專利名稱：煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種煙草及煙草制品中質體色素的快速提取及測定方法，尤其 涉及一種通過超聲萃取的方法快速提取煙草及煙草制品中的質體色素，并測定 煙草中質體色素的方法，屬煙草化學測定方法領域。
背景技術：
煙草及煙草制品中質體色素的成分很多，主要包括葉綠素a、葉綠素b、 0 胡蘿卜素、葉黃素、新黃質、紫黃質等，這些成分是影響烤煙香氣品質和可用 性的主要成分。如果煙葉在調制、加工及陳化過程中色素降解完全和得當，會 使煙葉香氣增加，色澤鮮亮，能夠提高煙葉的品質和可用性。建立煙草樣品中 質體色素的快速提取及測定方法，將有助于進一步研究確定色素含量與煙葉品 質的關系、確定科學合理的調制和陳化條件以及在提高巻煙葉組配方的精細化 程度等方面具有重要的意義和價值。質體色素中的葉綠素及類胡蘿卜素類色素 穩(wěn)定性差，提取測定時均要求低溫、避光、快速。而現(xiàn)有的質體色素的提取常 用震蕩浸提法等，震蕩浸提法提取需要時間較長，易造成質體色素中的葉綠素 及類胡蘿卜素類色素氧化分解；測定常采用分光光度法、高效薄層色譜掃描法 以及液相色譜法，分光光度法測定時準確性較差，高效薄層色譜掃描法及傳統(tǒng) 的液相色譜法樣品前處理復雜，效率低，釆用固相萃取法雖可簡化樣品前處理， 但使用成本較高。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方 法，以實現(xiàn)快速、準確、成本低。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案采用了一種煙草及煙草制品中質體
3色素快速提取及測定方法，包括以下步驟
(2)采用超聲萃取的方法快速提取煙草及煙草制品中的質體色素； (2)超聲萃取后提取的質體色素采用高效液相色譜法測定其內各成分的含量。
所述的步驟(1)的超聲萃取方法具體步驟為準確稱取樣品，用卯％丙酮,
內含0.1%的抗氧劑，在室溫下超聲萃取15—25 min，過濾；濾渣再用90%丙 酮，內含0.1%的抗氧劑，洗滌2 3次，至濾渣為白色，合并濾液，定容；取 萃取液，過濾，濾液即為快速提取的質體色素溶液。 所述的抗氧劑為二丁基羥基甲苯。
步驟(2)的高效液相色譜法采用的色譜柱為反相C18液相色譜柱，十八垸 基硅烷鍵合硅膠填充劑。
步驟(2)中高效液相色譜法的流動相由A與B組成；其中A由濃度為80% 的乙腈與異丙醇組成，B為超純水。
液動相A中濃度為80M的乙腈與異丙醇的體積比為1: 1。
步驟(2)中采用線性梯度洗脫；流速0.5ml/min，進樣量為10uL，柱溫 為40。C，檢測波長為450nm。
本發(fā)明釆用超聲萃取方法進行快速提取煙草及煙草制品中的質體色素，大 大縮短了質體色素測定的前處理時間，提取僅需要30分鐘左右，而現(xiàn)有技術提 取質體色素往往需要4一5個小時，本發(fā)明的提取方法大大縮短了提取時間，提 高了工作效率。本發(fā)明采用高效液相色譜法對提取的質體色素進行快速測定， 可以快速、準確地測出質體色素中的各成分的含量，大大提高了測定精度。采 用本發(fā)明的提取和測定方法，大大提高了工作效率，同時還降低了成本，具有 很好的社會價值和經濟價值，易于推廣應用。
本發(fā)明的方法簡化了樣品的前處理步驟，采用超聲萃取方法快速提取質體 色素，利用髙效液相色譜法測定了煙草及煙草制品中的質體色素，取得較滿意 的結果，其操作簡單易控，測定結果精度較高，為進一步研究煙草及煙草制品
4中質體色素與煙草品質關系提供了切實可行的技術路線。


圖1為本發(fā)明中質體色素的高效液相色譜圖。
具體實施方式
實施例l
按照樣品取樣標準抽取烤后煙葉樣品500g，在4(TC的溫度下烘干4h，粉 碎，過40目篩子，樣品制備結束;準確稱取制備后樣品5.0000 g(精確至0.0001g)， 倒入100ml三角瓶，用40ml 90%的丙酮(內含0.1 %二丁基羥基甲苯BHT) 倒入三角瓶中，室溫下超聲萃取20 min，過濾，濾渣再用10 ml 90%的丙酮(內 含0.1%二丁基羥基甲苯BHT)洗滌2—3次，合并濾液，定容至100 ml，取2mL 萃取液，用0.45um微孔濾膜過濾，濾液進行HPLC分析，外標法定量；其中， 色譜柱為SymmetryC18反相色譜柱(3.9mm i.d. X150mm， 4u m)(美國Waters 公司)；流動相為A， 80%乙腈異丙醇=1: 1， B、超純水；流速0.5ml/min, 在線梯度淋洗(如表l);檢測波長450nm，進樣量10ul，柱溫20'C。
圖1中，9.14 min的峰圖為新黃質，11.3 min的峰圖為紫黃質，17.5 min 的峰圖為葉黃素，25.97 min的峰圖為葉綠素b, 28.47 mhi的峰圖為葉綠素a， 35.19 min的峰圖為0 -胡蘿卜素。
表l流動相的梯度條件
時間(min)A%B%
01000
400100
實施例2
按照樣品取樣標準抽取巻煙成品樣品500g，在40'C的溫度下烘干4h，粉 碎,過40目篩子，樣品制備結束;準確稱取制備后樣品5.0000 g(精確至0.0001g), 倒入100ml三角瓶，用40ml 90%的丙酮(內含0.1 %二丁基羥基甲苯BHT)倒入三角瓶中，室溫下超聲萃取20 min，過濾，濾渣再用10 ml卯％的丙酮(內 含0.1%二丁基羥基甲苯BHT)洗滌2 3次，合并濾液，定容至100 ml，取2mL 萃取液'，用0.45um微孔濾膜過濾，濾液進行HPLC分析，外標法定量；色譜 柱為SymmetryC18反相色譜柱(3.9mm i.d. X 150mm， 4 u m)(美國Waters公 司)；流動相為A、 80%乙腈異丙醇=1: 1， B、超純水；流速0.5ml/min， 梯度淋洗；檢測波長450nm，進樣量10 ul，柱溫20°C 。 實施例3
取田間新鮮煙葉3000 g，在-45'C的溫度下凍干，粉碎，過40目篩子，樣 品制備結束；準確稱取制備后樣品1.0000 g (精確至O.OOOlg)，倒入100ml三 角瓶，用40ml 90。/o的丙酮(內含0.lX二丁基羥基甲苯BHT)倒入三角瓶中， 室溫下超聲萃取20min，過濾，濾渣再用10ml卯％的丙酮(內含0.1 %二丁 基羥基甲苯BHT)洗滌2 3次，合并濾液，定容至100ml，取2mL萃取液， 用0.45 ix m微孔濾膜過濾，濾液進行HPLC分析，外標法定量；色譜柱為 SymmetryC18反相色譜柱(3.9mm i.d. X150mm， 4nm)(美國Waters公司)； 流動相為A、 80%乙腈異丙醇=1: 1， B、超純水；流速為0.5ml/min,梯 度淋洗；檢測波長為450nm，進樣量為10nl，柱溫為20。C。
最后所應說明的是以上實施例僅用以說明，而非限制本發(fā)明的技術方案， 盡管參照上述實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理 解依然可以對本發(fā)明進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明的精神和范圍 的任何修改或局部替換，其均應涵蓋在本發(fā)明的權利要求范圍當中。
權利要求
1、一種煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法，其特征在于包括以下步驟(1)采用超聲萃取的方法快速提取煙草及煙草制品中的質體色素；(2)超聲萃取后提取的質體色素采用高效液相色譜法測定其內各成分的含量。
2、 根據權利要求1所述的煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法， 其特征在于所述的步驟(1)的超聲萃取方法具體步驟為準確稱取樣品，用 卯％丙酮，內含0.1%的抗氧劑，在室溫下超聲萃取15—25 min，過濾；濾渣再 用卯％丙酮，內含0.1%的抗氧劑，洗滌2 3次，至濾渣為白色，合并濾液， 定容；取萃取液，過濾，濾液即為快速提取的質體色素溶液。
3 、根據權利要求2所述的煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法， 其特征在于所述的抗氧劑為二丁基羥基甲苯。
4、 根據權利要求1—3中任一條所述的煙草及煙草制品中質體色素快速提 取及測定方法，其特征在于步驟(2)的高效液相色譜法采用的色譜柱為反相 C18液相色譜柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑。
5、 根據權利要求4所述的煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法， 其特征在于步驟(2)中高效液相色譜法的流動相由A與B組成；其中A由 濃度為80%的乙腈與異丙醇組成，B為超純水。
6、 根據權利要求5所述的煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法， 其特征在于液動相A中濃度為80o/。的乙腈與異丙醇的體積比為l: 1。
7、 根據權利要求6所述的煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法， 其特征在于步驟(2)中采用線性梯度洗脫；流速0.5 ml/min，進樣量為10 pL，柱溫為40。C，檢測波長為450nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種煙草及煙草制品中質體色素快速提取及測定方法，包括以下步驟(1)采用超聲萃取的方法快速提取煙草及煙草制品中的質體色素；(2)超聲萃取后提取的質體色素采用高效液相色譜法測定其內各成分的含量。本發(fā)明采用高效液相色譜法對提取的質體色素進行快速測定，可以快速、準確地測出質體色素中的各成分的含量，大大提高了測定精度。采用本發(fā)明的提取和測定方法，大大提高了工作效率，同時還降低了成本，具有很好的社會價值和經濟價值，易于推廣應用。
文檔編號G01N30/00GK101487820SQ20081004911
公開日2009年7月22日 申請日期2008年1月18日 優(yōu)先權日2008年1月18日
發(fā)明者劉蕙芳, 張東豫, 張弘韜, 李世勇, 田海英, 韋鳳杰 申請人:河南中煙工業(yè)公司