專利名稱：近紅外光譜快速在線檢測中藥苦黃注射劑有效成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥注射劑成分的檢測方法，具體地說是涉及一種采用近紅外光譜檢測苦黃注射劑有效成分快速在線檢測方法，實現(xiàn)對中藥注射劑有效成分的快速在線檢測。
背景技術(shù)：
苦黃注射液起源于我國古代著名醫(yī)圣張仲景所著“傷寒論”中名方“茵陳蒿湯”，由苦參、大黃等我國道地中藥材組方，經(jīng)科學提取和精制而成，是國家中藥保護品種?？帱S注射液臨床治療各型肝病，退黃迅速、降酶顯著，能提高免疫同時改善臨床癥狀，且安全度高?？帱S注射液的有效成分主要是蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、槐果堿、苦參堿，傳統(tǒng)的測定方法如HPLC，樣品處理過程及操作復雜，難以實現(xiàn)在線檢測。
近紅外技術(shù)作為一種在線檢測方法，具有無前處理、無污染、方便快捷和多組分同時檢測等優(yōu)點，近年來在食品、化工、醫(yī)藥和環(huán)保領(lǐng)域中得到空前的發(fā)展。而且光譜技術(shù)作為構(gòu)建指紋圖譜的組成部分，在中藥質(zhì)量標準的構(gòu)建中也將發(fā)揮著重要的作用。本發(fā)明將近紅外技術(shù)應用于中藥注射液的有效成分的快速在線檢測，有助于中藥注射劑生產(chǎn)過程的全程質(zhì)量控制，達到中藥自動化、標準化生產(chǎn)，可以充分保證產(chǎn)品的質(zhì)量水平達到安全，穩(wěn)定，可控，消除不良反應隱患，對整個中藥注射劑的健康發(fā)展具有較好的示范作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用近紅外光譜快速在線檢測中藥苦黃注射劑有效成分的方法。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種近紅外光譜快速在線檢測中藥苦黃注射劑有效成分的方法，其特征在于檢測步驟如下(1)用高效液相法(HPLC)測定中藥苦黃注射劑樣品中有效成分蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、槐果堿、苦參堿的含量，并以此含量作為對照值；
(2)掃描苦黃注射劑樣品的近紅外吸收光譜；采用近紅外線吸收檢測系統(tǒng)，以固定分辨率在設定波長9500-4000cm-1范圍內(nèi)，以內(nèi)置背景為參照進行多次掃描，每批樣品取3份做平行，每份重復3次，取平均值為吸收值；(3)近紅外光譜預處理；結(jié)合多重散射校正和導數(shù)光譜法對近紅外吸收光譜進行預處理，用以消除光譜散射效應和基線飄移；(4)選擇波長；水分子在波數(shù)5000cm-1和7000cm-1附近的兩個強吸收帶，對其他分子吸收峰有較強干擾，本發(fā)明首先采用基線校正的方法去除這兩個強吸收帶，再根據(jù)RMSEP值對建模波段進行局部修飾，確定最優(yōu)建模波段；(5)用PLS法(偏最小二乘法)建立近紅外光譜多元校正模型；以交叉驗證誤差均方根(RMSECV)為指標，運用留一法交叉驗證(LOOCV)確定最佳PLS主因子數(shù)，模型對未知樣本的預測效果采用預測誤差均方根(RMSEP)來考核。
上述的檢測方法在中藥注射劑有效成分的快速檢測中的應用。
上述的檢測方法在苦黃注射劑有效成分的快速檢測中的應用。
四

圖1苦黃注射液原始近紅外光譜圖五具體實施方式
近紅外線光譜快速在線檢測苦黃注射液有效成分的方法，其檢測步驟如下(1)用高效液相法(HPLC)測定苦黃折射液樣品中有效成分蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、槐果堿、苦參堿的含量，并以此作為對照值，具體方法如下1.蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量測定色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以冰醋酸∶水(1∶100)為流動相A相，冰醋酸∶甲醇(1∶100)為流動相B相，按以下線性梯度洗脫0min(15％B)，25min(67％B)，65min(100％B)；柱溫40℃；檢測波長為254nm。理論塔板數(shù)以大黃酸峰計算不低于15000。
對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，加甲醇溶解并稀釋成每1ml含0.03mg蘆薈大黃素、0.1mg大黃酸、0.2mg大黃素、0.1mg大黃酚、0.02mg大黃素甲醚的溶液，即得。
供試品溶液的制備準確量取苦黃注射液5ml于圓底燒瓶中，加入冰醋酸-鹽酸(5∶1)的混合溶液2ml和石油醚(60～90℃)50ml，置水浴中加熱回流1小時，放冷，分取有機相，水相再用石油醚60～90℃)同法提取3次(50、30、30ml)，每次約30min，至石油醚層近無色，合并石油醚提取液，回收石油醚至干，殘渣用氯仿溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，即得測定法分別精密吸取對照品溶液2μl、供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表1。
2.槐果堿、苦參堿的含量測定色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(適用pH范圍1.5～11.5)；以水∶氨水∶甲醇(52∶0.05∶48，v/v/v)為流動相；柱溫40℃；檢測波長為220nm。理論塔板數(shù)以苦參堿峰計算不低于10000。
對照品溶液的制備精密稱取槐果堿、苦參堿對照品適量，用少量甲醇溶解并用水稀釋制成每1ml含槐果堿0.1mg、苦參堿0.4mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取苦黃注射液作為供試品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表1。
表1HPLC法測定的樣品有效成分含量(mg/mL)

(2)掃描樣品的近紅外漫反射光譜。
采用近紅外檢測系統(tǒng)，以固定分辨率在設定波長9500-4000cm-1范圍內(nèi)，以內(nèi)置背景為參照進行多次掃描，每批樣品取3份做平行，每份重復3次，結(jié)果見圖1。
(3)近紅外光譜預處理。
結(jié)合多重散射校正和導數(shù)光譜法對近紅外光譜進行預處理，用以消除光譜散射效應和基線飄移。
(4)選擇波長。
水分子在波數(shù)5000cm-1和7000cm-1附近的兩個強吸收帶，對其他分子吸收峰有較強干擾。本發(fā)明首先采用基線校正的方法去除這兩個強吸收帶，再根據(jù)RMSEP值對建模波段進行局部修飾，確定最優(yōu)建模波段，結(jié)果如表2所示。
表2近紅外光譜建模波段

(5)用PLS法建立近紅外光譜多元校正模型。
以交叉驗證誤差均方根(RMSECV)為指標，運用留一法交叉驗證(LOOCV)確定最佳PLS主因子數(shù)。模型對未知樣本的預測效果采用預測誤差均方根(RMSEP)來考核。模型預測值與實際測定值比較，以驗證預測模型的可靠性。結(jié)果見表3。
表3預測值與實測值比較成分名稱 HPLC測得值(mg/ml) 預測值(mg/ml)蘆薈大黃素0.00690.0073大黃酸0.00680.0072大黃素0.01800.0171大黃酚0.01720.0166槐果堿0.145 0.153苦參堿0.439 0.428
本發(fā)明提出近紅外光譜在線檢測中藥注射劑有效成分含量的方法，研究結(jié)果表明，通過建立PLS多元校正模型，近紅外光譜分析方法可以對苦黃注射液的有效成分進行有效在線檢測。該方法只需要簡單的樣品處理，同傳統(tǒng)方法相比，如HPLC，可以節(jié)省大量的分析時間和花費，從而為發(fā)展中藥等天然藥物實時分析技術(shù)開辟了一個新途徑。
權(quán)利要求
1.一種近紅外光譜快速在線檢測中藥苦黃注射劑有效成分的方法，其特征在于檢測步驟如下(1)用高效液相法測定中藥苦黃注射劑樣品中的有效成分蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、槐果堿、苦參堿的含量，并以此含量作為對照值；(2)掃描苦黃注射劑樣品的近紅外吸收光譜；采用近紅外吸收檢測系統(tǒng)，以固定分辨率在設定波長9500-4000cm-1范圍內(nèi)，以內(nèi)置背景為參照進行多次掃描，每批樣品取3份做平行，每份重復3次，取平均值為吸收值；(3)近紅外光譜預處理；結(jié)合多重散射校正和導數(shù)光譜法對近紅外光譜進行預處理，用以消除光譜散射效應和基線飄移；(4)選擇波長；水分子在波長5000cm-1和7000cm-1附近的兩個強吸收帶，對其他分子吸收峰有較強干擾，本發(fā)明首先采用基線校正的方法去除這兩個強吸收帶，再根據(jù)RMSEP值對建模波段進行局部修飾，確定最優(yōu)建模波段；(5)用PLS法即偏最小二乘法建立近紅外光譜多元校正模型；以交叉驗證誤差均方根為指標，運用留一法交叉驗證確定最佳PLS主因子數(shù)，模型對未知樣本的預測效果采用預測誤差均方根來考核。
2.如權(quán)利要求1所述的在線檢測方法，在中藥注射劑有效成分的快速檢測中的應用。
3.如權(quán)利要求1所述的在線檢測方法，在苦黃注射劑有效成分的快速檢測中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用近紅外光譜快速在線檢測苦黃注射劑有效成分含量的方法?？帱S注射劑的有效成分主要是蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、槐果堿、苦參堿等，采集苦黃注射劑的近紅外吸收光譜，將高效液相(HPLC)方法獲得有效成分含量數(shù)據(jù)同該樣品的近紅外光譜相關(guān)聯(lián)，用偏最小二乘回歸方法建立校正模型，實現(xiàn)對該注射劑有效成分的快速在線檢測。研究結(jié)果表明，近紅外光譜分析方法可以對苦黃注射劑的有效成分進行有效檢測。該方法樣品預處理簡單、檢測快速、同時檢測多個組分，能夠用于中藥制藥過程的實時分析和在線質(zhì)量控制。
文檔編號G01N33/15GK101078685SQ200710022408
公開日2007年11月28日 申請日期2007年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月17日
發(fā)明者陳力建, 王恒斌, 劉雪松, 顧治平, 闕瑞艷 申請人:常熟雷允上制藥有限公司