專利名稱:一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種具有中藥組合物的質(zhì)量控制方法,特別涉及紅藥凝膠的質(zhì)量控制 方法。
背景技術(shù):
跌打損傷、筋骨瘀痛主要指因跌撲、擊打等造成的軟組織損傷、外傷腫脹疼痛、皮 肉破損出血,也包括摔傷、金刃傷等。其主要病理為淤血壅滯,血閉氣阻,故以疼痛、腫脹為 主要表現(xiàn)。目前西醫(yī)一般多以消炎止痛為主,只能暫時(shí)緩解癥狀,且西藥治療多為有副作 用。凝膠劑是近年來最活躍的藥品新劑型之一,是近幾年局部外用制劑研發(fā)的熱點(diǎn),其優(yōu)勢(shì) 在于制備工藝簡(jiǎn)單;外觀光滑、透明細(xì)膩;無油膩感,易清洗、不污染衣物;局部無刺激性, 不妨礙皮膚的正常功能,并能在皮膚表面形成一層極薄的保護(hù)膜;稠度、黏度適宜,易于涂 布使用;穩(wěn)定性較好。紅藥凝膠由三七、白芷、土鱉蟲、川芎、當(dāng)歸、紅花、冰片、鹽酸苯海拉 明、顛茄流浸膏等藥味輔以適當(dāng)輔料加工制成的凝膠劑,具有祛瘀生新、活血止痛之功效, 用于跌打損傷,筋骨瘀痛。為了更好的控制紅藥凝膠的質(zhì)量,有必要研究紅藥凝膠的質(zhì)量控 制方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的就是在于公開紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的1、一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè) 定方法中的一種或幾種(1)鑒別A取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸干, 殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液或者取本品3g,加乙醚15ml,振搖提取5分 鐘,過濾,殘?jiān)鼡]干乙醚,殘?jiān)右掖糏ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品, 加醋酸乙酯制成每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005 年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上,以石油醚(30 60°C)-乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。B取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照藥 材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照藥 材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4μ1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
C取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過,濾 液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解,制 成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜 法(中國藥典2005年版一部附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG)20M為固定液,涂布濃度為 10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ1,注入氣相色譜儀。供試品 應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。D取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液IOml,用乙醚振搖提取3次,每次20ml, 合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì)照品, 加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版 一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸乙 酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱風(fēng) 吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)含量測(cè)定A 三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 30分鐘,放冷,用甲醇補(bǔ)足減 失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中, 用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液 洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合 并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并 移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供 試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量, 加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合 溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流 動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按 三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D) 測(cè)定。流動(dòng)相條件如下 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。B鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用 乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量, 加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液 相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μ1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。優(yōu)選的紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法為
鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4 μ 1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解, 制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色 譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布 濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。 供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱 風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 30分鐘,放冷,用甲醇補(bǔ)足減 失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中, 用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液 洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合 并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并 移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供 試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量, 加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合
6溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流 動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按 三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D) 測(cè)定。流動(dòng)相條件如下
分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。本品每g含三七以人參皂苷Rgl (C42H72O14)、人參皂苷Rbl (C54H92O23)和三七皂苷 R1 (C47H80O18)三者的總量計(jì),不得少于3. 7mg。(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用 乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量, 加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液 相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶 液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。本品每g含鹽酸苯海拉明(C17H21NO · HCl),應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0% 110. 0%。其中1、薄層鑒別中白芷的提取方法優(yōu)選為取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙 醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。2、含量測(cè)定方法中三七優(yōu)選的提取溶媒為甲醇,優(yōu)選的提取方式為功率250W,頻 率40KHz條件下超聲提取,優(yōu)選的提取時(shí)間為超聲30分鐘。鹽酸苯海拉明優(yōu)選的提取溶媒 為乙醇,優(yōu)選的提取方式為功率250W,頻率40KHz條件下超聲提取,優(yōu)選的提取時(shí)間為超聲 30分鐘?,F(xiàn)行檢測(cè)方法是依據(jù)藥典會(huì)國家標(biāo)準(zhǔn)提高要求,且紅藥凝膠處方組成比較復(fù)雜, 既含有中藥活性成分,又含有化藥活性成分,主要從操作簡(jiǎn)單、節(jié)約檢測(cè)、降低試劑毒性、提 高專屬性著手進(jìn)行修訂、補(bǔ)充、完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法,紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法有如下特占.
^ \\\ ·方中三七為君藥,具有止血散瘀,消腫定痛的功效,與制劑的功能主治吻合。因此, 選用三七中主要化學(xué)成分人參皂苷Rgl、Rbl和三七皂苷R1的總量作為紅藥凝膠的質(zhì)量控制 指標(biāo)。同時(shí),對(duì)于方中鹽酸苯海拉明的含量進(jìn)行研究,確定了其含量測(cè)定的方法。實(shí)驗(yàn)例1鑒別藥典中收載的白芷的鑒別方法中供試品溶液的制備是采用加乙醚浸泡后振搖提 取的方法,由于本制劑為凝膠劑,干擾因素較多,采用藥典方法分離后斑點(diǎn)色帶重,斑點(diǎn)不 清晰。故選用優(yōu)選后的提取方法制備供試品溶液,取得良好的分離效果。取缺白芷的群藥, 按所確定的紅藥凝膠制備工藝方法制成陰性樣品制劑,再按供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液,試驗(yàn)結(jié)果表明,薄層色譜斑點(diǎn)清晰,陰性樣品無干擾。試驗(yàn)例2含量測(cè)定1、三七1)儀器與試藥儀器島津LC-2010高效液相色譜儀。色譜柱Intersil C18柱。對(duì)照品人參皂苷Rgl對(duì)照品(批號(hào)0703-9812);人參皂苷Rbl對(duì)照品(批號(hào) 110704-200217);三七皂苷R1對(duì)照品(批號(hào)0745-200006),由中國藥品生物制品檢定所提
供,供含量測(cè)定用藥品。試劑乙腈為色譜試劑,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。2)色譜條件(1)流動(dòng)相的選擇參考有關(guān)文獻(xiàn),測(cè)定三七中人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、三七皂 苷隊(duì)的流動(dòng)相多為乙腈-水梯度洗脫,經(jīng)試驗(yàn),采用如下流動(dòng)相, 對(duì)照品及供試品溶液中色譜峰的峰形和分離效果均較好。故優(yōu)選三七流動(dòng)相為乙 腈_水梯度洗脫,作為紅藥凝膠含量測(cè)定的流動(dòng)相。(2)檢測(cè)波長的選擇分別取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、三七皂苷R1對(duì)照品,加 甲醇分別制成20μ g/ml、30y g/ml、50y g/ml的溶液,用紫外可見分光光度儀分別進(jìn)行 200-400nm波長的掃描,可見人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、三七皂苷R1均在203nm處有最大吸 收峰,故選擇203nm作為檢測(cè)波長。3)供試品制備方法的考察(1)提取溶媒的篩選取本品適量,混勻,取3份,每份約2g,分別精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞 三角瓶中,分別精密加入甲醇、乙醇和70%乙醇各50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W, 頻率40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失重量,濾過,精密量取續(xù)濾液 25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5次 (30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液洗滌 3 次(30ml,30ml,20ml),棄去 氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严?滌2次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至 刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,制得供試品溶液I、II、III,按含量測(cè)定 項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見表1。表1提取溶媒篩選結(jié)果 結(jié)果表明,三種溶媒均可以提取出三七中的有效成分,但以甲醇為溶媒制備的供 試品含量最高,故優(yōu)選提取溶媒為甲醇。(2)提取方式的篩選取本品適量,混勻,取3份,每份約2g,分別精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞三 角瓶中,分別精密加入甲醇50ml,稱定重量,分別超聲處理(功率250w ;頻率40KHZ) 30分 鐘、加熱回流1小時(shí)、靜置24小時(shí),再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失重量,濾過,精密量取續(xù)濾 液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5 次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液洗滌 3 次(30ml,30ml,20ml),棄 去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐?洗滌2次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋 至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μπι)濾過,取續(xù)濾液,制得供試品溶液Ι、ΙΙ、ΙΙΙ,按前述技 術(shù)方案含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見表2表2提取方式篩選結(jié)果 結(jié)果表明,三種方法均可以提取出三七中的有效成分,但超聲處理與回流提取效 果較好,超聲能耗少且操作簡(jiǎn)便,故優(yōu)選提取方式為超聲處理。(3)提取時(shí)間的篩選取本品適量,混勻,取3份,每份約2g,分別精密稱定,加硅藻土 2g,拌勻,置具塞三 角瓶中,分別精密加入甲醇50ml,稱定重量,分別超聲處理(功率250w ;頻率40KHZ) 15分 鐘、30分鐘、45分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml, 蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml, 30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試 液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次 (5ml, 5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度, 搖勻,用微孔濾膜(0.45μπι)濾過,取續(xù)濾液,制得供試品溶液I、II、III,按前述技術(shù)方案 含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見表3。表3提取時(shí)間篩選結(jié)果 由表3可知,超聲提取15-45分鐘均可以有效提取出三七中有效成分,但超聲提取 30分鐘和45分鐘的總量均高于15分鐘,且30分鐘和45分鐘效果相當(dāng),表明超聲30分鐘 已基本提取完全。綜合考慮,優(yōu)選超聲提取時(shí)間為30分鐘。4)方法學(xué)驗(yàn)證色譜條件及與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流 動(dòng)相A,以水為流動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為 203nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。色譜條件如下
時(shí)間(分鐘) ^ 流動(dòng)相A (%)流動(dòng)相B (% )0-1520-4080-60供試品溶液的制備取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 2g,拌勻,置 具塞三角瓶中,精密加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250w ;頻率40KHZ)30分 鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?60ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml, 20ml, 20ml),合并正丁醇液,用氨試液洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液 用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml), 棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔 濾膜(0.45μπι)濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂 苷R1對(duì)照品適量,加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂 苷R1O. 05mg的混合溶液,即得對(duì)照品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μ 1,注入液相色譜儀,測(cè) 定,即得。
0073](1)陰性干擾排除試驗(yàn)按本處方量稱取缺三七的群藥,按照紅藥凝膠制備工藝的提取方法,制成陰性樣 品,再按“供試品溶液的制備”方法制成陰性樣品溶液,按照上述含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行 檢測(cè),結(jié)果表明,分別在人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl和三七皂苷R1出峰位置未見其它峰(見
圖1紅藥凝膠三七樣品HPLC圖;圖2紅藥凝膠三七陰性樣品HPLC圖),說明方中其他藥材 對(duì)以上三種色譜峰的測(cè)定無干擾。(2)線性關(guān)系考察分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl和三七皂苷R1對(duì)照品適量,加甲醇溶解并 稀釋,制得濃度分別為0. 185mg/ml、0. 260mg/ml和0. 075mg/ml的對(duì)照品溶液。分別精密吸 取該溶液1、 、5、7、10ml,置于IOml的容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,各進(jìn)樣20 μ 1,連續(xù)進(jìn)樣2次,測(cè)定峰面積,結(jié)果見表4。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線(見圖3人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)曲線圖、圖4人參皂苷Rbl標(biāo)準(zhǔn)曲線圖、圖5三七皂苷R1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖)。 表4人參皂苷Rgl線性關(guān)系考察 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),色譜峰峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以進(jìn)樣量對(duì)峰面積 進(jìn)行線性回歸,得回歸方程y = 535290X-2790. 7,r = 0. 9999,說明人參皂苷Rgl進(jìn)樣量在 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),色譜峰峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以進(jìn)樣量對(duì)峰面積 進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為y = 199719x-1586.4, r = 0. 9999,說明人參皂苷Rbl進(jìn)樣量 在0. 52 5. 20 μ g之間,線性關(guān)系良好。表6三七皂苷R1線性關(guān)系考察 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),色譜峰峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以進(jìn)樣量對(duì)峰面積 進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為y = 229856X+54. 456,r = 0. 9999,說明三七皂苷R1進(jìn)樣量在 0. 15 1.50 μ g之間,線性關(guān)系良好。
11
(3)取本品按上述條件制備供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,分別求得人參皂苷Rgl、人 參皂苷Rbl和三七皂苷R1的峰面積,結(jié)果見表7、8、9。表7人參皂苷Re1精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表 表 9 試驗(yàn)結(jié)果表明,精密度試驗(yàn)RSD < 2%,符合相關(guān)的要求。(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品,按上述條件制備供試品溶液,于0h,2h,4h,8h, 12h,24h進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié) 果見表10、11、12。表10人參皂苷Rgl穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表
表11人參皂苷Rbl穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表
進(jìn)樣時(shí)間峰面積平均峰面積RSD(%)
表12三七皂苷R1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表
由上表可知,RSD < 2%,說明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定。(5)重復(fù)性試驗(yàn)取本品,按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液,按所確定的色譜條件進(jìn)行 測(cè)定,以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl和三七皂苷R1的總量,結(jié)果見表13。表13重復(fù)性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表 由上表可知,RSD < 3%,說明方法重復(fù)性良好。(6)回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法測(cè)定。取本品適量,混勻,取約lg,精密稱定,平行稱取6份,分別 加入適量的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl和三七皂苷R1對(duì)照品,按照所確定的方法測(cè)定。以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算人參皂苷Rgl的含量,按以下公式計(jì)算回收率。根據(jù)重復(fù)性試驗(yàn) 可知,樣品中人參皂苷Rgl的平均含量為2. 1849mg/g。 表14人參皂苷Rgl回收率測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)表 以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算人參皂苷Rbl的量,按以下公式計(jì)算回收率,結(jié)果見表15。根據(jù) 重復(fù)性試驗(yàn)可知,樣品中人參皂苷Rbl的平均含量為2. 0536mg/g。 表15人參皂苷Rbl回收率測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)表 以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算三七皂苷R1的量,按以下公式計(jì)算回收率,結(jié)果見表16。根據(jù) 重復(fù)性試驗(yàn)可知,樣品中三七皂苷R1的平均含量為0. 3739mg/g。 表16三七皂苷R1回收率測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)表 由以上結(jié)果可知,人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl和三七皂苷R1的平均加樣回收率均在 96. 0 % 99. 0 %之間,且RSD均小于2 %,說明該方法準(zhǔn)確可靠。
0125]2、鹽酸苯海拉明1)儀器與試藥儀器島津LC-2010高效液相色譜儀。色譜柱Intersil C18柱。對(duì)照品鹽酸苯海拉明對(duì)照品(批號(hào)0066-9705),由中國藥品生物制品檢定所提
供,供含量測(cè)定用藥品。
試劑乙腈為色譜試劑,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。2)色譜條件(1)流動(dòng)相的選擇參考有關(guān)文獻(xiàn),鹽酸苯海拉明的含量測(cè)定中一般流動(dòng)相為乙 腈-水_十二烷基硫酸鈉_磷酸系統(tǒng),經(jīng)試驗(yàn),在流動(dòng)相為乙腈-水-十二烷基硫酸鈉_磷 酸(48 52 0.4 0.1)時(shí),對(duì)鹽酸苯海拉明的色譜峰分離效果較好。故優(yōu)選鹽酸苯海 拉明流動(dòng)相為乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0.1),作為紅藥凝膠含 量測(cè)定的流動(dòng)相。(2)檢測(cè)波長的選擇取鹽酸苯海拉明對(duì)照品,加水制成15μ g/ml的溶液,用紫外 可見分光光度儀進(jìn)行200-400nm波長的掃描,可見鹽酸苯海拉明在258nm處有最大吸收峰, 故選擇258nm作為檢測(cè)波長。3)供試品制備方法的考察(1)提取溶媒的篩選取本品適量,混勻,取3份,每份約4g,分別精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞 三角瓶中,分別精密加入甲醇、乙醇和水各50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率 40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,制得供試品 溶液I、II、III,按含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見表17。表17提取溶媒篩選結(jié)果 結(jié)果表明,三種溶媒均可以提取出鹽酸苯海拉明,但以乙醇為溶媒制備的供試品 含量最高,故優(yōu)選提取溶媒為乙醇。(2)提取方式的篩選取本品適量,混勻,取3份,每份約4g,分別精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞三 角瓶中,分別精密加入乙醇50ml,稱定重量,分別超聲處理(功率250w ;頻率40KHZ) 30分 鐘、加熱回流1小時(shí)、靜置24小時(shí),再稱定重量,用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液, 即得,制得供試品溶液Ι、Π、ΙΙΙ,按上述技術(shù)方案含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果 見表18。表18提取方式篩選結(jié)果 結(jié)果表明,三種方法均可以提取出鹽酸苯海拉明,但以超聲處理制備的供試品溶 液含量較高,且操作簡(jiǎn)便,故優(yōu)選提取方式為超聲處理。(3)提取時(shí)間的篩選取本品適量,混勻,取3份,每份約4g,分別精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞三 角瓶中,分別精密加入乙醇50ml,稱定重量,分別超聲處理(功率250w ;頻率40KHZ) 15分 鐘、30分鐘、45分鐘,放冷,再稱定重量,用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得, 制得供試品溶液I、II、III,按前述技術(shù)方案含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見表 19。表19提取時(shí)間篩選結(jié)果 由表19可知,超聲15-45分鐘均可以有效地提取出鹽酸苯海拉明,但超聲提取30 分鐘和45分鐘的總量均高于15分鐘,且30分鐘和45分鐘效果相當(dāng),表明超聲30分鐘已 基本提取完全。故優(yōu)選超聲提取時(shí)間為30分鐘。4)方法學(xué)驗(yàn)證色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙 腈-水-十二烷基硫酸鈉_磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm,理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。供試品溶液的制備取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置 具塞錐形瓶中,精密加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 30分鐘, 放冷,再稱定重量,用乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量,加乙醇制成每Iml含 0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μ1,注入液相色譜儀,測(cè) 定,即得。(1)陰性干擾排除試驗(yàn)按本處方量稱取缺鹽酸苯海拉明的群藥,按照紅藥凝膠制備工藝的提取方法,制 成陰性樣品,再按“供試品溶液的制備”方法制成陰性樣品溶液,按照含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法 進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,在鹽酸苯海拉明出峰位置未見其它峰(見圖6紅藥凝膠鹽酸苯海拉明 樣品HPLC圖;圖7紅藥凝膠鹽酸苯海拉明陰性樣品HPLC圖),說明方中其他藥材對(duì)鹽酸苯 海拉明的測(cè)定無干擾。(2)線性關(guān)系考察鹽酸苯海拉明線性關(guān)系考察精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量,加乙醇溶解并稀釋,制得濃度為0. 3mg/ml的 對(duì)照品溶液。分別精密吸取該溶液l、2、5、7、10ml,置于IOml的容量瓶中,加乙醇稀釋至刻
17度,搖勻,各進(jìn)樣20 μ 1,連續(xù)進(jìn)樣2次,測(cè)定峰面積,結(jié)果見表20。以鹽酸苯海拉明的進(jìn)樣 量為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖8鹽酸苯海拉明標(biāo)準(zhǔn)曲線圖)。
表20鹽酸苯海拉明線性關(guān)系考察
進(jìn)樣量(U g)
峰面積(n=2) 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),色譜峰峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以進(jìn)樣量對(duì)峰面積 進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為1 = 84602X+2199. 5r = 0. 9999,說明鹽酸苯海拉明進(jìn)樣量在 0. 6 6. 0 μ g之間,線性關(guān)系良好。
(3)取本品按上述條件制備供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,結(jié)果見表2L 表21精密度實(shí)驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果表明,鹽酸苯海拉明的精密度試驗(yàn)RSD < 1%,符合相關(guān)的要求。(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品,按上述條件制備供試品溶液,于0h,2h,4h,8h,12h,24h進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié) 果見表22。表22穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
18 由上表可知,RSD < 2%,說明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定。(5)重復(fù)性試驗(yàn)取本品,按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液,按所確定的色譜條件進(jìn)行 測(cè)定,以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算鹽酸苯海拉明的含量,結(jié)果見表23。表23重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 由上表可知,RSD < 2%,說明用高效液相色譜法測(cè)定紅藥凝膠中鹽酸苯海拉明的 含量,方法重復(fù)性良好。(6)回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法測(cè)定。取本品適量,混勻,取約2g,精密稱定,平行稱取6份,分別 加入適量的鹽酸苯海拉明對(duì)照品,按照所確定的方法測(cè)定,以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算鹽酸苯海拉 明的含量,按以下公式計(jì)算回收率,結(jié)果見表24。由重復(fù)性試驗(yàn)可知,樣品中鹽酸苯海拉明的平均含量為3. 4338mg/g。 表24補(bǔ)骨脂素加樣回收率測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)表 試驗(yàn)結(jié)果表明,加樣回收率RSD值均小于2%,說明該方法準(zhǔn)確可信。
具體實(shí)施例方式實(shí)驗(yàn)例1 紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4 μ 1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解, 制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色 譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布 濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。 供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱
20風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 30分鐘,放冷,用甲醇補(bǔ)足減 失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中, 用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液 洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合 并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并 移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供 試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量, 加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合 溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流 動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按 三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D) 測(cè)定。流動(dòng)相條件如下
時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A ( % )流動(dòng)相B (%) 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。本 品每g含三七以人參皂苷Rgl (C42H72O14)、人參皂苷Rbl (C54H92O23)和三七皂苷R1 (C47H80O18)三 者的總量計(jì),不得少于3. 7mg。(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用 乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量, 加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液 相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶 液各20μ1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。本品每g含鹽酸苯海拉明(C17H21NO* HCl),應(yīng)為 標(biāo)示量的90. 0% 110. 0%。試驗(yàn)例2 紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供
21試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4μ1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解, 制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色 譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布 濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。 供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱 風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入70 %乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 30分鐘,放冷,用70 %乙 醇補(bǔ)足減失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分 液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液, 用氨試液洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄 去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲 醇溶解,并移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾 液,即得供試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照 品適量,加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg 的混合溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以 水為流動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論 板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄 VI D)測(cè)定。流動(dòng)相條件如下
時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A (%)流動(dòng)相B (%)-
0 1520—4080—60 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
22
(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用 乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量, 加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液 相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶 液各20μ1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。試驗(yàn)例3 紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4μ 1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解, 制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色 譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布 濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。 供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱 風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七:取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密
23加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 30分鐘,放冷,用甲醇補(bǔ)足減 失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中, 用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液 洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合 并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并 移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供 試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量, 加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合 溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流 動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按 三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D) 測(cè)定。流動(dòng)相條件如下
“~時(shí)間(召¥3流動(dòng)相A (%")流動(dòng)相B (%)
「02191 ------------
0 1520—4080—60分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入水50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 30分鐘,放冷,再稱定重量,用乙 醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量,加 乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液 相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶 液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。試驗(yàn)例4 紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4μ 1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)
24照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解, 制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色 譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布 濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。 供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱 風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 45分鐘,放冷,用甲醇補(bǔ)足減 失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中, 用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液 洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合 并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并 移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供 試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量, 加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合 溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流 動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按 三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D) 測(cè)定。流動(dòng)相條件如下 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 45分鐘,放冷,再稱定重量,用 乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量, 加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液
25相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶 液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。試驗(yàn)例5 紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4μ1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解, 制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色 譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布 濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。 供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱 風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W ;頻率40KHz) 15分鐘,放冷,用甲醇補(bǔ)足減 失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中, 用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液 洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合 并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并 移至IOml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供 試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量,加甲醇制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合 溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流 動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按 三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D) 測(cè)定。流動(dòng)相條件如下 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入乙醇50ml,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz) 15分鐘,放冷,再稱定重量,用 乙醇補(bǔ)足減失重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量, 加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為 1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液 相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶 液各20μ1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。試驗(yàn)例6 紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸 干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成 每Iml含0. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取供試品溶液8 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚 (30 60°C)_乙醚(3 2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)取本品lg,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴(40°C )蒸干,殘?jiān)?加石油醚(30 60°C )2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照 藥材各0. 5g,分別加石油醚(30 60°C ) 10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照 藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 4μ 1,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯 (17 3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì) 照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品lg,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過,
濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解,
制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各lmg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照氣相色
譜法(中國藥典2005年版一部附錄附錄VI E)試驗(yàn),以聚乙二醇(PEG) 20M為固定液,涂布
濃度為10%,柱溫為120°C。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 2μ 1,注入氣相色譜儀。
供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。
(4)取本品5g,加水IOml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次 20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì) 照品,加甲醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸 乙酯-甲醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱 風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定(1)三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土 4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入甲醇50ml,稱定重量,回流提取1小時(shí),放冷,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,濾過,精密量取 續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖 提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液洗滌3次(30ml,30ml, 20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘 渣加乙醚洗滌2次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并移至IOml量瓶中,用 甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取 人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量,加甲醇制成每Iml含 人參皂苷Rg1O. 15mg、人參皂苷Rb1O. 15mg和三七皂苷R1O. 05mg的混合溶液,即得對(duì)照品溶 液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流動(dòng)相B,按下表中的規(guī) 定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng) 不低于2000,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。流動(dòng)相條件如 下 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。(2)鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土 6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密 加入乙醇50ml,稱定重量,回流提取1小時(shí),放冷,再稱定重量,用乙醇補(bǔ)足減失重量,濾 過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量,加乙醇制成每Iml含 0.2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈_水-十二烷基 硫酸鈉-磷酸(48 52 0.4 0. 1)為流動(dòng)相;柱溫30°C ;流速為1. 5ml/min ;檢測(cè)波長 為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液相色譜法(中國藥典 2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μ1,注入液相 色譜儀,測(cè)定,即得。
權(quán)利要求
一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法中的一種或幾種(1)鑒別A白芷的薄層鑒別 取本品2g,加硅藻土2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)哟姿嵋阴?ml使溶解,作為供試品溶液或者取本品3g,加乙醚15ml,振搖提取5分鐘,過濾,殘?jiān)鼡]干乙醚,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品,加醋酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn),吸取供試品溶液8μl、對(duì)照品溶液2μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30~60℃) 乙醚(3∶2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。B川芎、當(dāng)歸的薄層鑒別 取本品1g,加乙醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴40℃蒸干,殘?jiān)臃悬c(diǎn)30~60℃石油醚2ml使溶解,離心,取上清液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照藥材各0.5g,分別加沸點(diǎn)30~60℃石油醚10ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液分別作為對(duì)照藥材溶液。照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷 醋酸乙酯(17∶3)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。C冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦的氣相鑒別 取本品1g,置具塞三角瓶中,加醋酸乙酯10ml,振搖,超聲處理10分鐘,濾過,濾液作為供試品溶液。另取冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦對(duì)照品適量,加醋酸乙酯溶解,制成含冰片、樟腦、水楊酸甲酯各1mg,薄荷腦2mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照中國藥典2005年版一部附錄VI E氣相色譜法試驗(yàn),以聚乙二醇20M為固定液,涂布濃度為10%,柱溫為120℃。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1~2μl,注入氣相色譜儀。供試品應(yīng)中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。D顛茄流浸膏的薄層鑒別 取本品5g,加水10ml使溶解,加濃氨試液10ml,用乙醚振搖提取3次,每次20ml,合并乙醚液,水浴蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取硫酸阿托品對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯 甲醇 濃氨試液(17∶2∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液,熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)含量測(cè)定A三七取本品適量,混勻,稱約2g,精密稱定,加硅藻土4g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密加入提取溶媒甲醇或乙醇或70%乙醇50ml,稱定重量,提取方式超聲處理(功率250W;頻率40KHz)15 45分鐘或加熱回流1小時(shí)或靜置24小時(shí),放冷,用相同提取溶媒補(bǔ)足減失的重量,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀?0ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml,20ml),合并正丁醇液,用氨試液洗滌3次(30ml,30ml,20ml),棄去氨試液,正丁醇液用水洗滌2次,每次30ml,棄去水液,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)右颐严礈?次(5ml,5ml),棄去乙醚液,殘?jiān)鼡]干,加甲醇溶解,并移至10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜0.45μm濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品和三七皂苷R1對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg10.15mg、人參皂苷Rb10.15mg和三七皂苷R10.05mg的混合溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流動(dòng)相B,按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1.5ml/min;檢測(cè)波長為203nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,照中國藥典2005年一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定。流動(dòng)相條件如下分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。B鹽酸苯海拉明取本品適量,混勻,取約4g,精密稱定,加硅藻土6g,拌勻,置具塞錐形瓶中,精密加入提取溶媒甲醇或乙醇或水50ml,稱定重量,提取方式超聲處理(功率250W;頻率40KHz)15 45分鐘或加熱回流1小時(shí)或靜置24小時(shí),放冷,用相同提取溶媒補(bǔ)足減失的重量,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量,加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液,即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈 水 十二烷基硫酸鈉 磷酸(48∶52∶0.4∶0.1)為流動(dòng)相;柱溫30℃;流速為1.5ml/min;檢測(cè)波長為258nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,照高效液相色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI D)測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于白芷鑒別中供試 品溶液的提取方法為取本品2g,加硅藻土 2g,拌勻,加乙醚20ml,超聲處理10分鐘,濾過, 濾液蒸干,殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解,作為供試品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于含量測(cè)定方法中 三七中有效成分測(cè)定的提取溶媒為甲醇;鹽酸苯海拉明的提取溶媒為乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于含量測(cè)定方法中 三七中有效成分測(cè)定的提取方式為功率250W,頻率40KHz條件下超聲處理;鹽酸苯海拉明 的提取方式為功率250W,頻率40KHz條件下超聲處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于含量測(cè)定方法中 三七中有效成分測(cè)定的提取時(shí)間為30分鐘;鹽酸苯海拉明的提取時(shí)間為30分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法,其特征在于含量測(cè)定方法中 含量限度為本品每g含三七以人參皂苷Rgl (C42H72O14)、人參皂苷Rbl (C54H92O23)和三七皂苷 R1 (C47H80O18)三者的總量計(jì),不得少于3. 7mg ;每g含鹽酸苯海拉明(C17H21NO · HCl),應(yīng)為標(biāo) 示量的90. 0% 110. 0%。全文摘要
本發(fā)明公開了紅藥凝膠的質(zhì)量控制方法。該方法采用高效液相色譜法對(duì)紅藥凝膠中的三七、鹽酸苯海拉明進(jìn)行含量測(cè)定,并對(duì)有效物質(zhì)進(jìn)行鑒別,該方法是依據(jù)國家藥典會(huì)國家標(biāo)準(zhǔn)提高要求,體現(xiàn)了操作簡(jiǎn)單、節(jié)約檢測(cè)、降低試劑毒性、提高專屬性等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/90GK101897827SQ20091008499
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2009年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日
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