專利名稱：用于測定患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者中的氨基末端proANP的方法
用于測定患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者中
的氨基末端proANP的方法 本發(fā)明涉及用于患有心臟病或懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)后和 治療隨訪的體外方法，其包括步驟-提供患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的樣品，-使用至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體測定所述樣品中
的氨基末端proANP或其具有12至98個氨基酸的部分肽，-將測定的氨基末端proANP水平或其部分肽的水平歸因于臨床現(xiàn)象(clinical picture)，其中所述歸因是不依賴患者的BMI進(jìn)行的。 本發(fā)明還涉及用于進(jìn)行本發(fā)明方法的快速檢驗測定法，適合于根據(jù)本發(fā)明的方法 和測定法的抗體的用途。 心力衰竭(HF)，特別地在急診科(ED)，是常見的，與高發(fā)病率和死亡率相關(guān)的，并 且難以診斷的疾病[Cleland， J. G.等人，Eur Heart J，2003.24(5) :p. 442-63 ;Mosterd， A.等人，Heart, 2007. 93(9) :p. 1137-46]。呼吸困難是大多數(shù)HF患者的首要癥狀(leading symptom)。不幸的是，病史和體檢都不能準(zhǔn)確地區(qū)分HF引起的呼吸困難和其他原因例如肺 部疾病引起的呼吸困難[Mueller, C.等人，Can J Cardiol， 2005. 21 (11) :p. 921-4 ;Wang， CS.等人，Jama， 2005. 294(15) :p. 1944-56]。然而，準(zhǔn)確的診斷是選擇最恰當(dāng)?shù)闹委熕匦?的。 B型利鈉肽是已顯示在HF的診斷中非常有幫助的HF的定量標(biāo)志。B型利鈉肽 (BNP)和其氨基末端片段N末端B型利鈉肽前肽(N-terminalpro-B-type natriuretic p印tide) (NT-proBNP)的使用顯著提高了 ED中的診斷準(zhǔn)確度[Jan腦i， J. L. ， Jr，等人， Am J Cardiol, 2005. 95(8) :p. 948—54 ;Maisel， A. S.等人，N Engl J Med， 2002. 347 (3): p. 161-7]，從而改善了患者的評價和治療[Moe， G.W.等人，Circulation, 2007. 115(24): p. 3103-10 ;Mueller， C.等人，N Engl J Med， 2004. 350 (7) :p. 647-54]。
心房利鈉肽(ANP)在循環(huán)中的濃度是BNP的大約50至100倍[Pandey， K. N.， P印tides，2005. 26(6) :p. 901-32.]。因而，由增加的ANP反映的生物學(xué)信號可以在病理生 理上，從而在診斷上甚至比BNP的信號更重要。盡管如此，關(guān)于ANP和其前體的診斷性能， 知之甚少[Cowie，M.R.等人，Lancet, 1997. 350 (9088) :p. 1349-53]。成熟的ANP來源于前 體N末端proANP (NT-proANP)，其在循環(huán)中顯著地比成熟肽更穩(wěn)定，從而被認(rèn)為是更可靠的 分析物[Vesely，D丄，IUBMB Life, 2002. 53 (3) :p. 153-9]。然而，由于NT-pro ANP可能經(jīng) 歷進(jìn)一步片段化的事實[C即pellin，E.等人，Clin Chim Acta, 2001. 310 (1) :p. 49-52]，用 于中間區(qū)域proANP (MR-proANP)的測量的免疫測定法可具有優(yōu)點[Morgenthaler， N. G.等 人，Clin Chem， 2004. 50(1) :p. 234-6]。 心臟病例如慢性心力衰竭(CHF)、急性心力衰竭、急性冠狀動脈綜合征和心肌梗塞 廣泛傳播并且通常具有破壞性預(yù)后。心臟病的早期診斷可通過及時的保護(hù)和治療措施來提 高醫(yī)療成效(patient outcome) [Jortani， SA.等人，Clin Chem 2004;50:265-278]。豐 富的數(shù)據(jù)暗示利鈉肽的測定在驗證被懷疑的心臟病的臨床診斷和預(yù)后中代表了對胸部X
3射線檢查、心電圖和多普勒超聲心動圖的有用補充[Cowie， M.R，等人，Eur Heart J2003 ; 24 :1710-1718]。利鈉肽家庭的最重要的成員是心房利鈉肽(ANP)和B型利鈉肽(BNP)。 兩者都是心臟功能的標(biāo)志。除了幫助建立CHF的診斷的用途[Cowie， M.R.等人，Lancet, 1997.350(9088) :p. 1349-53 ;Mueller， C.等人，N Engl J Med， 2004. 350 (7) :p. 647-54] 外，它們還用于患有穩(wěn)定的或新近失代償性CHF[Omland， T.等人，Cirulation 1996 ;93 : 1963-1969 ; ， Anand， I. S.等人，Circulation 2003 ;107 :1278-1283 ;Cheng， V.等人， J AmColl Cardiol 2001， 37 :386-391]，或患有急性冠狀動脈綜合征[Morrow, D. A.等人， JAMA 2005， Dec. 14 ;294(22) :2866-71]的患者的風(fēng)險歸類以及，此外在CHF治療中用于隨 訪和指導(dǎo)[Troughton， R. W.等人，Lancet2000， 355 :1126-1130]。 BNP和其前體的其他切割產(chǎn)物N-末端proBNP (NT-proBNP)目前都用于CHF患者的 評估。ANP源于其前體proANP的切割。另一種切割產(chǎn)物N末端proANP (NT-proANP)在循環(huán) 中明顯比ANP穩(wěn)定。從而NT-proANP被認(rèn)為是現(xiàn)有技術(shù)中更可靠的分析物[Ala-Kopsala， M.等人，Clin Chem， 2004. 50 (9) :p. 1576-88]。然而，N末端前肽的N和C末端區(qū)域可通過 酶促降解而被改變[Seidler，T.等人，Biochem Biophys ResCo匪n 1999,255:495-501]。 通常，認(rèn)為BNP和NT-proBNP比ANP和NT-proANP更適合于患有心機能不全的患者的診斷 和預(yù)后。其理由可能是ANP和NT-proANP的測定被認(rèn)為重現(xiàn)性不太高，以及大多數(shù)應(yīng)用的 測定設(shè)計中的概念性缺陷導(dǎo)致循環(huán)分析物的量的部分低估[Yoshibayashi， M.等人，Eur J.Endocrinol 1996 ;135 :265-268 ;Vesely，D. L.等人，IUBMBLife， 2002. 53 (3) :p. 153-9]。
通常，包含激素原(其包含128個氨基酸)(proANP ;SEQ ID NO :2)的C末端部分 的28個氨基酸(99-126)的肽稱為實際激素ANP。在ANP從其激素原proANP釋放后，等 摩爾量的proANP的剩余的較大部分肽(N末端proANP，由98個氨基酸組成)(NT-proANP ; proANP (1-98))被釋放入循環(huán)。由于NT-proANP具有顯著更長的半衰期和穩(wěn)定性， NT-proANP因而可用作心臟病的診斷、隨訪和治療控制的實驗室參數(shù)。關(guān)于主題的更深入 了角牟，請參考丄othar Thomas (Editor) ， Labor imdDiagnose,第5擴充片反(5th expanded ed. ) ， sub-chapter 2. 14 of chapter 2， Kardiale Diagnostk，第116-118頁，禾口其中弓l用 的文獻(xiàn)。 為了測定ANP本身以及測定生物液體(血清、血漿、尿)中的NT-proANP ，過去已開 發(fā)各種免疫測定法，所述測定法已用于臨床研究和實踐。大部分用于測定ANP和NT-proANP 的此類免疫測定法基于競爭免疫測定法(其中最廣為人知的是放射免疫測定法(RIA))的 已知原理。用于測定proANP和ANP的競爭免疫測定法描述于或用于例如[C即pellin， E.等人，CHn Chim Acta, 2001. 310 (1) :p. 49-52]和[Hiroshi Itoh等人，Journal of Hypertension 1988，6(s聊l 4) S309-S319 ;Meleagros， L等人，；P印tides，第10巻10， 545-550，1989 ;Amir Lerman等人，Lancetl993，341 :1105-09，1993 ;John G F Cleland 等人，Heart 1996,75 :410-413 ;Martin G.Buckley等人，Clinical Science (1999) 97 : 689-695]中。 通過使用識別NT-proANP (NT-proANPl-98 ;SEQ ID NO :1)的各種序列的各種抗 體，利用競爭免疫測定法測定NT-proANP，解釋了各種肽出現(xiàn)在生物液體中，特別是血液或 尿中，這相應(yīng)于NT-proANP (proANP 1-98)的降解產(chǎn)物。特別地，已解釋了 ，從NT-proANP 形成了低分子量片段，特別地由于它們的免疫活性而被定位至proANP的氨基酸序列l(wèi)-30、31-67和79-98的此類片段(參考例如M. G. Buckley等人，ClinicaChimica Acta, 191 (1990) 1-14 ; ， J. B. Hansen等人，Lab. Invest. 1995， 55 :447-452 ;Rose M. Overton等 人，Human Plasma and Serum ;P印tides，第17巻，1155-1162， 1996 ;Sreedevi Daggubati 等人，CardiovascularResearch 36 (1997) 246-255 ;E. F. Macaulay Hunter等人，Scand J CHnI読st 1998 ;58 :205-216 ; ， Martina Franz等人，Kidney International,第58巻 (2000)，374-383， Fumiaki Marumo等人，Human Plasma and Urine ;Biochem. Biophys. Res. Commun. 137 :231-236(1985)和Engelbert Hartter等人，Clin Chem Lab Med 2000， 38(19) :27-32)。 特異性識別上述序列的競爭免疫測定法總是以相同的方式(無論是基于不同的 抗體親抗原性的影響還是可能的構(gòu)象影響)識別全長NT-proANP，從而不能區(qū)分NT-proANP 和其片段。 與競爭免疫測定法相反，非競爭性夾心免疫測定法顯示許多優(yōu)點。例如，它們可 更容易被解釋為更穩(wěn)定的固相測定法(異質(zhì)性測定法(heterogeneous assay))，它們更強 大，以更高的靈敏度提供測量結(jié)果，展示較少的交叉反應(yīng)性以及更適合于自動化和連續(xù)的 測量。此外，由于只識別在相同分子中存在的那些結(jié)合用于形成夾心的抗體的兩個結(jié)合部 分的分子和/或肽，因而與只使用一種類型的抗體的競爭免疫測定法相比，夾心免疫測定 法可導(dǎo)致略微不同的結(jié)論。如果，例如，結(jié)合區(qū)域位于不同的部分肽(降解產(chǎn)物、片段)，則 抗體對此類片段的結(jié)合將不會導(dǎo)致對于完全"夾心"來說是典型的測量信號。
由于夾心免疫測定法在原理上的已知的優(yōu)點以及由于只選擇性測量完全 NT-proANP而無降解產(chǎn)物和片段的任何影響的可能性，用于測定NT-proANP的夾心免疫測 定法已描述于和應(yīng)用于臨床研究和實踐。例如，EP 721 105 Bl描述了使用兩種單克隆抗 體特別地在心臟病和慢性腎衰竭的診斷領(lǐng)域中測定proANP的夾心免疫測定法，其中一種 抗體結(jié)合proANP的氨基酸1-25 (比較EP 350218 Bl)，而其中另一種抗體結(jié)合proANP的氨 基酸43-66。通過進(jìn)行該類型的夾心免疫測定法，只有這樣的proANP部分肽被檢測到或在 proANP(1-98)存在的情況下被共檢測到，所述部分肽包含proANP序列的至少前66個氨基 酸。 在該方面相似的另一種夾心免疫測定法描述于[Mats Stridsberg等人，J. Med. Sci 102，99-108，第18巻1201-1203]中。該夾心免疫測定法也使用兩種單克隆抗體，其中 一種結(jié)合proANP的氨基酸1-30，而另一種結(jié)合氨基酸79-98。由于proANP的末端(1_98) 上結(jié)合區(qū)域的選擇，可假定該夾心免疫測定法將只檢測到完整的proANP (1-98)。
W0 00/19207描述了用于測定proANP(1-98)的方法，其中使用了 3種多克隆抗體 (它們結(jié)合proANP(1-98)序列的氨基酸序列8_27、31_64或79-98)中的2種抗體。由W0 00/19207的申請人商業(yè)提供的用于測定proANP (1-98)的測定法是酶免疫測定法，其使用 一對親和純化的多克隆綿羊抗體，其中被固定的抗體識別proANP的氨基酸10-19，而第二 多克隆抗體用于檢測，其識別氨基酸(85-90)(比較由BIOMEDICA， A_1210Wien提供的夾心 測定proANP (1-98)的操作手冊)。因此，該測定法也只識別包含全長proANP (1_98)的末端 的肽類別，即完全或幾乎完全的NT-proANP 。 現(xiàn)有技術(shù)中描述的使用夾心原理的所有競爭測定法已基本上被開發(fā)為用于心臟 診斷的測定法或已用于心臟診斷的背景中，其中慢性腎衰竭已被提及為另外的診斷應(yīng)用
5(比較EP 721 105 Bl和引文[Buckley MG等人，AM. J. Hypertens. 1990 Dec, 3(12 Ptl): 933-935])。 此外，已開發(fā)了用于測定proANP的中間區(qū)域(氨基酸53_73)的新型夾心免疫 測定法，其測量結(jié)果不受肽的假定的末端截斷影響[ClinicalChemistry 50， No. 1，2004， pages 234-236]。 本發(fā)明的目的是提供用于患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的醫(yī)學(xué) 診斷、預(yù)后和治療隨訪的體外方法，該方法特別地為急診科(ED)的醫(yī)生提供了可靠信息。
因此，本發(fā)明包括用于患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的醫(yī)學(xué)診 斷、預(yù)后和治療隨訪的體外方法，該方法包括步驟-提供患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的樣品，-使用至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體測定所述樣品中
氨基末端proANP或其具有12至98個氨基酸的部分肽，-將測定的氨基末端proANP水平或其部分肽的水平歸因于臨床現(xiàn)象，其中所述歸 因是不依賴患者的BMI進(jìn)行的。 優(yōu)選，進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的體外方法，其中歸因于臨床現(xiàn)象是借助于不依賴于BMI 的截止值(cut-off value)進(jìn)行的。 歸因于臨床現(xiàn)象是指將測定的氨基末端proANP水平或其部分肽的水平用于患有 心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)后或治療隨訪，其中所述使用是 不依賴于患者的BMI進(jìn)行的。 患者的心臟病可選自但不限于慢性心力衰竭、急性心力衰竭、急性冠狀動脈綜合 征或心肌梗塞。 在本發(fā)明的一個實施方案中，疾病被診斷，從而所述方法是用于醫(yī)學(xué)診斷的方法。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，心臟病是心力衰竭。根據(jù)本發(fā)明的體外方法對 患者來說是特別適合和可靠的，所述患者展示呼吸困難的癥狀，從而被懷疑患有心力衰竭， 并且對臨床現(xiàn)象進(jìn)行診斷。根據(jù)本發(fā)明的方法有助于出現(xiàn)在急診科的患者的評估和管理。 準(zhǔn)確的診斷是選擇用于此類患者的最恰當(dāng)治療所必需的。因此，本發(fā)明滿足了準(zhǔn)確區(qū)分心 力衰竭引起的呼吸困難和其他原因例如肺部疾病引起的呼吸困難的需要。因而根據(jù)本發(fā)明 的方法顯著提高了對于心力衰竭的診斷準(zhǔn)確性。 已描述了隨著健康人群中的BMI不斷增加，NT-proANP和BNP的濃度減小[Wang， TJ.等人，Circulation, 2004. 109(5) :p. 594-600]。因而作者推斷利鈉肽十分不適合用作 肥胖患者的標(biāo)志("其次，根據(jù)調(diào)查獲得的推測，血漿利鈉肽水平對于肥胖個體中的心力衰 竭或左心室功能紊亂來說可能是不太有用的標(biāo)志。")。 令人驚訝地，在本發(fā)明的背景下已發(fā)現(xiàn)，對于某些患有心臟病(慢性心力衰竭)的 患者亞群，即具有等于或大于30kg/m2的BMI (體重指數(shù))的亞群體，特別地來源于此類患者 的樣品中的氨基末端proANP或來源于其部分肽的測定允許獲得可靠的診斷。這正是Wang 等人推斷利鈉肽在其中可能是不太有用的標(biāo)志的亞群體。最近的出版物中已描述了 BNP在 住院患者中的患有慢性心力衰竭的肥胖患者亞群中也具有預(yù)后價值[Horwich， T.B.等人， J. Am. Coll. Cardiol. 2006， Jan. 3，47(1) :85-90 ;Epub 2005，Dec. 15]。在本發(fā)明的背景中， 已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，NT-proANP，與BNP類似物NT-proBNP相比較，在所述患者亞群的預(yù)后方面更可靠。 在下面，描述了涉及體外方法的本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，其中患者或患者群體具 有等于或大于30kg/m2的BMI，并且樣品由具有等于或大于30kg/m2的BMI的患者提供。
本發(fā)明的一個主題是根據(jù)本發(fā)明的體外方法，其中患者或患者群體具有等于或大 于30kg/m2的BMI，并且樣品由具有等于或大于30kg/m2的BMI的患者提供。
因此，本發(fā)明的主題是用于患者的醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)后和治療隨訪的體外方法，所述患 者患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病并且具有等于或大于30kg/m2的BMI ，該方法包括 下列步驟-提供患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病并且具有等于或大于30kg/m2的 BMI的患者的樣品，禾口-使用至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體測定所述樣品中 氨基末端proANP或其部分肽。 根據(jù)本發(fā)明的方法特別適合于患有慢性心力衰竭的患者的診斷、預(yù)后和治療隨 訪。 根據(jù)本發(fā)明的方法特別適合于患有慢性心力衰竭并且具有等于或大于30kg/m2的 BMI的患者的診斷、預(yù)后和治療隨訪。根據(jù)本發(fā)明的方法特別適合于患有心臟病或被懷疑發(fā) 生或患有心臟病并且具有等于或大于30kg/m2的BMI的患者的診斷、預(yù)后和治療隨訪，特別 是在其中疾病是慢性心力衰竭的情況下。 在該患者群體即患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病并且具有等于或大于 30kg/m1勺BMI的患者中，特別是在其中疾病是慢性心力衰竭的情況下，優(yōu)選對有(推測有) 癥狀的患者進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的方法。 在本發(fā)明的特別優(yōu)選實施方案中，具有等于或大于30kg/m2的BMI的患者的死亡 率預(yù)后的最佳閾值的范圍在190和210pmol/l之間，優(yōu)選在195和205pmol/l之間，最優(yōu)選 為199pmol/l。BMI < 30的群體的最佳閾值為231pmol/l。在自然狀況下，取決于所使用的測 定法和校準(zhǔn)方法，閾值的絕對值可發(fā)生變化。本文中提及的閾值通過[Clinical Chemistry 50，No. 1，2004，pages 234-236]中的用于測定結(jié)果的相同的測定法和相同的校準(zhǔn)方法來估 計。 令人驚訝地，已發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明的方法中，BMI > 30的患者的最佳閾值低于BMI < 30的患者。因此，本發(fā)明的主旨特別地是根據(jù)本發(fā)明的體外方法，其中BMI > 30的患者 的潛在閾值低于BMI < 30的患者。 定義為變異系數(shù)的測定的批內(nèi)分析變異系數(shù)(intra-assay variationcoefficient)，其對于來自在一批反應(yīng)中10次測定的給定測量數(shù)值的結(jié)果，對 于所有測量值優(yōu)選至多為10%。超過該值是不利的，因為這可導(dǎo)致測量值相對于閾值的錯 誤歸因，從而可導(dǎo)致錯誤的結(jié)論。 因此，可對具有低于30kg/m2的BMI的患者和對具有高于或等于30kg/m2的BMI 的患者進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的體外方法。不依賴于患者的BMI， 190至260pmol/l，優(yōu)選195至 240pmol/l的閾值適合于根據(jù)本發(fā)明的方法。然而，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，選擇具有 等于或大于于30kg/m2的BMI的患者的閾值，以便其范圍在190和210pmol/l之間，優(yōu)選195 和205pmol/l之間，最優(yōu)選為199pmol/l。 BMI < 30的群體的最佳閾值是231pmol/l。
特別地，由患者提供的樣品可以是血漿、血清、血液或尿。 根據(jù)本發(fā)明，抗體可以是單克隆抗體和多克隆抗體。因此，至少一種抗體是單克隆 或多克隆抗體。 多克隆抗體，特別地親和純化 的多克隆抗體是優(yōu)選的。 根據(jù)本發(fā)明的方法是特別優(yōu)選的，其中將橫跨氨基酸50至氨基酸90的氨基酸末 端proANP的中間區(qū)域用于測定樣品中的氨基末端proANP或其部分肽。
在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，使用應(yīng)用兩種抗體的夾心免疫測定法測定樣品 中的氨基末端proANP或其部分肽。特別地，如果通過使用特異性結(jié)合N末端proANP的不 同的部分序列的兩種抗體來測定氨基末端proANP或其部分肽時，這是優(yōu)選的。
特別優(yōu)選的是，其中一種抗體通過用包含含有proANP的氨基酸53_72的合成的肽 序列的抗原免疫動物來獲得，并且另一種抗體通過用包含含有proANP的氨基酸73-90的合 成的肽序列的抗原免疫動物來獲得。在另一個實施方案中，包含proANP的氨基酸53-72的 合成的肽序列具有額外的N末端半胱氨酸基團(tuán)。在另一個優(yōu)選實施方案中，另一種抗體通 過用包含含有proANP的氨基酸72-90或73-83以及額外的N末端半胱氨酸基團(tuán)的合成的 肽序列的抗原免疫動物來獲得。通過使用所述合成的肽(一起代表proANP序列的完整的 中間區(qū)域部分)獲得的抗體從而只識別NT-proANP的氨基酸53-83的范圍內(nèi)的結(jié)合區(qū)域， 并且可以以多克隆抗體的形式完全檢測所述范圍。 在根據(jù)本發(fā)明的體外方法的優(yōu)選實施方案中，標(biāo)記其中的一種抗體，并且使第二 抗體結(jié)合至固相或可將其選擇性地結(jié)合至固相。在測定的特別優(yōu)選實施方案中，標(biāo)記其中 一種抗體，同時將另一種抗體結(jié)合至固相或可將其選擇性結(jié)合至固相。在優(yōu)選實施方案中， 按照異質(zhì)性夾心免疫測定法進(jìn)行該方法，其中將其中的一種抗體固定在任意選擇的固相 上，例如，經(jīng)涂鋪的試管(例如，聚苯乙烯試管；經(jīng)涂鋪的試管；CT)或微量滴定板(例如由 聚苯乙烯構(gòu)成的)的壁上，或固定至顆粒例如磁性顆粒上，其中另一種抗體具有與可檢測 的標(biāo)記相似或使得能夠與標(biāo)記選擇性連接的基團(tuán)，和用于檢測形成的夾心結(jié)構(gòu)。使用適當(dāng) 的固相，也可以暫時地延遲或隨后固定化。 根據(jù)本發(fā)明的方法還可體現(xiàn)為同質(zhì)性方法，其中由抗體和待檢測的proANP或 proANP部分肽形成的夾心復(fù)合物仍然懸浮在液相中。在該情況下，優(yōu)選地，當(dāng)使用兩種抗體 時，兩種抗體都使用檢測系統(tǒng)的部分來標(biāo)記，如果兩種抗體都被整合入單個夾心，則這導(dǎo)致 信號的產(chǎn)生或信號的觸發(fā)。此類技術(shù)將特別地體現(xiàn)為熒光增強或熒光猝滅檢測方法。特別 優(yōu)選的實施方案涉及將要配對使用的檢測試劑(例如US-A-4882733、 EP-B1 0 180 492或 EP-B1 0 539 477和其中引用的現(xiàn)有技術(shù)中描述的檢測試劑)的使用。這樣，直接在反應(yīng)混 合物中僅檢測在一個免疫復(fù)合物中包含兩種標(biāo)記組分的反應(yīng)產(chǎn)物的測量，成為可能。例如， 以商品名TRACE⑧(Time Resolved Amplified Ciyptate Emission)或KRYPTOR逸提 供執(zhí)行上述應(yīng)用的教導(dǎo)的此類技術(shù)。 原則上，可使用可用于所述類型的測定的所有標(biāo)記技術(shù)，例如使用放射性同位素、 酶、熒光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物或生物發(fā)光標(biāo)記物或可直接光學(xué)檢測的顏色標(biāo)記物例如 金原子和染料顆粒進(jìn)行的標(biāo)記，所述標(biāo)記技術(shù)特別地用于定點照護(hù)檢驗(Point-of-Care) (P0C)或快速檢測。在異質(zhì)性夾心免疫測定的情況下，兩種抗體都可展示根據(jù)本文中在同質(zhì) 性測定的背景下描述的類型的檢測系統(tǒng)的部分。
8
在優(yōu)選的備選測定法中，將第一和第二抗體都分散在液體反應(yīng)介質(zhì)中，其中將作 為基于熒光或化學(xué)發(fā)光猝滅或增強的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分的第一標(biāo)記組分結(jié)合至第一抗體， 并且其中將該標(biāo)記系統(tǒng)的第二標(biāo)記組分結(jié)合至第二抗體，這樣在兩種抗體與將要被檢測的 氨基末端proANP結(jié)合后，產(chǎn)生使得能夠檢測在測量溶液中形成的夾心復(fù)合物的可檢測信 號。該備選測定法的一個實施方案包括與熒光或化學(xué)發(fā)光染料結(jié)合的標(biāo)記系統(tǒng)稀土穴狀化 合物(kryptate)或螯合物。在特別優(yōu)選實施方案中，標(biāo)記系統(tǒng)包含與熒光或化學(xué)發(fā)光染料 結(jié)合的稀土穴狀化合物。 在另外的優(yōu)選實施方案中，使用競爭免疫測定法進(jìn)行檢測。在特別優(yōu)選實施方案 中，使用放射免疫測定法。 可與其他標(biāo)志和/或方法結(jié)合來進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的方法。這表示可以以多參數(shù)診 斷的方式特別有利地進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的測量方法。因此，額外地測定至少一種另外的標(biāo)志， 優(yōu)選選自炎癥標(biāo)志、心血管標(biāo)志或局部缺血標(biāo)志的標(biāo)志。 在方法的優(yōu)選實施方案中，炎癥標(biāo)志選自包含下列的組C-反應(yīng)性蛋白(CRP)、細(xì) 胞因子例如TNF-a 、白細(xì)胞介素例如IL-6、原降鈣素(procalcitonine) (1-116或其部分 肽)和粘附分子例如VCAM或ICAM。 在方法的優(yōu)選實施方案中，心血管標(biāo)志選自包含下列的組髓過氧化物 酶、proBNP的完全肽或部分肽、前內(nèi)皮素-1 (pro-Endothelin-l)、腎上腺髓質(zhì)素前 體(proAdrenornedullin)、血管力口壓素前體(proVasopressine)、胃泌素釋放肽前體 (proGRP)、瘦素前體(pro-L印tin)、神經(jīng)肽Y原(pro-Neurop印tide-Y)、生長抑素原 (pro—Somatostatin)、神經(jīng)月太YY原、前阿黑皮素(pro—Opionmelanocortin)的至少一禾中標(biāo) 志。 在方法的優(yōu)選實施方案中，局部缺血標(biāo)志選自包含肌鈣蛋白I或T、CK-MB、肌紅蛋 白(myoglobin)的組的至少一種標(biāo)志。 因此，可在根據(jù)本發(fā)明的方法中平行地或同時測定所述標(biāo)志。在上述多參數(shù)測定 中，可設(shè)想，例如借助于計算機程序，使用診斷上顯著的參數(shù)關(guān)聯(lián)性同時或平行地評估許多 參數(shù)的測量結(jié)果。 在根據(jù)本發(fā)明的方法中，作為額外的方法，超聲心動圖或心電圖可被記錄。 如上面所概述的，患者的心臟病可以是但不限于慢性心力衰竭、急性心力衰竭、急
性冠狀動脈綜合征或心肌梗塞。 如上所論述的，因而將根據(jù)本發(fā)明的方法開發(fā)為快速檢驗測定法在本發(fā)明的范圍 內(nèi)。 因此，將由患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病并且任選地具有等于或大于 30kg/m2的BMI的患者提供的樣品-用于快速檢測系統(tǒng)的樣品施加區(qū)(sample即plication zone),-在反應(yīng)區(qū)中，與至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體接觸，
由此-在檢測區(qū)中，檢測與抗體結(jié)合的氨基末端proANP或來源于其的部分肽。
優(yōu)選，快速檢測系統(tǒng)可以是微流檢測系統(tǒng)。 在另外的優(yōu)選實施方案中，快速檢測系統(tǒng)可以是側(cè)向流動檢測裝置(lateralflow test device)。該快速檢測系統(tǒng)可以是固相側(cè)向流動檢測裝置。 可在基于免疫遷移(immuno migration)和/或?qū)游龅目焖贆z測系統(tǒng)中進(jìn)行根據(jù)
本發(fā)明的方法。 因此，本發(fā)明的另外的實施方案是在本文中所述的所有實施方案中執(zhí)行根據(jù)本發(fā) 明的方法的快速檢測系統(tǒng)，用于測定患者的樣品中的氨基proANP或其部分肽，所述患者患 有心臟病或或被懷疑發(fā)生或患有心臟病并且任選地具有等于或大于30kg/n^的BMI，其中使 用至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體。優(yōu)選，部分序列的長度是至少 12個氨基酸。更優(yōu)選部分序列的長度是50至98個氨基酸。 因此，本發(fā)明的另外的客體是至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列 的抗體在患者的醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)后和治療隨訪中的用途，所述患者被懷疑患有或發(fā)生心臟病 和任選地具有等于或大于30kg/m2的BMI。 在下面，通過描述測定患者生物樣品中的NT-proANP和NP-proBNP而獲得的結(jié)果 來更詳盡地解釋本發(fā)明。
實施例 實施例1 [Morgenthaler， N. G.等人，Clin Chem， 2004. 50 (1) :p. 234-6]]中描述的測定法 用于測量氨基末端proANP。按照手冊(Elecsys)使用由Roche提供的可商購獲得的檢測來 測定NT-proBNP。 在患有慢性心力衰竭的患者的血漿樣品中測定兩個標(biāo)志。特別地進(jìn)一步調(diào)查體 重指數(shù)>=30kg/m2的患者亞群(n = 144)。在這144個患者中，有26個患者由于心血管 事件(cardiovasculary event)而在24個月中死亡。為了評估兩個標(biāo)志的預(yù)后功效，使 用Cox-回歸(用于windows的StatView 5. 0軟件；Abacus Conc印ts， Berkley, CA)分析 數(shù)據(jù)。NT-proBNP的值(以pg/ml表示)的中值是氨基末端proANP(以pmol/1表示)的5 倍。因此，在Cox-分析中，與MR-proANP相比，所計算的NT-proBNP風(fēng)險比率，濃度提高至 5倍。 單變量Cox比例風(fēng)險分析(皿ivariant Cox Proportional HazardAnalysis)的 結(jié)果 MarkerChiSquare 風(fēng)險比率(95% CI) pNT proANP(100pmo1/1提高)14. 414 1. 503 (1. 217-1. 855)< 0. 0001NT-proBNP (500pg/ml提高) 0. 662 1. 024 (0. 963-1. 094) 0. 416 不依賴于對于NT-proBNP(p = 0. 416)未獲得顯著的結(jié)果的事實，與
NT-proBNP (1. 024)相比，NT-proANP的1. 503的風(fēng)險比率清楚地顯示在BMI > = 30的患
者亞群中的優(yōu)點。1.000的風(fēng)險比率表示每濃度單位劑量的死亡風(fēng)險不增加。因而，對
于NT-pro ANP， 1. 503的風(fēng)險比率表示每濃度單位(此處lOOpmol/I)的死亡風(fēng)險提高了
50. 3%。與NT-proBNP相比，這表示該風(fēng)險提高了 21倍。 多變量Cox比例風(fēng)險分析的結(jié)果 MarkerChi Square 風(fēng)險比率(95% CI) pLN NT-proANP 7. 198 2. 776 (1. 317-5. 854) 0.007
LN NT-proBNP 0. 005 0. 985 (0. 644-1. 506) 0.943 再次地，結(jié)果證明了 NT-proANP的優(yōu)點，因為其在使用NT-proBNP (p = 0. 007)的 模型中繼續(xù)作為BMI >= 30的患者亞群中的死亡的獨立預(yù)測指標(biāo)(predictor)。與之相 反，NT-proBNP不是獨立的預(yù)測指標(biāo)。 同樣在ROC分析中，就BMI > = 30的患者亞群的死亡率預(yù)后而言，NT-proANP (AUC 為0. 66)優(yōu)于NT-proBNP (AUC = 0. 61)。關(guān)于預(yù)后，NT-proANP的最佳閾值是199pmol/l。
實施例2
研究群體 我們前置地連續(xù)招募在ED出現(xiàn)的患者。為了有資格參與研究，患者必須具有呼吸 困難作為最顯著的癥狀。不包括18歲以下的患者、進(jìn)行血液透析的患者和創(chuàng)傷患者。研究 按照赫爾辛基宣言的原則進(jìn)行并且由地方倫理委員會批準(zhǔn)。從所有參加患者獲得書面試服 志愿書。 患、剖勺驢i平fe 患者經(jīng)歷臨床評估，包括臨床史、體檢、ECG、脈搏血氧測定法(pulseoximetry)、血 液檢測包括動脈血氣分析(當(dāng)指出時)和胸部X射線檢查。如果患者得到允許，基于門診 病人基數(shù)在ED或在醫(yī)院強烈推薦超聲心動圖和肺功能測驗。對于每一個參加本研究的患 者，ED醫(yī)生估計患者具有HF(通過賦予0至100%的臨床確定性值)作為他或她的呼吸困 難的原因(包括體檢、EGG、胸部X射線檢查和血檢驗(包括BNP)的所有可獲得的信息)的 概率。 心力衰竭的參照("金")指示定義 為了確定實際的診斷，兩個獨立的心臟病學(xué)家研究了與患者相關(guān)的所有醫(yī)療記 錄并且獨立地將診斷分類為HF引起的呼吸困難或除了 HF外的另外的原因引起的呼吸困 難。兩位心臟病學(xué)家都有權(quán)使用在于ED中進(jìn)行評估期間或之后成為可獲得的ED圖(ED charts)和任何額外的信息。該信息包括BNP水平、胸部X射線檢查、對于ED醫(yī)生是不 可獲得的醫(yī)療史、后續(xù)檢測例如超聲心動圖、放射性核素成像或在心導(dǎo)管檢查(cardiac catheterization)時進(jìn)行的左心室造影圖(leftventriculogr即hy)、肺功能測驗、CT掃 描、用于評估肺栓塞的壓迫超聲(compression ultrasound)、右心導(dǎo)管插入術(shù)的結(jié)果、被送 入醫(yī)院的患者的住院治療情況(hospital course)、對治療的反應(yīng)、已故患者的尸檢數(shù)據(jù)以 及關(guān)于臨床活動或在90天的隨訪過程中再住院的信息。BNP水平被當(dāng)作HF的定量標(biāo)志，從 而被解釋為充分利用由該試驗提供的信息的連續(xù)變量。BNP水平越高，則HF出現(xiàn)和其為呼 吸困難的原因的概率越高。對于腎病和肥胖癥的存在，調(diào)整絕對BNP值以使診斷的準(zhǔn)確性 最大化(Mueller, C.等人，Swiss Med Wkly，2007. 137(1-2) :p. 4-12.)。
利鈉肽的測暈 在最初的評估期間，將血液樣品收集入含有乙二胺四乙酸鉀的試管。分析來自 立即于-80°C下冷凍直至分析的血槳樣品的MR-proANP和NT-proBNP。使用在其他地方 (Morgenthaler， N. G.，等人，CKn Chem， 2004. 50 (1) :p. 234-6.)詳細(xì)描述的夾心免疫測定 法(MR-proANP LIA， B. R. A. H. M. S， He皿igsdorf/Berlin， Germany)進(jìn)行MR-proANP的檢 測。之前的研究中325個健康個體的MR-proANP中值是45pmol/l (95%的置信區(qū)間(CI)43 至49pmol/l) (Morgenthaler, N. G.，等人，Clin Chem， 2004. 50 (1) :p， 234—6.)。通過定量
11電fti學(xué)發(fā)光免疫領(lǐng)lj定f去(Elecsys proBNP， Roche Diagnostics AG， Zug， Switzerland)領(lǐng)lj 定NT-proBNP水平。通過微粒酶免疫測定法(AxSym， Abbott Laboratories, IL， USA)測量 BNP。 統(tǒng)計分析 使用非參數(shù)曼-惠特尼U檢驗或適當(dāng)時費希爾精確檢驗(Fisher' sexact test) 來比較患有HF引起的呼吸困難的患者和患有非HF引起的呼吸困難的患者之間的關(guān)于人口 統(tǒng)計學(xué)和臨床特征的單變量數(shù)據(jù)。MR-proANP和NT-proBNP被認(rèn)為是連續(xù)變量并且對其進(jìn) 行對數(shù)變換以獲得正態(tài)性(normality)。主要目的是將MR-proANP的準(zhǔn)確度與NT-proBNP的 準(zhǔn)確度相比較。當(dāng)BNP水平可獲得用于HF的參照("金")標(biāo)準(zhǔn)診斷時，MR-proANP與BNP 的比較被認(rèn)為偏向BNP，從而在ROC分析中不包括BNP。第二目的是調(diào)查向ED的臨床判斷 中加入MR-proANP，包括胸部X射線檢查和BNP信息，是否可進(jìn)一步提高診斷準(zhǔn)確度。為了 確定MR-proANP和NT-proBNP對于HF的診斷準(zhǔn)確度，分析受試者工作特征(ROC)曲線，并 且對于兩個標(biāo)志計算曲線下的面積(AUC)。按照由Hanley和McNeil (Hanley， J. A.等人， Radiology, 1983. 148(3) :p. 839-43.)提出的方法比較AUC。通過在ROC曲線上選擇使靈敏 度和特異性最大化的點來獲得最佳截止點(cut-off-point)。選擇對于HF的ED臨床確定性 > 80%的最佳截止點，提供合理且可操作的(actionable)確定性的截止點，McCullough， P. A.，等人，Circulation, 2002. 106(4) :p. 416_22。利用McNemar檢驗(假生物化學(xué)分類 的不和諧配對的比較)比較兩個測定法在使用ROC分析測定的最佳截止?jié)舛壬系脑\斷準(zhǔn)確 度。對于HF的檢測，為了測定關(guān)于最高診斷準(zhǔn)確度的MR-proANP和NT-proBNP的閾值的 優(yōu)勢比，在未調(diào)節(jié)和已調(diào)節(jié)的情況下進(jìn)行l(wèi)ogistic因歸分析以獲得顯著的協(xié)變量(年齡、 先前的CHF、先前的心肌梗塞、估計的腎小球濾過率、血紅蛋白、肺啰音(pulmonary rale)、 外周性水腫和頸靜脈擴張)。等級相關(guān)的斯皮爾曼系數(shù)用于估計研究群體中MR-proANP和 NT-proBNP濃度的關(guān)系。使用以千克表示的體重除以以米表示的身高的平方的習(xí)用式來計 算體重指數(shù)(BMI)。按照世界衛(wèi)生組織的定義，正常重量定義為BMI < 25kg/tf，超重定義 為25kg/m2至29. 9kg/m2的BMI，肥胖定義為30kg/m2或更大的BMI。使用腎臟疾病飲食改 變(Modification of Diet in RenalDisease) (MDRD)公式(Stevens, L. A.等人，N Engl J Med， 2006. 354(23) :p. 2473-83.)來計算腎小球濾過率。使用SPSS 15. 0軟件(SPSS Inc， Chicago, Illinois, USA)和MedCalc 9. 3. 9. 0軟件包(MedCalc Software, Mariakerke， Belgium)統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。對所有概率進(jìn)行雙尾檢驗，p < 0. 05被認(rèn)為是顯著的。
題 總共287個患者參與本研究(圖3)。年齡中值為77歲。有149個男性(52% ) 和138個女性(48%)。動脈高血壓存在于68%的患者中，28%具有冠心病，以及34%具有 慢性阻塞性肺疾患。利尿劑(52%)是最常的處方慢性藥療法(chronic medication)，接 著是ACE-抑制劑或AT-II-受體-阻滯劑(49%)和P-阻滯齊[J (39%)。當(dāng)檢查時，54% 的患者在下肺野具有啰音，42%具有下肢浮腫以28%具有頸靜脈擴張。
判斷的金標(biāo)準(zhǔn)診斷為在154個(54% )患者中具有HF，71個(25% )患者中具有 慢性阻塞性肺疾患，33個(11%)患者中具有肺炎，10個(3%)患者中具有惡性腫瘤，8個 (3%)患者中具有肺栓塞，7個(2%)患者中具有換氣過度以及在14個(5%)患者中具有 其他病因例如間質(zhì)性肺病、哮喘或支氣管炎。有幾個患者具有兩個呼吸困難的主要病因例
12如慢性阻塞性肺疾患和肺炎的惡化。 患有和不患有判斷的HF的金標(biāo)準(zhǔn)診斷的患者的MR-proANP和NT-proBNP水平示 于圖4中?；加蠬F的此類患者的MR-proANP中值濃度(400pmol/L， IQR 246_642pmol/l)顯 著高于不患有HF的患者的MR-proANP中值濃度(92pmol/L， IQR 92_173pmol/l ;p< 0.001， 對于差異)?；加蠬F的患者的NT-proBNP中值濃度為5757pg/ml (IQR 1924_13243pg/ml) 對不患有HF的患者的300pg/ml (IQR 76_974pg/ml) (p < 0. 001，對于差異)。MR-proANP與 NT-proBNP之間的等級相關(guān)的斯皮爾曼系數(shù)為0. 899 (p < 0. 001)。 對于HF的診斷，MR-proANP的AUC為0. 92 (95 % CI 0. 88至0. 95)，這與具有 0. 92 (95% CI 0. 89至0. 95 ;p = 0. 791 ;圖6a)的NT-proBNP的AUC —致?；赗OC分析的
基礎(chǔ)，達(dá)到最高診斷準(zhǔn)確度的MR-proANP和NT-proBNP的最佳診斷截止值分別為206pmol/l 和1540pg/ml。在該截止值上，MR-proANP的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異性全都為84% 。 Logistic 回歸分析確認(rèn)MR-proANP在單變量和多變量分析中為HF的高效預(yù)測指標(biāo)(圖5)。
ED-概率與MR-proANP的組合的AUC顯著比單獨的ED-概率高(p = 0. 016，圖6b)。 具有HF的高ED概率(80%至100%臨床確定性)的臨床判斷的準(zhǔn)確度為79.4%。因此，作 為診斷值的總體測量，向ED-概率中加入> 206pmol/L的MR-proANP水平將顯著地將診斷 準(zhǔn)確度增加至87. 8% (p < 0. 001，圖7)?？偟膩碚f，206pmol/L的截止值處的MR-proANP和 > 80%確定性的ED-概率是相對獨立的指標(biāo)，如通過0. 47的CohensK即pa值所反映的(p < 0. 001)。 如圖8中所示，在它們與BMI結(jié)合方面，MR-proANP和NT-proBNP不同。在患有HF 的患者中，與具有正常BMI的個體相比，平均MR-proANP水平在超重和肥胖患者中是不同的 (對于二者，P = 0. 346)，其中NT-proBNP水平在超重和肥胖患者中比在正常體重患者中低 (對于二者，P = 0. 025)。
附圖概述

圖1 :顯示NT-pro ANP的序列。 圖2 :顯示proANP的序列。舉例說明287個患者的基線特征的表。 圖3 :舉例說明287個患者的基線特征的表；eGRF =估計的腎小球濾過率；
MR-proANP =中間區(qū)域前心房利鈉肽；NT-proBNP = N_末端B型利鈉肽前肽。 圖4 :顯示患有心力衰竭引起的呼吸困難的患者(n = 154)和患有歸因于其他原
因的呼吸困難的患者(n = 133)的NT-proBNP和MR-proANP的水平的框圖(box plot);所
有p < 0. 001。NT-proBNP = N_末端B型利鈉肽前肽；MR-proANP =中間區(qū)域前心房利鈉肽。
框(box)代表第百分之25和第百分之75，其中細(xì)線(whisker)代表最小至最大濃 度，不包括展示為分離點的離群值。 圖5 :說明用于通過MR-proANP和NT-proBNP預(yù)測心力衰竭的logistic回歸分析 的表；MR-proANP =中間區(qū)域前心房利鈉肽；NT-proBNP = N-末端B型利鈉肽前肽。說明用 于通過MR-proANP和NT-proBNP預(yù)測心力衰竭的logistic回歸分析的表。
圖6a :NT-proBNP和MR-proANP用于診斷患有呼吸困難的患者的心力衰竭的準(zhǔn) 確度的受試者工作特征(ROC)曲線。曲線下的面積(AUC):對于NT-proBNP = 0.92 ;對于 MR-proANP = 0. 92 (對于比較，p = 0. 791)。
圖6b :急診科(ED)-概率、MR-proANP和兩者在心力衰竭的檢測中的受試者工作特 征(ROC)曲線。(曲線下的面積(AUC):對于MR-proANP = 0. 92 ;對于ED-概率=0. 90 ;對 于組合=0. 96 ;p = 0. 016，對于ED-概率與ED-概率和MR-proANP的組合的比較)。 [cms] 圖7 :臨床判斷(心力衰竭的高急診科概率)、使用206pmol/L的截止水平的 MR-proANP以及兩者組合在心力衰竭的檢測中的診斷準(zhǔn)確度(p < 0. 001)。
圖8:根據(jù)體重指數(shù)(BMI)分類的患有和不患有心力衰竭的患者中的平均 NT-proBNP和MR-proANP水平。
權(quán)利要求
用于患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)后和治療隨訪的體外方法，該方法包括步驟-提供患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的樣品，-使用至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體測定所述樣品中的氨基末端proANP或其具有12至98個氨基酸的部分肽，-將測定的氨基末端proANP水平或其部分肽的水平歸因于臨床現(xiàn)象，其中所述歸因是不依賴患者的BMI進(jìn)行的。
2. 權(quán)利要求l的體外方法，其中，所述將測定的氨基末端proANP水平或其部分肽的水 平歸因于臨床現(xiàn)象是借助于不依賴于BMI的截止值進(jìn)行的。
3. 權(quán)利要求1或2的體外方法，其中所述心臟病選自包含慢性心力衰竭、急性心力衰 竭、急性冠狀動脈綜合征和心肌梗塞的組。
4. 權(quán)利要求1至3的體外方法，其中所述方法是用于醫(yī)學(xué)診斷的方法。
5. 權(quán)利要求1至4的體外方法，其中患者展示呼吸困難的癥狀，從而被懷疑具有心力衰竭。
6. 權(quán)利要求1至5的體外方法，其中患者或患者群體具有等于或大于30kg/m2的BMI， 并且樣品是由具有具有等于或大于30kg/m2的BMI的患者提供的。
7. 權(quán)利要求6的體外方法，其中所述方法是預(yù)后的方法。
8. 權(quán)利要求6或7的體外方法，其中所述疾病是慢性心力衰竭。
9. 權(quán)利要求1至8的體外方法，其中所述提供的患者的樣品選自包含血漿、血清、血液 和尿的組。
10. 權(quán)利要求1至9的體外方法，其中將結(jié)合其他標(biāo)志和/或方法進(jìn)行所述方法。
11. 權(quán)利要求1至10的體外方法，其中在患者樣品中測定至少一種其他標(biāo)志，所述標(biāo)志 選自包含炎癥標(biāo)志、心血管標(biāo)志和局部缺血標(biāo)志的組。
12. 權(quán)利要求ll的體外方法，其中所述炎癥標(biāo)志選自包含下列的組C-反應(yīng)性蛋白 (CRP)、細(xì)胞因子例如TNF-a 、白細(xì)胞介素例如IL-6、原降鈣素1-116或其具有從12至116 個氨基酸優(yōu)選具有100至116個氨基酸的肽，和粘附分子例如VCAM或ICAM。
13. 權(quán)利要求11的體外方法，其中所述心血管標(biāo)志選自包含下列的組髓過氧化物酶、 完整的proBNP或proBNP的長度為至少12個氨基酸殘基的肽片段包括BNP和NT-proBNP、前 內(nèi)皮素-l、腎上腺髓質(zhì)素前體、血管加壓素前體、胃泌素釋放肽前體(proGRP)、瘦素前體、 神經(jīng)肽Y原、生長抑素原、神經(jīng)肽Y Y原、前阿黑皮素。
14. 權(quán)利要求11的體外方法，其中所述局部缺血標(biāo)志選自包含肌鈣蛋白I或T、CK-MB、 肌紅蛋白的組。
15. 權(quán)利要求1至14的體外方法，其中以快速檢驗測定的方式進(jìn)行所述方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)后和治療隨訪的體外方法，其包括步驟提供患有心臟病或被懷疑發(fā)生或患有心臟病的患者的樣品，使用至少一種特異性結(jié)合氨基末端proANP的部分序列的抗體測定所述樣品中的氨基末端proANP或其具有12至98個氨基酸的部分肽，將測定的氨基末端proANP水平或其部分肽的水平歸因于臨床現(xiàn)象，其中所述歸因是不依賴患者的BMI進(jìn)行的。本發(fā)明還涉及快速檢驗測定法和用于進(jìn)行本發(fā)明方法的試劑盒以及適合于根據(jù)本發(fā)明的方法和測定法的抗體的用途。
文檔編號G01N33/74GK101784899SQ200880015355
公開日2010年7月21日 申請日期2008年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月7日
發(fā)明者A·伯格曼, J·帕帕索蒂里奧, J·斯特魯克, N·摩根薩勒, S·安克 申請人:B.R.A.H.M.S股份公司