專利名稱：鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
鹽酸多塞平(dox印in hydrochloride)為H1J2受體拮抗劑，是順(Z_)、反(E_)異構(gòu)體混合物，屬3環(huán)類抗抑郁藥，具有抗焦慮、抗抑郁、抗抽搐及鎮(zhèn)靜眠作用，用于治療焦慮性抑郁癥或神經(jīng)癥性抑郁癥。鹽酸多塞平口服吸收好，生物利用度為13 45%，主要在肝臟代謝，活性代謝產(chǎn)物為去甲基化物，代謝物質(zhì)由腎臟排泄。在臨床應(yīng)用和司法實(shí)踐中，誤服或自服超量致中毒事件時(shí)有發(fā)生，快速準(zhǔn)確的檢測(cè)對(duì)于中毒者的搶救及中毒案件的偵破具有重要意義。張晨華等在《反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多塞平片的含量》一文O007) 披露了測(cè)定鹽酸多塞平含量的方法，但是該方法中鹽酸多塞平的濃度在10 40μ g/ml的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，測(cè)量的靈敏度較低，難以滿足臨床應(yīng)用，尤其難以滿足司法實(shí)現(xiàn)中的檢測(cè)要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法靈敏度過低，難以滿足臨床及司法實(shí)踐要求的技術(shù)問題。本發(fā)明的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法包括如下步驟步驟一，將樣品預(yù)處理，加入內(nèi)標(biāo)，調(diào)節(jié)pH值為堿性，之后加入有機(jī)溶劑萃取，震蕩后離心，得溶液；步驟二，將溶液水浴濃縮至干，得殘?jiān)?，無水乙醇溶解，得進(jìn)樣液體；步驟三，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)進(jìn)樣液體，采用提取離子法檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出鹽酸多塞平的含量。優(yōu)選地，步驟一中，所述有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、苯、氯仿及乙醚的混合液或乙醚。優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯。優(yōu)選地，步驟一中，所述內(nèi)標(biāo)為鹽酸丙基解痙素。優(yōu)選地，步驟一中，所述PH值為12。優(yōu)選地，步驟二中，所述水浴為80°C下水浴。優(yōu)選地，步驟三中，所述檢測(cè)進(jìn)樣液體的條件為柱流量1. Oml/min，柱溫初始溫度為100°C，以20°C /min升溫至200V，保持2min，再以10°C /min升溫至260°C ；又以20°C / min升溫至280°C，保持Imin ；載氣高純氦氣；進(jìn)樣口溫度280°C;進(jìn)樣方式不分流進(jìn)樣， 進(jìn)樣量為1 μ 1 ；GC/MS接口溫度為280°C ；EI源為70eV，EM電壓為153V。優(yōu)選地，步驟三中，得到所述標(biāo)準(zhǔn)曲線包括如下步驟取鹽酸多塞平標(biāo)準(zhǔn)溶液，用無水乙醇配制成0、2. 5、5、10、20、50、100μβ/πι1濃度的工作液，每樣中均含鹽酸丙基解痙素30 μ g/ml，然后利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以SIM方式進(jìn)樣進(jìn)行分析，提取離子為鹽酸丙基解痙素_86、99、558、44，鹽酸多塞平為_58、59、165、178 ；采用內(nèi)標(biāo)定法定量，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。優(yōu)選地，所述鹽酸多塞平標(biāo)準(zhǔn)溶液為將鹽酸多塞平純品溶于無水乙醇中而得，濃度為 lmg/ml0本發(fā)明具有如下的有益效果(1)本發(fā)明的方法檢測(cè)靈敏度搞，最小檢測(cè)量低于ng級(jí)；(2)本發(fā)明的方法僅使用少量的檢材即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，在司法檢測(cè)具有非常強(qiáng)的實(shí)用性；(3)本發(fā)明的方法在處理樣品時(shí)加入了有機(jī)溶劑，能夠有效防止乳化現(xiàn)象，最大限度地避免了檢測(cè)中鹽酸多塞平的丟失；(4)本發(fā)明的方法雜質(zhì)干擾較小，不需要凈化的步驟，排出了吸附劑對(duì)鹽酸多塞平的吸附作用，由于減少了溶劑使用量，降低了檢測(cè)成本，縮短了檢測(cè)時(shí)間。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中涉及的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀購于安捷倫科技公司，型號(hào)為5973N ；鹽酸多塞平純品購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為10069-200602 ；鹽酸多塞平片購于上海信誼九福藥業(yè)有限公司；鹽酸丙基解痙素(SKF525a)購于公安部第二研究所；其他試劑均為分析純。實(shí)施例1實(shí)施例1尿液中鹽酸多塞平含量的檢測(cè)1、制備樣品的乙酸乙酯溶液取健康家兔10只，體重均為2. 6Kg左右，灌服鹽酸多塞平50mg，5h后將家兔處死， 各取尿液Iml，重復(fù)4次，分別置于IOml離心管中，每個(gè)樣品中加入內(nèi)標(biāo)(SKF525a) 3 μ g，之后加入氫氧化鈉調(diào)節(jié)樣品溶液的PH值為12，之后加入乙酸乙酯^il，震蕩5min后，再4000rpm 離心5min，重復(fù)操作3次，得樣品的乙酸乙酯溶液。2、制備進(jìn)樣液體將樣品的乙酸乙酯溶液于80°C下水浴濃縮至干，得殘?jiān)?，最后用IOOml的無水乙醇溶解殘?jiān)?，得進(jìn)樣液體。3、測(cè)定樣品中鹽酸多塞平的含量標(biāo)準(zhǔn)曲線包括如下步驟取鹽酸多塞平標(biāo)準(zhǔn)溶液，用無水乙醇配制成0、2.5、5、 10、20、50、100 μ g/ml濃度的工作液，每樣中均含鹽酸丙基解痙素30 μ g/ml，然后利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以SIM方式進(jìn)樣進(jìn)行分析，提取離子為鹽酸丙基解痙素_86、99、558、 44，鹽酸多塞平為-58、59、165、178 ；鹽酸丙基解痙素的保留時(shí)間為13. 189分鐘，鹽酸多塞平順式異構(gòu)體的保留時(shí)間為12. 267分鐘，反式異構(gòu)體的保留時(shí)間為12. 519分鐘；采用內(nèi)標(biāo)定法定量，以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程鹽酸多塞平順式異構(gòu)體為 A = 1. 67e-001XC+3. 76e_003，r2 = 1. 000 (η = 7)，反式異構(gòu)體為 A =6. 58e-001XC+7. 13e_003，r2 = 1. 000 (η = 7)，鹽酸多塞平在 2. 5 IOOng 范圍內(nèi)線性關(guān)
系良好。利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)進(jìn)樣液體，進(jìn)樣的條件為柱流量1. Oml/min,柱溫初始溫度為100°c，以20°C /min升溫至200°C，保持2min，再以10°C /min升溫至260°C ； 又以20°C /min升溫至280°C，保持Imin ；載氣高純氦氣；進(jìn)樣口溫度280°C ；進(jìn)樣方式 不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1 μ 1 ；GC/MS接口溫度為280°C ；EI源為70eV，EM電壓為153V。根據(jù)色譜分析的結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算，得尿中的平均含量為1. 42μ g/ml。實(shí)施例2肝臟組織鹽酸多塞平含量的檢測(cè)本實(shí)施例的步驟同實(shí)施例1，所不同之處在于步驟1，本實(shí)施例為制備樣品的氯仿溶液，包括如下步驟取健康家兔10只，體重均為2. 5Kg左右，灌服鹽酸多塞平50mg， 證后將家兔處死，各取肝臟組織lg，勻漿，分別置于IOml離心管中，每個(gè)樣品中加入內(nèi)標(biāo) (SKF525a) 3 μ g，之后加入氫氧化鈉調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值為10，之后加入氯仿細(xì)1，震蕩5min 后，再4000rpm離心5min，重復(fù)操作3次，得樣品的乙酸乙酯溶液。根據(jù)色譜分析的結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算，得尿中的平均含量為6. 39 μ g/ml。實(shí)施例3胃壁中鹽酸多塞平含量的檢測(cè)本實(shí)施例的步驟同實(shí)施例1，所不同之處在于步驟1，本實(shí)施例為制備樣品的苯溶液，包括如下步驟取健康家兔10只，體重均為2. 5Kg左右，灌服鹽酸多塞平50mg，5h后將家兔處死，各取胃壁lg，剪碎，分別置于IOml離心管中，每個(gè)樣品中加入內(nèi)標(biāo)(SKF525a) 3 μ g， 之后加入氫氧化鈉調(diào)節(jié)樣品溶液的PH值為9，之后加入苯細(xì)1，震蕩5min后，再4000rpm離心5min，重復(fù)操作3次，得樣品的苯溶液。根據(jù)色譜分析的結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算，得尿中的平均含量為5. 50 μ g/ml。綜上所述，本發(fā)明的方法檢測(cè)靈敏度搞，最小檢測(cè)量低于ng級(jí)，僅使用少量的檢材即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，同時(shí)本發(fā)明的方法檢測(cè)成本低，檢測(cè)時(shí)間短。
權(quán)利要求
1.一種鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟步驟一，將樣品預(yù)處理，加入內(nèi)標(biāo)，調(diào)節(jié)PH值為堿性，之后加入有機(jī)溶劑萃取，震蕩后離心，得溶液；步驟二，將溶液水浴濃縮至干，得殘?jiān)?，無水乙醇溶解，得進(jìn)樣液體；步驟三，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)進(jìn)樣液體，采用提取離子法檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出鹽酸多塞平的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟一中，所述有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、苯、氯仿及乙醚的混合液或乙醚。
3.如權(quán)利要求2所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯。
4.如權(quán)利要求1所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟一中，所述內(nèi)標(biāo)為鹽酸丙基解痙素。
5.如權(quán)利要求1所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟一中，所述PH值為12。
6.如權(quán)利要求1所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟二中，所述水浴為80°C下水浴。
7.如權(quán)利要求1所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟三中，所述檢測(cè)進(jìn)樣液體的條件為柱流量1. Oml/min,柱溫初始溫度為100°C，以20°C /min升溫至 200°C，保持 2min，再以 10°C /min 升溫至 260°C ；又以 20°C /min 升溫至 280°C，保持 Imin ； 載氣高純氦氣；進(jìn)樣口溫度280°C ；進(jìn)樣方式不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為Iy 1 ；GC/MS接口溫度為280°C ；EI源為70eV，EM電壓為153V。
8.如權(quán)利要求1所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟三中，得到所述標(biāo)準(zhǔn)曲線包括如下步驟取鹽酸多塞平標(biāo)準(zhǔn)溶液，用無水乙醇配制成0、2.5、5、10、20、50、 100 μ g/ml濃度的工作液，每樣中均含鹽酸丙基解痙素30 μ g/ml，然后利用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀以SIM方式進(jìn)樣進(jìn)行分析，提取離子為鹽酸丙基解痙素_86、99、558、44，鹽酸多塞平為_58、59、165、178 ；采用內(nèi)標(biāo)定法定量，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
9.如權(quán)利要求8所述的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所述鹽酸多塞平標(biāo)準(zhǔn)溶液為將鹽酸多塞平純品溶于無水乙醇中而得，濃度為lmg/ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域的鹽酸多塞平含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟步驟一，將樣品預(yù)處理，加入內(nèi)標(biāo)，調(diào)節(jié)pH值為堿性，之后加入有機(jī)溶劑萃取，震蕩后離心，得溶液；步驟二，將溶液水浴濃縮至干，得殘?jiān)?，無水乙醇溶解，得進(jìn)樣液體；步驟三，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)進(jìn)樣液體，采用提取離子法檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出鹽酸多塞平的含量。本發(fā)明的方法檢測(cè)靈敏度搞，最小檢測(cè)量低于ng級(jí)，僅使用少量的檢材即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，同時(shí)本發(fā)明的方法檢測(cè)成本低，檢測(cè)時(shí)間短。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102338788SQ20101023793
公開日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2010年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月27日
發(fā)明者丁國才, 沙飛翔, 郭景鵬 申請(qǐng)人:上海海帝園藝有限公司