專利名稱：一種試劑及其在檢測(cè)二價(jià)銅離子中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及光學(xué)探針，具體涉及一種試劑及其合成方法，以及這種試劑在檢測(cè)二價(jià)銅離子中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
二價(jià)銅離子是鐵離和鋅離子之后的人體第三種豐量元素，在有機(jī)體的許多基本生理過(guò)程中扮演者重要的角色。二價(jià)銅離子是生物化學(xué)必不可少的金屬離子，例如銅-鋅超氧化歧化酶在酶抵御氧化毒性方面所起的作用。細(xì)胞中銅離子動(dòng)態(tài)平衡的改變引起一些嚴(yán)重的神經(jīng)退行性疾病，包括門克斯和威爾遜疾病、阿爾茨海默氏癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、 朊毒體病。尤其是，在高濃度的二價(jià)銅離子存在下，由于在酶催化反應(yīng)中銅離子取代其他金屬離子作為輔因子，短期接觸能引起胃腸紊亂；長(zhǎng)期接觸，會(huì)引起肝或腎不適。監(jiān)測(cè)生理過(guò)程中二價(jià)銅離子的濃度和亞細(xì)胞分布的生理過(guò)程中銅的濃度，大大有助于理解它的化合物生理功能和致病原理。銅離子已經(jīng)被認(rèn)定為一種環(huán)境污染物，并引起人們的關(guān)注。檢測(cè)二價(jià)銅離子在環(huán)境和生物分析等領(lǐng)域有重要的影響。發(fā)展高選擇性、高靈敏度的二價(jià)銅離子的檢測(cè)方法仍是一個(gè)挑戰(zhàn)性的任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種體系簡(jiǎn)單、操作方便、選擇性高、靈敏度高、水溶性好的定量檢測(cè)二價(jià)銅離子的試劑，以及該試劑用于檢測(cè)二價(jià)銅離子的方法。本發(fā)明提供的一種試劑它是2-pyridylaldehyde fluorescein hydrazone (PFH)，結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1. 一種試劑特征在于它是 2-pyridylaldehyde fluorescein hydrazone (PFH)，其結(jié)構(gòu)式為
2.如權(quán)利要求1所述的一種試劑的合成方法，其特征在于步驟為將熒光素酰胼和 2-吡啶甲醛按摩爾比1 1完全溶解在甲醇溶液中，滴加1摩爾當(dāng)量的無(wú)水乙酸，回流2小時(shí)，用體積比為1 1的甲醇和石油醚重結(jié)晶得到PHL
3.—種檢測(cè)二價(jià)銅離子的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)、配制pH= 7. 0、濃度為I-IOOmM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的Ρ 乙醇溶液；(2)、按體積比500 9將HEPES緩沖溶液和Ρ 乙醇溶液加到干凈的紫外比色皿中， 在紫外可見(jiàn)分光光度儀上檢測(cè)，隨著待測(cè)樣的加入，500nm出現(xiàn)新的吸收峰并逐漸升高，當(dāng)吸收峰不再升高時(shí)，停止加待測(cè)樣，此時(shí)加入待測(cè)樣的體積計(jì)為Vit3w ；(3)、按VPFHX3X2X10_7VOT#樣計(jì)算出待測(cè)樣中二價(jià)銅離子的濃度(mol/L)。
4.一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)配制pH= 7. 0、濃度為I-IOOmM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的Ρ 乙醇溶液；(2)按體積比2000 3將HEPES緩沖溶液和PHI乙醇溶液加到干凈的紫外比色皿中， 在熒光分光光度儀上檢測(cè)，隨著待測(cè)樣的加入，518nm出現(xiàn)明顯的熒光增強(qiáng)，且隨著二價(jià)銅離子濃度的增大，熒光強(qiáng)度也增大，當(dāng)強(qiáng)度不再增大時(shí)，停止加待測(cè)樣，此時(shí)加入待測(cè)樣的體積計(jì)為Vitaw ；(3)按νΡΗΙΧ3Χ2Χ10_7ν·,計(jì)算出待測(cè)樣中二價(jià)銅離子的濃度(mol/L)。
5.如權(quán)利要求1所述的試劑在細(xì)胞成像中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的試劑，它是熒光素衍生物二吡啶甲醛熒光素酰腙2-pyridylaldehyde fluorescein hydrazone(PFH)。PFH試劑由熒光素酰肼和2-吡啶甲醛在含有乙酸的甲醇中回流2小時(shí)制得，原料便宜，反應(yīng)條件簡(jiǎn)單，易于生產(chǎn)。本發(fā)明提供了二價(jià)銅離子的定量檢測(cè)方法，是基于PFH，在pH為7.0的HEPES溶液中定量地檢測(cè)二價(jià)銅離子的含量。該檢測(cè)方法，對(duì)二價(jià)銅離子顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便、靈敏、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N21/76GK102443388SQ20111026443
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月7日
發(fā)明者楊瑜濤, 陰彩霞, 霍方俊 申請(qǐng)人:山西大學(xué)