專利名稱：一種slc22a2基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體的是涉及一種SLC22A2基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
背景技術：
人類有機陽離子轉運體2 (0CT2, SLC22A2)是一種有機陽離子的多特異性轉運體，定位于染色體6q26，包含11個外顯子。SLC22A2主要分布在腎管上皮細胞的外側基底膜，是腎臟主動分泌有機陽離子的一個主要轉運體，與藥物代謝相關。人體內對于SLC22A2的表達調控在轉錄水平主要是類固醇激素調控，在蛋白水平則主要與多種蛋白激酶有關。研究表明，人類SLC22A2的多態(tài)性與SLC22A2功能的改變密切相關。目前，對SLC22A2基因多態(tài)性進行檢測和分析的方法很少，主要是PCR-RFLP分析法，PCR-RFLP法是基于基因突變造成的限制性內切酶識別位點的改變，如位點丟失或產生新位點，通過PCR擴增某一特定片段，再用限制性內切酶酶切擴增產物，電泳觀察片段的大小，這種方法用于檢測酶切位點改變的基因突變，可直接判斷基因型，但該法不能用于沒有產生新酶切位點的基因突變檢測。再次，PCR-RFLP分析法存在著檢測通量的局限性，每次只能檢測一種突變類型，不能滿足實際應用的需要。本發(fā)明目標檢測的SLC22A2基因突變位點，如表所示
權利要求
1.一種SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對SLC22A2基因不同多態(tài)性位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對G120C位點的SEQ ID NO. 11及SEQ ID NO. 12 ;針對C122T位點的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14 ;針對 A104C 位點的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ；針對 C133G 位點的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;和 / 或針對 C208T 位點的 SEQ ID NO. 19及 SEQ ID NO. 20 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. I SEQ ID NOlO ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不 同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 21 SEQ ID NO. 30，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應多態(tài)性位點的目標序列的引物。
2.根據(jù)權利要求I所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為針對G120C位點的 SEQ ID NO. 31 及 SEQ ID NO. 32 ;針對C122T 位點的 SEQ ID NO. 33 及SEQ ID NO. 34 ;針對 A104C 位點的 SEQ ID NO. 35 及 SEQ ID NO. 36 ;針對 C133G 位點的 SEQID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;和 / 或針對 C208T 位點的 SEQ ID NO. 39 及 SEQ ID NO. 40。
3.根據(jù)權利要求I所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為針對G120C位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 11組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 12組成的序列；針對C122T位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 14組成的序列；針對A104C位點的由SEQ ID NO. 5和SEQID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對C133G位點的由SEQ ID NO. 7和SEQID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 18組成的序列；和/或針對C208T位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 20組成的序列。
4.根據(jù)權利要求I所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是， (A).所述ASPE引物為針對G120C位點的由SEQID NO. I和SEQ ID NO. 11組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 12組成的序列；針對C122T位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 14組成的序列；針對A104C位點的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對C133G位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 18組成的序列；和針對C208T位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 20組成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 21 SEQ ID NO. 30，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).所述擴增引物為:針對G120C位點的SEQID NO. 31及SEQ ID NO. 32 ;針對C122T位點的 SEQ ID NO. 33及 SEQ ID NO. 34 ;針對A104C位點的 SEQ ID NO. 35及 SEQ ID NO. 36 ；針對 C133G 位點的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;和針對 C208T 位點的 SEQ ID NO. 39 及SEQ ID NO. 40。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10個T。
6.用于SLC22A2基因多態(tài)性檢測的特異性引物，其特征是，所述特異性引物序列為針對 G120C 位點的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12 ;針對 C122T 位點的 SEQ ID NO. 13 及 SEQID NO. 14 ;針對 A104C 位點的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ;針對 C133G 位點的 SEQ IDNO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;和 / 或針對 C208T 位點的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種SLC22A2基因檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有每種由tag序列和針對突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為針對G120C位點的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12；針對C122T位點的SEQ ID NO.13及SEQID NO.14；針對A104C位點的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；針對C133G位點的SEQ IDNO.17及SEQ ID NO.18；和/或針對C208T位點的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發(fā)明所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現(xiàn)多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。
文檔編號G01N21/64GK102952870SQ20111025157
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月29日 優(yōu)先權日2011年8月29日
發(fā)明者許嘉森, 郭靖 申請人:廣州益善生物技術有限公司