專利名稱：均相免疫分析納米器件的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種均相免疫分析納米器件的構(gòu)建方法，基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移原理，構(gòu)建用于均相免疫分析的納米器件，屬于生物分子納米器件制備和生物分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
免疫分析是基于抗體和抗原特異性結(jié)合反應(yīng)而建立的一種高選擇性的分析方法，它被廣泛地用于臨床分析，食品分析，環(huán)境分析等領(lǐng)域。目前免疫分析主要采用熒光，化學(xué)發(fā)光和放射等檢測(cè)手段。其中化學(xué)發(fā)光檢測(cè)具有檢測(cè)儀器簡(jiǎn)單，靈敏度高等特點(diǎn)，但選擇性差，本體溶液自發(fā)光干擾較大。另外，目前免疫分析主要采用非均相模式，需要多步繁瑣的操作如涂板，分離，清洗，分析時(shí)間長(zhǎng)。
液相法(或稱為均相法)的免疫反應(yīng)和信號(hào)測(cè)定在溶液中一步完成，沒(méi)有固相的參與，因此反應(yīng)速度較快，操作也相應(yīng)簡(jiǎn)單，其中均相熒光免疫測(cè)定應(yīng)用最為廣泛。目前均相熒光免疫分析是基于熒光共振能量轉(zhuǎn)原理。
熒光量子點(diǎn)(quantum dots，QDs)是一種由II族-VI族或III族-V族元素組成的無(wú)機(jī)納米顆粒，與傳統(tǒng)熒光探針相比，它具有激發(fā)光譜寬，發(fā)射光譜窄并且呈對(duì)稱分布，通過(guò)調(diào)節(jié)組成和大小可以使其發(fā)射出不同顏色的光等特點(diǎn)，量子點(diǎn)作為熒光探針標(biāo)記生物分子的研究已經(jīng)用于細(xì)胞成像，免疫分析，DNA雜交等方面。傳統(tǒng)有機(jī)熒光染料吸收光譜窄，發(fā)射光譜常常伴有拖尾，這樣會(huì)影響供體發(fā)射光譜與受體吸收光譜的重疊程度，而且供體和受體發(fā)射光譜產(chǎn)生相互干擾，限制了熒光共振能量轉(zhuǎn)移在均相免疫分析中的應(yīng)用。最新的一些報(bào)道將發(fā)光量子點(diǎn)用于熒光共振能量轉(zhuǎn)移免疫分析中，克服了有機(jī)熒光染料的不足之處。Goldman等人(Goldman，E.R.；Clapp，A.R.；Anderson，G.P.；Uyeda，H.T.；Mauro，J.M.；Medintz，I.L.；Mattoussi，H.Multiplexed Toxin Analysis Using Four Colors ofQuantum Dot Fluororeagents，Anal.Chem.2004，76，684-688)基于免疫反應(yīng)，通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移，采用四種不同發(fā)射波長(zhǎng)的熒光量子點(diǎn)實(shí)現(xiàn)了對(duì)四種毒素的同時(shí)檢測(cè)。
但是熒光共振能量轉(zhuǎn)移分析系統(tǒng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，儀器價(jià)格昂貴。另外，生物體內(nèi)自身熒光會(huì)增加背景的干擾，其應(yīng)用受到一定的限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種均相免疫分析納米器件的構(gòu)建方法，構(gòu)建的免疫分析納米器件不需要外加激光光源，發(fā)射波長(zhǎng)可調(diào)，具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，通過(guò)化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移產(chǎn)生強(qiáng)的光信號(hào)，可用于均相免疫分析。
為實(shí)現(xiàn)這一目的，本發(fā)明基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(chemiluminescenceresonance energy transfer，CRET)原理構(gòu)建免疫分析納米器件，這種納米器件由過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)、免疫復(fù)合物和能量受體納米粒子碲化鎘量子點(diǎn)組成，是以一種基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移原理發(fā)光的碲化鎘量子點(diǎn)為核心，經(jīng)碲化鎘熒光量子點(diǎn)與抗原或抗體以靜電或共價(jià)作用連接，過(guò)氧化物酶與抗體共價(jià)連接，基于抗原-抗體免疫反應(yīng)的生物納米器件。
本發(fā)明的方法具體包括如下步驟1.碲氫化鈉制備將摩爾比為1∶4至4∶1的硼氫化鈉和碲粉置于水中，在0-50℃下反應(yīng)，生成碲氫化鈉溶液。
2.水溶性碲化鎘量子點(diǎn)的合成將0.00001-0.1摩爾/升氯化鎘和水溶性巰基化合物混合配成溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0-10.0，通氮?dú)獬跞昼姾?，在劇烈的攪拌并在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，注入碲氫化鈉溶液，形成碲化鎘單體溶液。碲化鎘單體溶液中二價(jià)鎘離子∶碲氫化鈉∶水溶性巰基化合物的摩爾比為2∶1∶4至2∶1∶8，控制碲化鎘單體溶液的反應(yīng)溫度為70-140℃，反應(yīng)時(shí)間0.5-20小時(shí)，得到發(fā)光范圍在500到750納米的一系列碲化鎘量子點(diǎn)水溶液。
3.水溶性碲化鎘量子點(diǎn)-抗原(或抗體)生物標(biāo)記物溶液的制備將0.001-5毫克/毫升碲化鎘量子點(diǎn)，乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、抗原(或抗體)，置于0.01摩爾/升、pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中混合均勻，碲化鎘量子點(diǎn)、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽、抗原(或抗體)的摩爾比為1∶100∶0.2至1∶1000∶6，將混合溶液于常溫下避光反應(yīng)2-4小時(shí)。采用超濾法純化得到碲化鎘量子點(diǎn)-抗原(或抗體)生物標(biāo)記物溶液。最后置于4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> 4.過(guò)氧化物酶和抗體(或抗原)的共價(jià)連接。
將0.001-4毫克/毫升過(guò)氧化物酶、EDC和N-羥基丁二酰亞胺置于0.01摩爾/升pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中，混合反應(yīng)約15分鐘，采用超濾法純化此反應(yīng)溶液。然后在此純化了的溶液中加入0.001-3毫克/毫升抗體(或抗原)。過(guò)氧化物酶、EDC、抗體或抗原的摩爾比為1∶100∶0.2至1∶200∶5，將混合溶液于常溫下避光反應(yīng)1-2小時(shí)。采用超濾法純化得到過(guò)氧化物酶-抗體(或抗原)生物標(biāo)記物溶液。最后置于4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> 5.基于抗原-抗體免疫反應(yīng)，構(gòu)建過(guò)氧化物酶-免疫復(fù)合物-碲化鎘量子點(diǎn)生物納米器件。
分別取5-50微升碲化鎘量子點(diǎn)-抗原(或抗體)生物標(biāo)記物溶液和過(guò)氧化物酶-抗體(抗原)生物標(biāo)記物溶液置于微型管中，然后用0.01摩爾/升pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋至500微升，漩渦混合均勻，最后至37攝氏度恒溫2-3小時(shí)，得到碲化鎘量子點(diǎn)-抗原-抗體-過(guò)氧化物酶免疫納米器件，或碲化鎘量子點(diǎn)-抗體-抗原-過(guò)氧化物酶免疫納米器件。
取出納米器件，即可用于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移分析。
本發(fā)明的生物納米器件由過(guò)氧化物酶、免疫復(fù)合物、能量受體熒光納米粒子組成。
本發(fā)明所述的免疫復(fù)合物由抗原和抗體發(fā)生特異性結(jié)合得到(如牛血清白蛋白和牛血清白蛋白抗體結(jié)合得到的免疫復(fù)合物)。所述的免疫復(fù)合物中抗原包括牛血清白蛋白，癌胚抗原，α-胎甲球蛋白，降鈣素，甲狀腺蛋白，癌抗原CA125，癌抗原CA 5-3和癌抗原CA19-9等。
本發(fā)明所述的能量受體熒光納米粒子為水相合成不同尺寸的巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點(diǎn)，其發(fā)射波長(zhǎng)為500-750納米，量子產(chǎn)率為20-60％，其表面修飾有多個(gè)羧基(-COOH)，用于與蛋白質(zhì)(如抗原)上的氨基(-NH2)共價(jià)連接。
在本發(fā)明中，建立了一種基于化學(xué)發(fā)光物質(zhì)為能量供體和熒光量子點(diǎn)為能量受體的新型共振能量轉(zhuǎn)移，即化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移，它與生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移較為相似?；瘜W(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移是指基于反應(yīng)底物氧化后的化學(xué)發(fā)光試劑供體和適合的受體間的非輻射共振能量轉(zhuǎn)移。它與熒光共振能量轉(zhuǎn)移之間的區(qū)別主要在于熒光共振能量轉(zhuǎn)移過(guò)程需要外加的光源而化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移基于反應(yīng)底物(如魯米諾，luminol)氧化而產(chǎn)生，并不需要外加光源。由于減少了背景熒光干擾，它相對(duì)于熒光共振能量轉(zhuǎn)移而言具有更高的靈敏度(即信噪比)。
制備的免疫復(fù)合物納米器件可用于均相免疫分析，包括夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法兩種。在競(jìng)爭(zhēng)法中，熒光量子點(diǎn)和過(guò)氧化物酶分別標(biāo)記一對(duì)抗原、抗體中的一種，分別形成熒光量子點(diǎn)-抗體和過(guò)氧化物酶-抗原，它們因免疫反應(yīng)而聚集在一起，發(fā)生化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移，當(dāng)待測(cè)樣品中存在相應(yīng)的未標(biāo)記的抗原或抗體時(shí)，就可能與已標(biāo)記的抗原或抗體競(jìng)爭(zhēng)，發(fā)生取代而生成無(wú)化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移的免疫復(fù)合物，使檢測(cè)信號(hào)減少。
本發(fā)明的方法成本低，操作簡(jiǎn)便，條件溫和。產(chǎn)物生物納米器件具有水溶性和穩(wěn)定性好，熒光量子產(chǎn)率高，發(fā)光范圍寬等特點(diǎn)，用于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移，不需要外加激光光源。制備的免疫復(fù)合物納米器件可用于均相免疫分析。


圖1為基于抗原和抗體免疫反應(yīng)的免疫分析納米器件示意圖。
圖2為分別用不同尺寸的碲化鎘量子點(diǎn)為能量受體的免疫分析納米器件化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移譜圖。所用量子點(diǎn)發(fā)光波長(zhǎng)分別為557納米，587納米，622納米和657納米。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合附圖并通過(guò)幾個(gè)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。
本發(fā)明制備的生物納米器件結(jié)構(gòu)如圖1所示，由過(guò)氧化物酶、免疫復(fù)合物和納米粒子碲化鎘量子點(diǎn)構(gòu)成。在圖1中，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)魯米諾作為能量供體，碲化鎘量子點(diǎn)作為能量受體。碲化鎘量子點(diǎn)與抗原連接，而過(guò)氧化物酶與抗體連接。當(dāng)碲化鎘量子點(diǎn)-抗原與過(guò)氧化物酶-抗體標(biāo)記物發(fā)生免疫反應(yīng)時(shí)，化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移發(fā)生。
實(shí)施例1(1)碲氫化鈉制備將80毫克碲粉、80毫克硼氫化鈉和2毫升水放在一個(gè)10毫升的小燒瓶中，在室溫下反應(yīng)8小時(shí)，制備得到碲氫化鈉溶液。
(2)水溶性碲化鎘量子點(diǎn)的合成將0.00125摩爾/升氯化鎘和0.003摩爾/升巰基丙酸混合配成溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，通氮?dú)獬跞昼姾?，在劇烈的攪拌并在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，注入碲氫化鈉溶液，形成碲化鎘單體溶液。加入的二價(jià)鎘離子∶碲氫化鈉∶巰基丙酸摩爾比為2∶1∶4.8。將已經(jīng)得到的前驅(qū)體溶液放入微波消解罐，通過(guò)微波輻射加熱?？刂品磻?yīng)時(shí)間0.5-2小時(shí)，得到水溶性碲化鎘量子點(diǎn)量子產(chǎn)率為20-60％，發(fā)射波長(zhǎng)為500-750納米。
(3)通過(guò)靜電作用制備碲化鎘量子點(diǎn)-牛血清白蛋白生物標(biāo)記物含5毫克/毫升碲化鎘量子點(diǎn)，6毫克/毫升牛血清白蛋白于0.01摩爾/升pH7.0的磷酸鹽緩沖液混合均勻，混合溶液于常溫下避光反應(yīng)1-2小時(shí)。采用超濾法純化量子點(diǎn)生物標(biāo)記物。最后至4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> (4)兔抗牛血清白蛋抗體-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的制備含4毫克/毫升過(guò)氧化物酶，2毫克/毫升EDC和3毫克/毫升N-羥基丁二酰亞胺于0.01摩爾/升pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中混合反應(yīng)約15分鐘，采用超濾法純化該反應(yīng)溶液。然后在此純化的溶液中加入10毫克/毫升兔抗牛血清白蛋白抗體溶液。混合溶液于常溫下避光反應(yīng)1-2小時(shí)。采用超濾法純化此生物標(biāo)記物，最后至4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> (5)通過(guò)免疫反應(yīng)制備免疫分析納米器件分別取5微升純化的量子點(diǎn)-牛血清白蛋白標(biāo)記溶液和兔抗牛血清白蛋白抗體-過(guò)氧化物酶標(biāo)記溶液置于微型管中，然后用0.01摩爾/升pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋至500微升，漩渦混合均勻，最后至37℃恒溫2-3小時(shí)，得到量子點(diǎn)-牛血清白蛋白-兔抗牛血清白蛋白抗體-過(guò)氧化物酶納米器件。取出反應(yīng)溶液用于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移分析，分析結(jié)果如圖2所示。在圖2中，采用四種不同尺寸發(fā)射波長(zhǎng)為557，587，622和657納米的碲化鎘量子點(diǎn)分別用作能量受體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示當(dāng)抗原牛血清白蛋白-碲化鎘量子點(diǎn)標(biāo)記物與過(guò)氧化物酶-牛血清白蛋白抗體標(biāo)記物發(fā)生免疫反應(yīng)時(shí)，產(chǎn)生了化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移。圖2中第一個(gè)峰為魯米諾發(fā)光峰(左)，后面四個(gè)的峰為碲化鎘量子點(diǎn)發(fā)光峰。
實(shí)施例2(1)碲氫化鈉制備同實(shí)施例1。
(2)水溶性碲化鎘量子點(diǎn)的合成同實(shí)施例1。
(3)碲化鎘量子點(diǎn)-癌抗原125(CA125)生物標(biāo)記物的制備將含0.3毫克/毫升碲化鎘量子點(diǎn)，0.6毫克/毫升EDC和0.3毫克/毫升CA125于0.01摩爾/升pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中混合均勻，混合溶液于常溫下避光反應(yīng)2-4小時(shí)。采用超濾法純化量子點(diǎn)生物標(biāo)記物。最后至4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> (4)CA125抗體-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的制備取0.2毫克/毫升過(guò)氧化物酶溶液，0.2毫克/毫升EDC溶液和0.3毫克/毫升N-羥基丁二酰亞胺于0.01摩爾/升pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液混合反應(yīng)約15分鐘，采用超濾法純化該反應(yīng)溶液。然后在此純化了的溶液中加入CA125抗體溶液，混合溶液于常溫下避光反應(yīng)1-2小時(shí)。標(biāo)記溶液置于磁力攪拌器上勻速攪拌，使其反應(yīng)均勻。采用超濾法純化此生物標(biāo)記物，最后至4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> (5)通過(guò)免疫反應(yīng)制備免疫分析納米器件分別取50微升純化的量子點(diǎn)-CA125標(biāo)記溶液和CA125抗體-過(guò)氧化物酶標(biāo)記溶液置于微型管中，然后用0.01摩爾/升pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋至500微升，漩渦混合均勻，最后至37攝氏度恒溫2-3小時(shí)，得到量子點(diǎn)-CA125-CA125抗體-過(guò)氧化物酶納米器件。取出反應(yīng)溶液，用于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移分析。
實(shí)施例3(1)碲氫化鈉制備同實(shí)施例1。
(2)水溶性碲化鎘量子點(diǎn)的合成同實(shí)施例1。
(3)碲化鎘量子點(diǎn)-癌抗原19-9(CA19-9)生物標(biāo)記物的制備將含0.05毫克/毫升碲化鎘量子點(diǎn)，0.1毫克/毫升EDC和0.05毫克/毫升CA19-9于0.01摩爾/升pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中混合均勻，混合溶液于常溫下避光反應(yīng)2-4小時(shí)。采用超濾法純化量子點(diǎn)生物標(biāo)記物。最后至4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> (4)CA19-9抗體-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的制備將含0.04毫克/毫升過(guò)氧化物酶溶液，0.04毫克/毫升EDC溶液和0.06毫克/毫升N-羥基丁二酰亞胺于0.01摩爾/升，pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中混合反應(yīng)約15分鐘，采用超濾法純化該反應(yīng)溶液。然后在此純化的溶液中加入0.1毫克/毫升CA19-9抗體溶液，混合溶液于常溫下避光反應(yīng)1-2小時(shí)。標(biāo)記溶液置于磁力攪拌器上勻速攪拌，使其反應(yīng)均勻。采用超濾法純化此生物標(biāo)記物，最后至4攝氏度冰箱處保存?zhèn)溆谩?br> (5)通過(guò)免疫反應(yīng)制備免疫分析納米器件分別取50微升純化的量子點(diǎn)-CA19-9標(biāo)記溶液和CA19-9抗體-過(guò)氧化物酶標(biāo)記溶液置于微型管中，然后用0.01摩爾/升磷酸鹽緩沖液(pH7.4)稀釋至500微升，漩渦混合均勻，最后至37攝氏度恒溫2-3小時(shí)，得到量子點(diǎn)-CA19-9-CA19-9抗體-過(guò)氧化物酶納米器件。取出反應(yīng)溶液，用于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移分析。
權(quán)利要求
1.一種均相免疫分析納米器件的構(gòu)建方法，其特征在于包括如下步驟(1)碲氫化鈉制備將摩爾比為1∶4至4∶1的硼氫化鈉和碲粉置于水中，在0-50℃下反應(yīng)，生成碲氫化鈉溶液；(2)水溶性碲化鎘量子點(diǎn)的合成將0.00001-0.1摩爾/升氯化鎘和水溶性巰基化合物混合配成溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0-10.0，通氮?dú)獬跞昼姾?，攪拌并在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，注入碲氫化鈉溶液，形成碲化鎘單體溶液；碲化鎘單體溶液中二價(jià)鎘離子∶碲氫化鈉∶水溶性巰基化合物的摩爾比為2∶1∶4至2∶1∶8；控制碲化鎘單體溶液的反應(yīng)溫度為70-140℃，反應(yīng)時(shí)間0.5-20小時(shí)，得到發(fā)光范圍在500到750納米的碲化鎘量子點(diǎn)水溶液；(3)水溶性碲化鎘量子點(diǎn)-抗原或抗體生物標(biāo)記物溶液的制備將0.001-5毫克/毫升碲化鎘量子點(diǎn)、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽、抗原或抗體，置于0.01摩爾/升、pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中混合均勻，碲化鎘量子點(diǎn)、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽、抗原或抗體的摩爾比為1∶100∶0.2至1∶1000∶6，將混合溶液于常溫下避光反應(yīng)2-4小時(shí)，采用超濾法純化得到碲化鎘量子點(diǎn)—抗原或抗體生物標(biāo)記物溶液，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?4)過(guò)氧化物酶、抗體或抗原的共價(jià)連接將0.001-4毫克/毫升過(guò)氧化物酶、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基丁二酰亞胺置于0.01摩爾/升pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中，混合反應(yīng)15分鐘，采用超濾法純化此反應(yīng)溶液，然后在此純化了的溶液中加入0.001-3毫克/毫升抗體或抗原，過(guò)氧化物酶、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽、抗體或抗原的摩爾比為1∶100∶0.2至1∶200∶5，將混合溶液于常溫下避光反應(yīng)1-2小時(shí)，采用超濾法純化得到過(guò)氧化物酶-抗體或抗原生物標(biāo)記物溶液，置于4攝氏度冰箱保存?zhèn)溆茫?5)基于抗原-抗體免疫反應(yīng)，構(gòu)建過(guò)氧化物酶-免疫復(fù)合物-碲化鎘量子點(diǎn)生物納米器件分別取5-50微升碲化鎘量子點(diǎn)-抗原或抗體生物標(biāo)記物溶液和過(guò)氧化物酶-抗體或抗原生物標(biāo)記物溶液置于微型管中，然后用0.01摩爾/升、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋至500微升，漩渦混合均勻，最后至37攝氏度恒溫2-3小時(shí)，得到碲化鎘量子點(diǎn)-抗原-抗體-過(guò)氧化物酶免疫納米器件，或碲化鎘量子點(diǎn)-抗體-抗原-過(guò)氧化物酶免疫納米器件。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的均相免疫分析納米器件的構(gòu)建方法，其特征在于所述抗原為牛血清白蛋白、癌胚抗原、α-胎甲球蛋白、降鈣素、甲狀腺蛋白、癌抗原CA 125、癌抗原CA 15-3或癌抗原CA19-9。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法構(gòu)建的均相免疫分析納米器件，其特征在于該生物納米器件由過(guò)氧化物酶、抗體或抗原、能量受體熒光納米粒子組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的均相免疫分析納米器件，其特征在于所述能量受體熒光納米粒子為水相合成不同尺寸的巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點(diǎn)，其發(fā)射波長(zhǎng)為500-750納米，量子產(chǎn)率為20-60％，其表面修飾有多個(gè)羧基(-COOH)，用于與蛋白質(zhì)上的氨基(-NH2)共價(jià)連接。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種均相免疫分析納米器件的構(gòu)建方法，這種納米器件由過(guò)氧化物酶、免疫復(fù)合物和能量受體納米粒子碲化鎘量子點(diǎn)組成，是以一種基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移原理發(fā)光的碲化鎘量子點(diǎn)為核心，經(jīng)碲化鎘熒光量子點(diǎn)與抗原或抗體以靜電或共價(jià)作用連接，過(guò)氧化物酶與抗體共價(jià)連接，基于抗原—抗體免疫反應(yīng)的生物納米器件。這種免疫分析納米器件具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，發(fā)射波長(zhǎng)可調(diào)，不需要外加激光光源，背景干擾小，通過(guò)化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移產(chǎn)生強(qiáng)的光信號(hào)，可用于均相免疫分析。
文檔編號(hào)G01N21/76GK101059508SQ20071004047
公開(kāi)日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2007年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月10日
發(fā)明者任吉存, 黃香宜 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)