專利名稱：一種細胞攝取阿霉素的定量測試方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種細胞攝取阿霉素的定量測試方法。
背景技術：
阿霉素(Doxorubicin)，別名羥柔紅霉素、羥正定霉素、多柔比星，是臨床常用的抗生素累抗腫瘤藥，抗瘤譜廣，療效廣，可治療多種腫瘤。目前，國內外對于阿霉素的定量分析大多采用液相色譜或液相色譜-質譜聯(lián)用技術。但這些測試方法價格昂貴，測試條件復雜， 受外界條件影響較大，測試過程繁瑣費時。對于微量組分的測定，在較高濃度下，紫外可見光具有較好的靈敏度，但是其測量范圍較窄，而在較低濃度下其測量靈敏度不夠。在國內外的文獻中，對于細胞攝取量大都采用熒光倒置顯微鏡拍照與細胞流式儀結合的方式來確定其攝取強度，但是由于其時間周期太長，只能定性測定。熒光分光光度計具有比紫外分光光度計具有更高的靈敏度，對于較低濃度的阿霉素溶液也快速簡單的測試出來，且測試費用較低。鑒于以上所述，本發(fā)明采用熒光分光光度計測定細胞攝取阿霉素含量。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種簡單易行的細胞攝取阿霉素的定量測試方法。本發(fā)明采用熒光分光光度計對阿霉素進行定量的測定，包含以下步驟(1)配制一定濃度的阿霉素溶液，在熒光分光光度計下掃描其激發(fā)波長和發(fā)射波長，確定其激發(fā)波長和發(fā)射波長；(2)配制一系列濃度的阿霉素溶液，以確定的激發(fā)波長和發(fā)射波長來測定其熒光強度(F)。以熒光強度(F)對濃度，繪制標準曲線，得到回歸直線方程；(3)測定經(jīng)處理的細胞攝取阿霉素溶液的熒光強度(F)，由步驟(2)的回歸直線方程計算出細胞攝取的阿霉素的準確濃度。本發(fā)明所述的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為(Ex) = 497nm、(Em) = 555nm。所述的細胞的處理是采用十二烷基硫酸鈉渦旋混合經(jīng)離心處理，得到阿霉素溶液，溶液中的阿霉素濃度范圍為lO-lOOOng/mL。本發(fā)明的測試方法操作簡便、精確度高、重現(xiàn)性好。


圖1為阿霉素溶液在激發(fā)波長(Ex) = 497nm、發(fā)射波長(Em) = 555nm處的熒光強度-濃度標準曲線。
具體實施例方式通過下面實例說明本發(fā)明的具體實施方式
，但本發(fā)明的保護范圍，不局限于此。實施例1
以超純水為溶劑配置2μ g .mL-1的鹽酸阿霉素溶液，用熒光分光光度計掃描其激發(fā)波長和發(fā)射波長。精密配置質量濃度P分別為10，20，50，100，200，500，1000ng/mL，用熒光分光光
度計于上述所測定的激發(fā)波長，發(fā)射波長下分別測定熒光強度，同一樣品分別測定三次，取三次試驗的平均值，并考察其日內，日間精密度。以質量濃度P為橫坐標，熒光強度(F)為縱坐標進行線性回歸得到標準曲線。
權利要求
1.一種細胞攝取阿霉素的定量測試方法，其特征在于用熒光分光光度計對阿霉素進行定量測試，包含以下步驟(1)配制一定濃度的阿霉素溶液，在熒光分光光度計下掃描其激發(fā)波長和發(fā)射波長，確定其激發(fā)波長和發(fā)射波長；(2)配制一系列濃度的阿霉素溶液，以確定的激發(fā)波長和發(fā)射波長來測定其熒光強度 (F)0以熒光強度(F)對濃度，繪制標準曲線，得到回歸直線方程；(3)測定經(jīng)處理的細胞攝取阿霉素溶液的熒光強度(F)，由步驟( 的回歸直線方程計算出細胞攝取的阿霉素的準確濃度。
2.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，所述的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為(Ex) =497nm、(Em) = 555nm。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，溶液中阿霉素的濃度范圍為IO-IOOOng/mLo
4.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于對于細胞的處理是采用十二烷基硫酸鈉渦旋混合經(jīng)離心處理，得到阿霉素溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種細胞攝取阿霉素的定量測試方法。主要是以熒光分光光度計為測試手段，利用阿霉素在激發(fā)波長(Ex)＝497nm、發(fā)射波長(Em)＝555nm的條件下具有最佳吸收，以熒光強度對濃度，繪制標準曲線，并得到回歸直線方程。對于未知濃度的阿霉素溶液，根據(jù)所測的熒光強度值，由回歸方程計算出樣品中阿霉素的準確濃度。本發(fā)明測試細胞攝取阿霉素濃度范圍為10-1000ng/mL。本發(fā)明的測試方法操作簡便，精確度高，重現(xiàn)性好，為細胞內阿霉素的定量測試提供了一種簡單易行的方法。
文檔編號G01N1/28GK102269704SQ201110154348
公開日2011年12月7日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權日2011年6月9日
發(fā)明者徐云龍, 楊善祥, 趙崇軍, 錢秀珍 申請人:上海微納科技有限公司