膠囊的1000粒處方如下麻黃375g ；杏仁500g ；厚樸375g ；陳皮375g ；柴胡WOg ；紫蘇葉375g ；甘草WOg。定喘止咳膠囊的制備方法如下以上七味，麻黃、陳皮、厚樸、柴胡、紫蘇葉加8倍量的水，蒸餾8小時(shí)提取揮發(fā)油，藥渣與甘草、苦杏仁各加水10倍量煎煮兩次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 22 (600C )的清膏，減壓干燥，粉碎，加淀粉和微粉硅膠適量混勻，制粒，加入揮發(fā)油，混勻，悶潤(rùn)，裝入膠囊，制成 1000粒，即得。目前的定喘止咳膠囊執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ(^642006，該標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VE B)分別定性檢測(cè)膠囊內(nèi)容物中的麻黃、陳皮、厚樸，而含量測(cè)定也是通過(guò)薄層色譜法檢測(cè)鹽酸麻黃堿，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是每粒膠囊含麻黃以鹽酸麻黃堿計(jì)不少于0. 20mg。但是薄層色譜法檢測(cè)的重現(xiàn)性較差， 準(zhǔn)確性和靈敏度都不高。因此，有必要進(jìn)一步提高定喘止咳膠囊中有效成分檢測(cè)的靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法。達(dá)到方便的、準(zhǔn)確的對(duì)定喘止咳膠囊產(chǎn)品中每粒膠囊含麻黃以鹽酸麻黃堿計(jì)不少于0. 20mg的定量檢測(cè)的目的。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明提供一種定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法，其定喘止咳膠囊的1000粒處方如下麻黃375g ；杏仁500g ；厚樸375g ；陳皮375g ；柴胡250g ；紫蘇葉375g ；甘草 250g ；其特征是其定喘止咳膠囊本品中的麻黃是采用高效液相色譜法檢測(cè)鹽酸麻黃堿， 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D)測(cè)定；具體地，所述檢測(cè)麻黃以鹽酸麻黃堿的高效液相色譜條件如下色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相乙腈和0. 02mol/L磷酸二氫鉀溶液混合體積比為15 85至3 97，加含0.2%至0.5%的三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至 2. 5至3. 5 ；流速0. 8 1. 2mL/min ；柱溫10 30°C ；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為206 210nm，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；優(yōu)選地，所述方法還包括通過(guò)以下方法制備對(duì)照品溶液取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20μ g的溶液，即得；優(yōu)選地，所述方法還包括通過(guò)以下方法制備供試品溶液取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取 3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入堿性甲醇(5ml濃氨加入IOOml甲醇)溶液30ml，浸泡 30分鐘，用功率250KW、頻率40Hz的超聲處理15分鐘，離心，取上清液，藥渣按上述方法重復(fù)操作1 3次，合并上清液，50°C以下低溫蒸干，殘?jiān)语柡吐然c溶液30ml溶解，用濃氨試液調(diào)PH值至9，用乙醚提取3 5次，每次30ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓?置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密取2ml至IOml量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得；優(yōu)選地，所述方法還包括以下方法進(jìn)行測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 20 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；另一方面，本發(fā)明還提供一種定喘止咳膠囊的質(zhì)量控制方法，所述方法采用上述方法檢測(cè)定喘止咳膠囊中的有效成分；優(yōu)選地，所述定喘止咳膠囊每個(gè)制劑單位含麻黃以鹽酸麻黃堿(CltlH15NO · HCl)計(jì)，不得少于0. 20mg。上面所述制備對(duì)照品溶液方法取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定10mg，加甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果1、本發(fā)明申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)幾年大量的實(shí)驗(yàn)和摸索，提出定喘止咳膠囊有效成分采用高效液相色譜法檢測(cè)鹽酸麻黃堿的檢測(cè)方法，并且重新修訂了該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，已經(jīng)經(jīng)過(guò)陜西省食品藥品檢驗(yàn)所的復(fù)核認(rèn)可，克服了現(xiàn)有技術(shù)中的薄層色譜法檢測(cè)的重現(xiàn)性較差， 準(zhǔn)確性和靈敏度都不高的問(wèn)題。證明了本發(fā)明提供的方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好， 能有效表征定喘止咳膠囊的質(zhì)量，2、通過(guò)實(shí)踐證明，達(dá)到方便的、準(zhǔn)確的對(duì)定喘止咳膠囊產(chǎn)品中每粒膠囊含麻黃以鹽酸麻黃堿計(jì)不少于0. 20mg的定量檢測(cè)的目的；實(shí)現(xiàn)了方便、有效地檢測(cè)麻黃以鹽酸麻黃堿計(jì)的含量來(lái)有利于監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量的目的。


圖1是鹽酸麻黃堿對(duì)照品高效液相色譜圖；圖2是定喘止咳膠囊供試品高效液相色譜圖；圖3鹽酸麻黃堿紫外掃描圖譜。以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案。
具體實(shí)施例方式以下參照具體的實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。以下各實(shí)施例中使用的供試樣品定喘止咳膠囊均來(lái)源于本發(fā)明的申請(qǐng)人。以下各實(shí)施例中使用的對(duì)照品鹽酸麻黃堿購(gòu)自中國(guó)食品藥品鑒定研究院。實(shí)施例1即定喘止咳膠囊中鹽酸麻黃堿的檢測(cè)的實(shí)施例本實(shí)施例通過(guò)高效液相色譜法，檢測(cè)了定喘止咳膠囊中麻黃以鹽酸麻黃堿的含量。(1)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性
色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5 μ m，250mmX 4. 6mm)，即設(shè)備的規(guī)格型號(hào)色譜柱的填料直徑為5 μ m，柱長(zhǎng)250mm，柱直徑4. 6mm ；流動(dòng)相乙腈-0. 02mol/L磷酸二氫鉀溶液(體積比4 96)(其中含0.2%三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至2. 7)；流速1ml/ min ；柱溫:30°C ；紫外檢測(cè)波長(zhǎng):207nm ；也可選流速0. 8,0. 9,1. 1、1. 2ml/min ；對(duì)應(yīng)柱溫 15、18、20、25°C ；對(duì)應(yīng)紫外檢測(cè)波長(zhǎng)206、208、209、210nm ；理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。(2)對(duì)照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對(duì)照品10mg，精密稱定，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2ml置IOml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得(每Iml含鹽酸麻黃堿20 μ g)。(3)供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加堿性甲醇(5ml濃氨加入IOOml甲醇)溶液30ml，浸泡30分鐘，超聲(功率250KW，頻率40Hz)處理15分鐘，離心，取上清液，藥渣按上述方法重復(fù)操作3次，合并上清液，低溫蒸干(50°C以下)，殘?jiān)语柡吐然c溶液30ml溶解，用濃氨試液調(diào)pH值至9，用乙醚提取5次，每次30ml，合并乙醚液， 揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓?5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密取2ml至IOml量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿(CltlH15NO · HCl)計(jì)，不得少于0. 20mg。附圖1為對(duì)照品溶液高效液相色譜圖，注18. 2min處為鹽酸麻黃堿峰。附圖2為供試品溶液高效液相色譜圖，注18. 2min處為鹽酸麻黃堿峰。實(shí)施例2即檢測(cè)波長(zhǎng)的確定的實(shí)施例取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，加甲醇配制成每Iml含鹽酸麻黃堿20μ g的對(duì)照品溶液，在190 400nm范圍內(nèi)掃描。從紫外掃描圖譜可以看出，鹽酸麻黃堿甲醇溶液的最大吸收波長(zhǎng)為208nm。見(jiàn)圖3鹽酸麻黃堿紫外掃描圖譜。實(shí)施例3即含量測(cè)定的實(shí)施例(1)色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0. 02mol/l磷酸二氫鉀溶液(體積比 15 85)(其中含0.5%三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至3.0，為流動(dòng)相；流速選其中之一均可 0. 8,0. 9,1. 0,1. 1、1. 2ml/min ；柱溫20°C選其中之一均可10、16、20、23、25、27、28、30°C ； 檢測(cè)波長(zhǎng)為選其中之一均可206、207、208、209、210nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。(2)對(duì)照品溶液的制備與實(shí)施例1相同，不再贅述。(3)供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加堿性甲醇(5ml濃氨加入IOOml甲醇)溶液30ml，浸泡30分鐘，超聲(功率250KW，頻率40Hz)處理15分鐘， 離心，取上清液，藥渣按上述方法重復(fù)操作1次，合并上清液，低溫蒸干(50°C以下)，殘?jiān)?br> 5加飽和氯化鈉溶液30ml溶解，用濃氨試液調(diào)pH值至9，用乙醚提取3次G次也可)，每次 30ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓?5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密取^iil 至IOml量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定法與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4即含量測(cè)定的實(shí)施例(1)色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0. 02mol/l磷酸二氫鉀溶液(體積比 10 90)(其中含0.3%三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至2. 8)為流動(dòng)相；流速1. 2ml/min ；柱溫 250C ；檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。(2)對(duì)照品溶液的制備與實(shí)施例1相同。(3)供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加堿性甲醇(5ml濃氨加入IOOml甲醇)溶液30ml，浸泡30分鐘，超聲(功率250KW，頻率40Hz)處理15分鐘，離心，取上清液，藥渣按上述方法重復(fù)操作2次，合并上清液，低溫蒸干(50°C以下)，殘?jiān)语柡吐然c溶液30ml溶解，用濃氨試液調(diào)pH值至9，用乙醚提取4次，每次30ml，合并乙醚液， 揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，?5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密取2ml至IOml量瓶中，力口流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定法與實(shí)施例1相同。實(shí)施例5即干擾試驗(yàn)的實(shí)施例按實(shí)施例1 (3)的方法制備供試品溶液，同時(shí)制備不含麻黃的陰性供試品溶液及鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液，各取10 μ 1進(jìn)樣。結(jié)果表明，空白供試品對(duì)鹽酸麻黃堿的測(cè)定無(wú)干擾。通過(guò)此干擾試驗(yàn)證實(shí)了其他成分對(duì)鹽酸麻黃堿的檢測(cè)無(wú)干擾。實(shí)施例6即線性范圍的考察的實(shí)施例取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液(0. 322mg/ml)適量，分別配制成濃度為0. 007728, 0. 01288,0. 02576,0. 03864,0. 05152,0. 07728mg/ml 對(duì)照品溶液，各取 10 μ 1 進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表1。并以峰面積A對(duì)進(jìn)樣量M進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。表1鹽酸麻黃堿對(duì)照品測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法，其定喘止咳膠囊的1000粒處方如下麻黃375g ；杏仁500g ；厚樸375g ；陳皮375g ；柴胡WOg ；紫蘇葉375g ；甘草WOg ；其特征是 其定喘止咳膠囊本品中的麻黃是采用高效液相色譜法檢測(cè)鹽酸麻黃堿，照高效液相色譜法 (中國(guó)藥典2010年版一部附錄VID)測(cè)定；具體地，所述檢測(cè)麻黃以鹽酸麻黃堿的高效液相色譜條件如下色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相乙腈和0. 02mol/L磷酸二氫鉀溶液混合體積比為15 85至3 97，加含0.2%至0.5%的三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至2. 5至 3. 5 ；流速0. 8 1. 2mL/min ；柱溫10 30°C ；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為206 210nm，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；優(yōu)選地，所述方法還包括通過(guò)以下方法制備對(duì)照品溶液取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得；優(yōu)選地，所述方法還包括通過(guò)以下方法制備供試品溶液取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取3g， 精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入堿性甲醇(5ml濃氨加入IOOml甲醇)溶液30ml，浸泡30 分鐘，用功率250KW、頻率40Hz的超聲處理15分鐘，離心，取上清液，藥渣按上述方法重復(fù)操作1 3次，合并上清液，50°C以下低溫蒸干，殘?jiān)语柡吐然c溶液30ml溶解，用濃氨試液調(diào)PH值至9，用乙醚提取3 5次，每次30ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，?25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密取2ml至IOml量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻， 濾過(guò)，即得；優(yōu)選地，所述方法還包括以下方法進(jìn)行測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 20 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法，其特征是采用上述方法檢測(cè)定喘止咳膠囊中的有效成分；優(yōu)選地，所述定喘止咳膠囊每個(gè)制劑單位含麻黃以鹽酸麻黃堿(CltlH15NO · HCl)計(jì)，不得少于0. 20mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法，其特征是上面所述制備對(duì)照品溶液方法取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定10mg，加甲醇制成每Iml含 20 μ g的溶液，即得。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物分析檢測(cè)領(lǐng)域，涉及定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法。目前其含量測(cè)定通過(guò)薄層色譜法檢測(cè)鹽酸麻黃堿，但其重現(xiàn)性較差，準(zhǔn)確性和靈敏度都不高。本發(fā)明的目的是提供一種定喘止咳膠囊有效成分的檢測(cè)方法。采用高效液相色譜法檢測(cè)鹽酸麻黃堿，照高效液相色譜法測(cè)定；色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相乙腈和磷酸二氫鉀溶液混合，加三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至2.5至3.5；流速1mL/min；柱溫20℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為208nm，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。本發(fā)明效果達(dá)到方便的、準(zhǔn)確的對(duì)定喘止咳膠囊產(chǎn)品中每粒膠囊含麻黃以鹽酸麻黃堿計(jì)不少于0.20mg的定量檢測(cè)的目的。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102507821SQ20111033041
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月26日
發(fā)明者杜小英, 王宇 申請(qǐng)人:陜西方舟制藥有限公司