專利名稱：一種中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及化學物質的理化分析，具體涉及一種中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒。
背景技術：
科學研究表明長期或大劑量攝入亞硫酸鹽可造成胃腸、肝臟的危害，二氧化硫可對雄性小鼠生殖系統(tǒng)產生損傷作用。自20世紀80年代起，對亞硫酸鹽的安全性問題研究已越來越弓I起各國關注和重視。硫磺熏蒸或浸泡中藥材的傳統(tǒng)加工方法會導致中藥材原藥殘留大量的二氧化硫及砷、汞等有毒有害物質。因此，《中華人民共和國藥典》(2000年版)規(guī)定，除山藥外，其他所有中藥材原藥不能用硫磺熏蒸或浸泡；2004年，國家食品藥品監(jiān)督管理局下發(fā)了《關于對中藥材采用硫磺熏蒸問題的函復》(食藥監(jiān)市函[2004] 137號)，明確規(guī)定“對于在市場流通領域的部分中藥材和中藥飲片，通過采用硫磺熏蒸或浸泡達到外觀漂白的行為， 應按違反《藥品管理法》第四十九條、第七十五條的規(guī)定進行查處?！?2005年版藥典則刪除了山藥、葛根兩種僅存的允許在加工中使用硫磺熏蒸方法，并在增補本中增加了 “二氧化硫殘留量檢測法” ；2010年版藥典全面取消硫磺熏蒸工藝，并正式收載“二氧化硫殘留量測定法”(附錄IXU)?！蛾P于印發(fā)食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單(第一批)的通知》中也公布了可能違法添加的非食用物質吊白塊及工業(yè)硫磺，表明國家不允許使用硫磺熏蒸或吊白塊等亞硫酸鹽處理中藥材、中藥飲片及食品以達到漂白、增艷、保鮮、防腐等作用。硫磺熏蒸過程中產生二氧化硫氣體，二氧化硫遇藥材中的水分部分轉化為亞硫酸鹽，部分則與藥材中的醇、醛、酮等以結合態(tài)亞硫酸鹽類形式存在。亞硫酸鹽(如亞硫酸鈉 Na2SO3)、亞硫酸氫鹽(如亞硫酸氫鈉NaHSO3)、焦亞硫酸鹽(如焦亞硫酸鈉或偏重亞硫酸鈉， Na2S2O5)、低亞硫酸鹽(如連二亞硫酸鈉，俗稱保險粉，Na2S2O4)和次硫酸氫鈉甲醛(俗稱吊白塊，NaHSO2 · HCHO · 2H20)等簡稱“亞硫酸鹽”系列物質。由于該類物質具有與二氧化硫同樣的強還原性，因而有很好的漂白、抗氧化和防腐等作用。同樣，也給安全使用中藥材、中藥飲片帶來極大隱患。目前檢測中藥材、中藥飲片中是否存在二氧化硫殘留的法定方法為蒸餾滴定法，該法使用玻璃儀器裝置，體形較大，連接部件多，且使用氮氣，操作時間過長， 必須在實驗室內進行；而有部分研究嘗試借鑒食品中二氧化硫的玫瑰副苯胺比色法或離子色譜法檢測，但要么使用了有毒試劑四氯汞齊及處理條件較高，要么使用的儀器設備價格昂貴、體積較大、檢測環(huán)境要求較高、處理條件嚴格，不便于開展現(xiàn)場監(jiān)督使用。目前未見采用化學方法類的簡便快速檢測方法的研究，尤其未見利用濾紙作為分離、擴散、化學反應顯色載體同時半定量檢測中藥材、中藥飲片殘留無機化學成分的方法研究，因此，本法的研究對于監(jiān)督現(xiàn)場快速檢測、及時暫扣不良商家違法加工、使用漂白增色劑的中藥材、中藥飲片更具現(xiàn)實意義。

發(fā)明內容
為克服上述技術缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒，能快速半定量的實現(xiàn)對中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留檢測。為實現(xiàn)上述目的，采用如下的技術方案本發(fā)明的一種中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒包括裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶、裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶、鹽酸溶液和鉛或銅離子類試紙。優(yōu)選的，所述氫氧化鈉溶液的質量體積百分比濃度為0. 125%，其體積為10ml，所述裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶的規(guī)格為15ml。優(yōu)選的，所述無砷鋅粒的總質量為0. 1-0. 3克，更優(yōu)的為0. 2克。所述裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶的規(guī)格為10ml。優(yōu)選的，所述鉛或銅離子類試紙選用定性濾紙。該定性濾紙的直徑為1. 5-2. 5cm ； 更優(yōu)的，該定性濾紙的直徑為2cm。該鉛或銅離子類試紙優(yōu)選為醋酸鉛試紙、醋酸銅試紙或硫酸銅試紙。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒具有攜帶方便、操作簡單、檢測快速、成本低廉、半定量測定、準確度高等優(yōu)點；同時由于利用氣體反應，可消除供試液背景顏色干擾，減少因樣品背景顏色去除的繁雜處理過程， 靈敏度高，專屬性強，定位準確，效果理想。本發(fā)明的試劑盒極大縮短檢測時間，適用于監(jiān)督現(xiàn)場快速篩查中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留，同時進行半定量分析，既可在戶外監(jiān)督現(xiàn)場，又可在戶內固定場所進行操作，無需其他檢測儀器輔助檢測，無檢測環(huán)境與條件限制?！皝喠蛩猁}”系列物質在堿性溶液中被吸收成游離的亞硫酸根而溶出，由于亞硫酸根較不穩(wěn)定，故在無砷鋅粒及鹽酸溶液中，亞硫酸根與新產生的氫氣反應生成硫化氫，從而可以與醋酸鉛或硫酸鉛、銅等起化學反應而形成硫化鉛或硫化銅等棕褐色至黑色沉淀，進而據此判斷樣品中是否含亞硫酸鹽類物質。同時本發(fā)明的試劑盒利用一定直徑圓形濾紙的擴散作用、過濾作用達到消除樣品溶液顏色背景干擾和復雜基質干擾和同時進行多組份半定量分離檢測的目的。顯色反應時形成的二氧化硫迅速與顯色劑反應，并在濾紙上形成深淺不一的顏色，顯色時間及顏色深淺隨亞硫酸鹽殘留量的不同而不同，殘留量大時則幾乎立即顯示棕色，在5-10分鐘形成均勻顏色，并隨時間的推移，顏色逐漸加深，最終變?yōu)樽睾稚零y黑色。本試劑盒能在10分鐘內顯黃棕色至銀黑色，則可判斷樣品中可能含有二氧化硫、 亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、低亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽、吊白塊等漂白增色劑，其檢測限為1Omg/kg 。


圖1是實施例2中利用實施例1中的試劑盒檢測亞硫酸鈉及亞硫酸氫鈉標準溶液反應60分鐘顯色圖；圖2是實施例2中利用實施例1中的試劑盒檢測亞硫酸鈉標準溶液反應10分鐘顯色圖；圖3是實施例2中利用實施例1中的試劑盒檢測亞硫酸氫鈉標準溶液反應10分
圖4是實施例3中利用實施例1中的試劑盒檢測樣品中部分樣品的顯色圖；圖5為用醋酸鉛、醋酸銅、硫酸銅浸潤試紙后，分別檢測0.01 %,0. 005 %, 0. 002%,0. 001%,0. 0005%,0. 0002%,0. 0001% 的 Na2SO3 和 NaHSO3 以及用多種樣品的實驗結果圖；圖6是用離子色譜法檢測二氧化硫的標準曲線圖；圖7是用離子色譜法檢測二氧化硫的檢測限圖譜；圖8是用離子色譜法檢測甲醛溶液的圖譜；圖9是用離子色譜法檢測亞硫酸鈉標準品溶液的圖譜；圖10是用離子色譜法檢測陽性樣品(45#，麥冬)溶液的圖譜；圖11是用離子色譜法檢測陽性樣品(37#，太子參)溶液的圖譜；圖12是用離子色譜法檢測陽性樣品(42#，蔞皮)溶液的圖譜；圖13是用離子色譜法檢測陰性樣品(四#，桂枝)溶液的圖譜。
具體實施例方式為使本發(fā)明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規(guī)實驗方法進行。實施例中所用到的儀器型號等信息如下天平Sartorius CP-225D。實施例中所用到的試劑來源等信息如下氫氧化鈉分析純，廣州化學試劑廠，批號20080503-1，含量96. 0% ；鹽酸分析純，廣州化學試劑廠(規(guī)格:500ml，批號:20090206_1，含量36.0%~ 38. 0% )；無砷鋅粒分析純，天津市化學試劑一廠，批號071013 ；醋酸鉛(三水合乙酸鉛)分析純，廣州化學試劑廠，批號20060501-1，含量 ^ 99. 5% ；硫酸銅分析純，廣州化學試劑廠，批號20060501-1，含量> 99.5% ；醋酸(36%乙酸)分析純，廣州化學試劑廠，20050501-2，含量36.0% 37.0% ；定性濾紙中性102，杭州新華紙業(yè)有限公司(Φ12. 5cm)；塑料吸管姜堰市康輝醫(yī)療器械有限公司C3ml，帶刻度，一次性使用)；亞硫酸鹽類標準品無水亞硫酸鈉分析純，廣州化學試劑廠，批號20090201-2，含量> 97.0% ；亞硫酸氫鈉分析純，廣州化學試劑廠，批號20060201-2，含量(以SO2 計)彡 58. 5% ；偏重亞硫酸鈉分析純，廣州化學試劑廠，批號20081001-2，含量> 96.0% ；樣品57批(均采購自藥房或超市)。實施例1 中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒的一個
5優(yōu)選實施例本實施例是中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒的一個優(yōu)選實施例，該試劑盒中包括裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶、裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶、鹽酸溶液和醋酸鉛試紙。其中，氫氧化鈉溶液的質量體積百分比濃度為0. 125%，其體積為 10ml，該裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶的規(guī)格為15ml。裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶的規(guī)格為10ml，無砷鋅粒的總質量為0. 2克。醋酸鉛試紙選用直徑為2cm的定性濾紙。在其他實施例中，醋酸鉛試紙可以用其他鉛或銅離子類試紙代替，如醋酸銅試紙或硫酸銅試紙。實施例2 利用本實施例1中的試劑盒進行標準品的顯色反應在本實施例中，以亞硫酸鈉及亞硫酸氫鈉為標準品。取亞硫酸鈉及亞硫酸氫鈉標準品各約IOg置IOOml量瓶中，加純化水或蒸餾水適量溶解并稀釋至刻度，作為各自的標準品貯備液。取上述貯備液分別配制成質量體積百分比濃度為0. 0001%,0. 0002%,0. 0005%, 0. 001 %,0. 002 %,0. 005 %,0. 01 %,0. 02%,0. 05 % ,0. 1 % ,0. 2 % ,0. 5 % U % >2 % ,5 %,
10%等標準溶液，并分別取2ml按如下步驟進行顯色反應(1)樣品處理中藥材、中藥飲片取樣量約為lg。將樣品用剪刀(或研磨)剪成(或磨成)細小顆粒，待用。(2)供試液制備將上述樣品置于裝有IOml 0. 125%氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶中，該瓶的規(guī)格為 15ml，擰緊瓶塞，用力振搖1-2分鐘，靜置片刻，取上層澄清溶液2ml作為供試液。氫氧化鈉溶液也可以這樣配置得到在IOml純化水中加入10%氫氧化鈉溶液5-10滴。(3)顯色反應與結果判斷將上述2ml供試液加入裝有無砷鋅粒的西林瓶中，其中，該無砷鋅粒2-3粒，約 0. 2g，該西林瓶的規(guī)格為10ml，再加入2ml的鹽酸溶液，輕輕搖動使混合均勻，并立即將醋酸鉛試紙緊貼置于瓶口。如在10分鐘內顯黃棕色至銀黑色，則可判斷樣品中可能含有二氧化硫、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、低亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽、吊白塊等漂白增色劑。本實施例的結果見圖1-3。其中，圖1是本實施例中亞硫酸鈉及亞硫酸氫鈉標準溶液反應60分鐘的顯色圖；圖2是本實施例中亞硫酸鈉標準溶液反應10分鐘的顯色圖；圖3 是本實施例中亞硫酸氫鈉標準溶液反應10分鐘的顯色圖。結合該三組結果圖，醋酸鉛試紙從棕褐色逐漸變?yōu)楹谏?，濃度越高，顯色越深，顯色越快，幾乎即時顯示棕褐色。而且濃度為 0.2%以上的溶液亦立即變?yōu)槿榘咨寥辄S色混濁液。實施例3 利用本實施例1中的試劑盒進行樣品的顯色反應首先，制備供試液。將處理后的樣品置于裝有IOmlO. 125%氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶中，該瓶的規(guī)格為15ml，擰緊瓶塞，用力振搖1-2分鐘，靜置片刻，待分層，取上層溶液2ml (必要時可過濾)作為供試液。然后進行顯色反應。將上述供試液2ml置于裝有無砷鋅粒的西林瓶中，其中，該無砷鋅粒2粒，約0. 2g，該西林瓶的規(guī)格為10ml，再加入2ml的鹽酸溶液，輕輕搖動使混合均勻，并立即將醋酸鉛試紙緊貼置于瓶口。最后判斷結果。如在10分鐘內顯黃褐色至銀黑色，則可判斷樣品中可能含有二氧化硫、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、低亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽、吊白塊等漂白增色劑。部分樣品顯色結果見圖4。圖4中，A為樣品14(黨參)處理后與試紙反應5分鐘后的結果，B為樣品24(板藍根)處理后與試紙反應4分鐘后的結果，C為樣品21 (黃芩)處理后與試紙反應8分鐘后的結果，D為樣品19 (牛膝)處理后與試紙反應20分鐘后的結果，E為樣品39 (百部)處理后與試紙反應10分鐘后的結果，F(xiàn)為樣品50 (豬苓)處理后與試紙反應10分鐘后的結果，G為樣品46(桔梗)處理后與試紙反應10分鐘后的結果，H為樣品 31 (當歸)處理后與試紙反應10分鐘后的結果，I為樣品36 (知母)處理后與試紙反應10分鐘后的結果，J為樣品43(山藥)處理后與試紙反應10分鐘后的結果。由圖4可見，發(fā)應后出現(xiàn)黃棕色或銀黑色，因此圖中的樣品都為陽性結果樣品，即含有漂白增色劑殘留。實施例4 濾紙的選擇選用定性分析濾紙，剪成直徑約2cm圓形(與西林瓶口吻合)，實驗時分別先用醋酸鉛、醋酸銅、硫酸銅等試液浸潤后待用。實驗時分別用上述已制備好的濾紙置于西林瓶口反應，實驗結果見圖5，圖5為用醋酸鉛、醋酸銅、硫酸銅浸潤試紙后，分別檢測0. 01%、 0. 005%,0. 002%,0. 001%,0. 0005%,0. 0002%,0. 0001% 的 Na2SO3 和 NaHSO3 以及用多種樣品的實驗結果圖。由圖5可見，濃度大于0.002%時，亞硫酸鹽標準溶液及樣品均能有較好的顯色反應。故根據日常實驗要求，選用實驗室常用試液醋酸鉛進行浸潤作用本方法顯色濾紙，其他品種亦可作為替代品。實施例5 樣品取樣量及供試品液體積確定為了適應快篩方法要求的實驗器材簡便、小巧的特點，本方法首先將15ml以下的西林瓶及塑料瓶確定為實驗用瓶進行試驗。由于藥材切碎后較為蓬松，尤其是花類、果實及種子類、菌、藻、地衣類、皮類等藥材，為了確保殘留亞硫酸鹽類物質的充分提取，以及檢測限的確定，經試驗摸索，確定樣品取樣量為0. 5-2. Og,以Ig作為基礎，可根據實驗現(xiàn)象進行適當調整取樣量，特別是含淀粉類較多的藥材，可適當減少取樣量，以免顯色時形成漿糊狀液而妨礙反應，影響顯色效果。而供試液則取2ml作為基礎，再根據樣品的具體情況適當增減，以提高檢出率。實施例6 顯色條件的確定(1)顯色時間選用不同濃度亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉系列標準溶液，按上述檢測與評價方法進行顯色試驗，結果見表1和表2，其中，表1是亞硫酸鈉標準溶液的顯色結果記錄表，表2是亞硫酸氫鈉標準溶液的顯色結果記錄表。表 權利要求
1.一種中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒，其特征在于，包括裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶、裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶、鹽酸溶液和鉛或銅離子類試紙。
2.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述氫氧化鈉溶液的質量體積百分比濃度為0. 125%。
3.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述氫氧化鈉溶液的體積為10ml。
4.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶的規(guī)格為15ml。
5.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述無砷鋅粒的總質量為0. 1-0. 3克。
6.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述裝有無砷鋅粒的西林瓶的規(guī)格為10ml。
7.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述鉛或銅離子類試紙選用定性濾紙。
8.根據權利要求7所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述定性濾紙的直徑為1. 5-2. 5cm。
9.根據權利要求1所述的中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒， 其特征在于，所述鉛或銅離子類試紙為醋酸鉛試紙、醋酸銅試紙或硫酸銅試紙。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留的半定量檢測試劑盒，該試劑盒包括裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶、裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶、鹽酸溶液和鉛或銅離子類試紙。氫氧化鈉溶液的質量體積百分比濃度為0.125％，其體積為10ml，裝有氫氧化鈉溶液的具塞西林瓶的規(guī)格為15ml。無砷鋅粒的總質量為0.1-0.3克，裝有無砷鋅粒的具塞西林瓶的規(guī)格為10ml。鉛或銅離子類試紙為醋酸鉛試紙、醋酸銅試紙或硫酸銅試紙。本發(fā)明的試劑盒具有攜帶方便、操作簡單、檢測快速、成本低廉、半定量測定、準確度高等優(yōu)點；極大縮短檢測時間，適用于監(jiān)督現(xiàn)場快速篩查中藥材、中藥飲片中漂白增色劑殘留，同時進行半定量分析。
文檔編號G01N21/78GK102156122SQ20101011650
公開日2011年8月17日 申請日期2010年2月12日 優(yōu)先權日2010年2月12日
發(fā)明者嚴全鴻, 林奇藝, 林錦鋒, 謝志潔 申請人:廣東省藥品檢驗所