專利名稱：：癌癥的預(yù)測(cè)和預(yù)后以及監(jiān)控癌癥治療的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物標(biāo)記和生物標(biāo)記用于癌癥的預(yù)測(cè)與預(yù)后的用途以及生物標(biāo)記監(jiān)控癌癥治療效果的用途。特別地，本發(fā)明涉及VEGF作為多激酶抑制劑的生物標(biāo)記的用途。
背景技術(shù)：
：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)及其配體，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF),在內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖中起到關(guān)鍵作用。VEGFR/VEGF系統(tǒng)包括三種受體(VEGFR-l,VEGFR-2和VEGFR-3)和四種配體(VEGF-A,B,C,D和E以及胎盤生長(zhǎng)因子)。VEGF-A進(jìn)一步由四種亞型組成，VEGF-121,VEGF-165,VEGF-185和VEGF-204,它們?cè)醋訴EGF-A基因的可替換轉(zhuǎn)錄。受體是具有胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的血漿跨膜蛋白。與其它蛋白質(zhì)激酶一樣，VEGFR的激活是調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞增殖信號(hào)的關(guān)鍵機(jī)理，并且認(rèn)為VEGFR/VEGF的異常引起各種人類疾病如牛皮痺和惡性胂瘤中的異常血管形成。在胎盤形成中，VEGFR/VEGF系統(tǒng)是血管系統(tǒng)的正常發(fā)育所必需的。在成人中，VEGFR/VEGF在傷口愈合、炎癥和血管形成中是重要的。在藥物治療前對(duì)患者體內(nèi)循環(huán)的VEGF水平的非入侵性測(cè)定對(duì)于治療決策有著潛在的重要輔助作用。盡管總VEGF-A的測(cè)定已經(jīng)用作人類疾病結(jié)果的預(yù)后指標(biāo)，但是沒(méi)有報(bào)道過(guò)化療之前患者體內(nèi)VEGF水平與治療結(jié)果之間的相關(guān)性。因此，VEGF可以作為有價(jià)值的預(yù)后指標(biāo)，并作為監(jiān)測(cè)使用多激酶抑制劑的治療效果的生物標(biāo)記。發(fā)明概述本發(fā)明涉及生物標(biāo)記和生物標(biāo)記用于癌癥的預(yù)測(cè)與預(yù)后的用途以及生物標(biāo)記監(jiān)控癌癥治療效果的用途。特別地，本發(fā)明涉及可溶性VEGF作為多激酶抑制劑(例如，索拉非尼(Sorafenib))的生物標(biāo)記的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用定量免疫測(cè)定來(lái)測(cè)量使用多激酶(例如，索拉非尼)治療前的人體液中VEGF蛋白質(zhì)的水平。所述水平作為使用多激酶抑制劑(例如，索拉非尼)治療的癌癥患者從這樣的治療中獲益的潛能指標(biāo)是特別有用的。VEGF治療后水平的測(cè)量以及療程中VEGF水平的變化在臨床上可以用作患者治療選擇的一種治療學(xué)輔助手段，以監(jiān)控患者體內(nèi)胂瘤發(fā)生前/腫瘤疾病的情況，和/或監(jiān)控腫瘤發(fā)生前/肺瘤疾病患者怎樣應(yīng)答治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，VEGF的水平可以用來(lái)輔助患者治療的選擇，以及為患者治療的最佳方法作出決定?？梢栽诨颊邩悠分袦y(cè)定VEGF的水平，這些樣品如但不限于，血液、血清、血漿、尿液、唾液、精液、乳汁、腦脊髓液、淚液、痰、粘液、淋巴、胞液、腹水、胸膜積液、羊水、膀胱沖洗液和支氣管肺泡灌洗液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及將免疫測(cè)定用作選擇有可能獲益于多激酶抑制劑(例如，索拉非尼)治療的患者的方法，通過(guò)測(cè)量患者樣品中的VEGF預(yù)處理水平和基于可能的患者結(jié)果對(duì)VEGF水平的計(jì)算圖來(lái)評(píng)價(jià)可能的結(jié)果?；颊唧w內(nèi)與激活的VEGF途徑相關(guān)病態(tài)的監(jiān)控方法可以進(jìn)一步預(yù)后疾病，其中患者樣品中的總VEGF蛋白質(zhì)水平表示患者較好或較弱的治療結(jié)果。預(yù)后可以是選自應(yīng)答率(RR)、完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)、穩(wěn)定疾病(SD)、臨床益處[包括完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)和穩(wěn)定疾病(SD)]、進(jìn)展時(shí)間(TTP)、無(wú)進(jìn)展生存(PFS)和總生存率(OS)的臨床結(jié)果。這些方法可以是標(biāo)準(zhǔn)格式化的，例如，夾心免疫測(cè)定形式的免疫測(cè)定，如夾心酶聯(lián)免疫分析(ELISA)或等價(jià)測(cè)定。這些免疫測(cè)定法可以使用單克隆抗體，例如，抗-VEGF單克隆抗體。此外，單克隆抗體可以是生物素化的。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及測(cè)量患者樣品中總VEGF蛋白水平連續(xù)變化的定量免疫測(cè)定，作為患病患者治療選擇的方法，該疾病例如為腫瘤發(fā)生前/腫瘤疾病。例如，一種這樣的治療選擇方法可以包括步驟(a)免疫檢測(cè)和定量對(duì)照群體樣品中總VEGF蛋白質(zhì)的水平；(b)免疫檢測(cè)和定量隨時(shí)間取自患者的樣品中總VEGF蛋白質(zhì)的水平；和(c)根據(jù)患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)的水平?jīng)Q定使用常規(guī)治療和/或多激酶抑制劑(例如，索拉非尼)治療來(lái)治療患者。例如，如果發(fā)現(xiàn)患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)的水平在70pg/ml以上，可以得出的結(jié)論是患者患有VEGF引起的疾病，并作出使用多激酶抑制劑(例如，索拉非尼)治療來(lái)治療患者的結(jié)論，該治療可以是單獨(dú)的或結(jié)合一種或更多其他治療。VEGF途徑定向治療可以是多激酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑、雙芳基脲、VEGFR-2反義抑制劑或單克隆抗體治療等。例如，VEGF途徑定向治療可以是雙芳基脲索拉非尼，其是血管生成抑制劑以及酪氨酸激酶抑制劑，或酪氨酸激酶抑制劑STI571(也稱為曱磺酸伊馬替尼或Gleevec)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及使用定量免疫測(cè)定來(lái)^r測(cè)VEGF水平結(jié)合一種或多種其他蛋白質(zhì)水平的變化。這些其他的蛋白質(zhì)可以包括，例如，抑制劑(例如，金屬蛋白酶-1的組織抑制劑(TIMP-l))、癌蛋白(例如，HER-2/neu,rasp21)、生長(zhǎng)因子受體(例如，表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體a(PDGFR-a))、轉(zhuǎn)移蛋白(例如，尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA))、腫瘤標(biāo)記(例如，癌胚抗原(CEA))和胂瘤抑制基因(例如，p53)。這些方法隨后可以用作，例如，診斷/預(yù)后工具、患病患者的治療選擇、檢測(cè)患者的病況和監(jiān)測(cè)患病患者怎樣應(yīng)答VEGF途徑定向治療或其他治療。測(cè)試患者(例如，癌癥患者)的總VEGF和其他蛋白(如激活VEGF途徑的蛋白)的連續(xù)改變是有利的，這將作為擴(kuò)大臨床觀察，治療來(lái)源和診斷/預(yù)后參數(shù)的工具，以便為了最有前景的治療結(jié)果來(lái)選擇最佳治療組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于監(jiān)控患者樣品中治療效果的試劑盒，其包括蛋白質(zhì)特異性抗體。在特定的實(shí)施方案中，該試劑盒進(jìn)一步包括試劑盒的使用說(shuō)明。在特定的實(shí)施方案中，該試劑盒可以進(jìn)一步包括懸浮或固定細(xì)胞的溶液、檢測(cè)標(biāo)記或指示物、提供對(duì)抗體結(jié)合敏感的多肽的溶液、溶解細(xì)胞的溶液或用于純化多肽的溶液。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，抗體是VEGF特異性的。附圖l說(shuō)明了患者群體在基線(預(yù)治療)和治療過(guò)程中的平均VEGF水平。發(fā)明詳述可以理解本發(fā)明不限于所述的特定方法、實(shí)驗(yàn)方案、細(xì)胞系、動(dòng)物種或?qū)佟?gòu)建體和試劑，同樣可以改變。還可以理解在此所用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述特定實(shí)施方案的目的，并不意味著限制本發(fā)明的范圍，其只受到所附權(quán)利要求的限制。必須注意在此和所附權(quán)利要求中所用的單數(shù)形式"一個(gè)，，，"一種，，和"該"包括復(fù)數(shù)指代物，除非上下文中另外明確地指出。因此，例如，參照"一種基因"指的是一種或多種基因并包括本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的等價(jià)物等。除非另外限定，在此所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義。盡管與在此所述的那些相似或等價(jià)的任何方法、設(shè)備和材料相似或等同的方法、設(shè)備、以及原料可以用于本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中，但是現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法、設(shè)備和材料。在此提及的所有出版物和專利為了描述和公開的目的在此引入作為參考，例如，出版物中描述的構(gòu)建體和方法可以結(jié)合在此所述的本發(fā)明使用。只是為了本申請(qǐng)申請(qǐng)日之前的公開內(nèi)容而提供了以上和整個(gè)文中討論的出版物。在此沒(méi)有任何內(nèi)容解釋為本發(fā)明人依據(jù)先前發(fā)明而有權(quán)預(yù)料這樣的公開內(nèi)容的容許。定乂為了方便，以下提供了說(shuō)明書、實(shí)施例和所附權(quán)利要求中所用的特定術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)的意思。在此所用的術(shù)語(yǔ)"患者樣品"指的是獲自患者的樣品。樣品可以是任何生物組織或流體。樣品可以是源自患者的樣品。這樣的樣品包括，但不限于，血液、血清、血漿、尿液、唾液、精液、乳汁、腦脊髓液、淚液、痰、粘液、、淋巴、胞液、腹水、胸膜積液、腹膜水、羊水、膀胱沖洗液和支氣管肺泡灌洗液、血細(xì)胞(例如，白細(xì)胞)，組織或活組織才企查樣品(例如，腫瘤活組織;險(xiǎn)查)，或其細(xì)^5包。生物樣品還可以包括組織切片，如出于組織學(xué)目的獲取的冷凍切片。術(shù)語(yǔ)"生物標(biāo)記"包括了寬范圍的胞內(nèi)和胞外情況以及完整生物體生理學(xué)變化。生物標(biāo)記本質(zhì)上可以代表細(xì)胞功能的任何方面，例如，但不限于，信號(hào)分子、轉(zhuǎn)錄因子、代謝產(chǎn)物、基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的生產(chǎn)水平或生產(chǎn)速率以及蛋白質(zhì)的翻譯后修飾。生物標(biāo)記可以包括轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物水平的全基因組分析或蛋白質(zhì)水平的全蛋白組分析和/或修飾。生物標(biāo)記也可以指的是基因或基因產(chǎn)物，與未處理的患病細(xì)胞相比較，其在患病患者的化合物治療過(guò)的患病細(xì)胞中是上調(diào)或下調(diào)的。即，基因或基因產(chǎn)物對(duì)處理過(guò)的細(xì)胞是充分特異性的，其可以任選地與其他基因或基因產(chǎn)物一起用于鑒定、預(yù)測(cè)或檢測(cè)小分子。因此，生物標(biāo)記是患病細(xì)胞中化合物功效特征性的或患病細(xì)胞對(duì)化合物治療應(yīng)答特征性的基因或基因產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)"癌癥"包括，但不限于，實(shí)體肺瘤，如乳房、呼吸道、腦、生殖器官、消化道、尿路、眼睛、肝、皮膚、頭頸、甲狀腺、副甲狀腺的癌癥及其遠(yuǎn)端的轉(zhuǎn)移癌。該術(shù)語(yǔ)還包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。乳癌的實(shí)例包括，但不限于，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌、原位導(dǎo)管癌和原位小葉癌。呼吸道癌的實(shí)例包括，但不限于，小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌以及支氣管腺瘤和胸膜肺母細(xì)胞瘤。腦癌的實(shí)例包括，但不限于，腦干和下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤，小腦和大腦星形細(xì)胞瘤，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、室管膜細(xì)胞瘤以及神經(jīng)外胚層和松果體瘤。男性生殖器官腫瘤包括，但不限于，前列腺和睪丸癌。女性生殖器官腫瘤包括，但不限于，子宮內(nèi)膜、子宮頸、卵巢、陰道和外陰癌，以及子宮肉瘤。消化道肺瘤包括，但不限于，肛門、結(jié)腸、結(jié)直腸、食道、膽嚢、胃、胰腺、直腸、小腸和唾液腺癌。尿路胂瘤包括，但不限于，膀胱、陰莖、腎、腎盂、輸尿管、以及尿道癌。眼癌包括，但不限于，眼內(nèi)黑素瘤和視網(wǎng)膜成神經(jīng)細(xì)胞瘤。肝癌的實(shí)例包括，但不限于，肝細(xì)胞癌(帶有或不帶有纖維板層變體的肝細(xì)胞癌)、膽管癌(肝內(nèi)膽管癌)和混合型肝細(xì)胞膽管癌。皮膚癌包括，但不限于，鱗狀細(xì)胞癌，Kaposi's肉瘤，惡性黑色素瘤，默克爾細(xì)胞皮膚癌和非黑素瘤皮膚癌。頭頸癌包括，但不限于，喉/舌/鼻咽/口咽癌，以及唇和口腔癌。淋巴瘤包括，但不限于，AIDS-相關(guān)淋巴瘤，非霍奇金氏淋巴瘤，表皮T細(xì)胞淋巴瘤，霍奇金氏病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的淋巴瘤。肉瘤包括，但不限于，軟組織肉瘤，骨肉瘤，惡性纖維組織細(xì)胞瘤，'淋巴肉瘤和一黃紋月幾肉瘤。白血病包括，但不限于，急性骨髓性白血病，急性淋巴細(xì)胞性白血病，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，慢性髓細(xì)胞性白血病和毛細(xì)胞白血病。在此所用的術(shù)語(yǔ)"病人"或"患者"包括哺乳動(dòng)物(例如，人和動(dòng)物)。本發(fā)明涉及測(cè)量患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)水平的定量免疫測(cè)定。如在此所用的，將"活化的VEGF途徑"定義為由VEGF蛋白的超表達(dá)或突變的VEGF途徑，并且同樣包括未調(diào)節(jié)的和/或突變刺激的VEGF途徑。與激活的VEGF途徑相關(guān)的腫瘤疾病，以及導(dǎo)致胂瘤疾病的癌前病變的實(shí)例是以下的這些轉(zhuǎn)移性成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、隆突性皮膚纖維肉瘤(DFSP)、慢性骨髓增生性疾病(CMPD)、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、急性髓細(xì)胞性白血病、曱狀腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、腦瘤、肝細(xì)胞癌和惡性血液病。因此，VEGF蛋白的水平，單獨(dú)或結(jié)合其他蛋白質(zhì)(例如，其他癌蛋白)的水平，可以用來(lái)預(yù)測(cè)臨床結(jié)果和/或作為治療選擇中的輔助手段。因此，本發(fā)明公開和要求了免疫測(cè)定用來(lái)定量測(cè)量患者樣品中VEGF水平(例如，循環(huán)VEGF水平)的申請(qǐng)，以便評(píng)估患有癌癥的患者從使用多激酶抑制劑(例如，索拉非尼)的治療中獲益的可能性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在診斷時(shí)(例如，腎細(xì)胞癌)以及隨后的治療后時(shí)間點(diǎn)(例如，第一個(gè)治療周期的第31天，第三個(gè)治療周期的第1天)定量獲取的病人樣品中的VEGF蛋白。這樣的患者樣品可以是，例如，血液、血清、血漿、尿液、唾液、精液、乳汁、腦脊髓液、淚液、痰、粘液、淋巴、胞液、腹水、胸膜積液、羊水、膀胱沖洗液和支氣管肺泡灌洗液，以及其它體液樣品?；颊邩悠房梢允切迈r的或冷凍的，并可以是用肝素、檸檬酸鹽或EDTA處理過(guò)的。而，可以知道除了在此公開的那些，其他方法可以用來(lái)定量患者樣品中的VEGF蛋白。此外，許多檢測(cè)方法可以用來(lái)觀察VEGF蛋白，如發(fā)光標(biāo)記。許多形式適于與本發(fā)明的方法一起使用。例如，可以通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、放射免疫測(cè)定、二元抗體夾心測(cè)定、凝集測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、免疫電子和掃描顯微鏡檢查與其它本領(lǐng)域公知的其他測(cè)定來(lái)進(jìn)行患者樣品中VEGF蛋白的#全測(cè)和定量?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法來(lái)適應(yīng)這些測(cè)定中VEGF蛋白的定量。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以通過(guò)夾心測(cè)定來(lái)檢測(cè)和定量循環(huán)VEGF蛋白水平的連續(xù)變化，其中已經(jīng)使用常規(guī)技術(shù)將捕獲抗體固定于支持物表面上。合適的支持物包括，例如，合成的聚合物支持物，如聚丙烯、聚苯乙烯、取代的聚苯乙烯、聚丙烯酰胺(如聚酰胺和聚氯乙烯)、玻璃珠、瓊脂糖和硝化纖維?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的ELISA夾心免疫測(cè)定的實(shí)例使用了純化的小鼠抗人VEGF單克隆抗體作為捕獲抗體以及生物素化山羊抗人VEGF多克隆抗體作為檢測(cè)抗體。將捕獲單克隆抗體固定于微量滴定板孔上。將稀釋的人血清/血漿取樣或VEGF標(biāo)準(zhǔn)品(例如，重組野生型VEGF蛋白)在孔中培養(yǎng)以使捕獲單克隆抗體結(jié)合VEGF抗原。孔洗滌后，將固定的VEGF抗原暴露于生物素化檢測(cè)抗體，此后再次洗涂孔。然后加入抗生蛋白鏈菌素辣根過(guò)氧化物酶綴合物。在最后洗滌后，將TMB藍(lán)色底物加入到孔中來(lái)沖企測(cè)結(jié)合的過(guò)氧化物酶活性。通過(guò)加入2.5N碌iJ臾來(lái)終止反應(yīng)，同時(shí)在450nm處測(cè)量吸光度。樣品的吸光度值與VEGF標(biāo)準(zhǔn)品的聯(lián)系使得可以測(cè)定以pg/ml計(jì)的血清或血漿中的VEGF的定量值。可以知道其他蛋白質(zhì)(例如，抑制劑、癌蛋白、生長(zhǎng)因子受體、血管生成因子、轉(zhuǎn)移蛋白、肺瘤標(biāo)記、胂瘤抑制劑、與VEGF途徑相關(guān)的蛋白質(zhì))適于結(jié)合VEGF來(lái)檢測(cè)和定量。例如，適于結(jié)合VEGF測(cè)試的其他蛋白質(zhì)包括金屬蛋白酶-1組織抑制劑(TIMP-1)、HER-2/neu、rasp21、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體a、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA)、癌胚抗原(CEA)和p53?？梢允褂帽绢I(lǐng)域^支術(shù)人員已知的測(cè)定來(lái)4企測(cè)這些其它蛋白質(zhì)。例如，用于HER-2/neu和TIMP-1定量的免疫測(cè)定是可購(gòu)得的，如OncogeneScienceTIMP-1ELISA(OncogeneScience,Cambridge,MA(USA))，其可以檢測(cè)人血清或血漿中TIMP-1水平的ng/ml值。監(jiān)控VEGF的預(yù)治療水平可以表示用多激酶抑制劑(例如，索拉非尼)治療后的臨床結(jié)果。一種評(píng)估臨床結(jié)果的方法可以是應(yīng)答率(RR)、完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)、穩(wěn)定疾病(SD)、臨床益處(包括完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)和穩(wěn)定疾病(SD)),進(jìn)展時(shí)間(TTP)、無(wú)進(jìn)展生存(PFS)和總生存率(OS)的評(píng)估。在此的術(shù)語(yǔ)"抗體"以最寬泛的意思來(lái)使用，特別涵蓋單克隆抗體(包括全長(zhǎng)單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗體片段?？梢酝ㄟ^(guò)常規(guī)方法和/或遺傳工程制備根據(jù)本發(fā)明的方法有用的抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明的抗體包括結(jié)合VEGF的那些抗體。"抗體片段"包括全長(zhǎng)抗體的一部分，通常是其抗原結(jié)合或可變區(qū)。抗體片段的實(shí)例包括Fab、Fab'、F(ab'》和Fv片段；雙價(jià)抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；生物特異性抗體；以及從抗體片段形成的多特異性抗體。在此所用的術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"指的是從實(shí)質(zhì)性同源抗體的群體獲得的抗體，即，包含相同群體的單個(gè)抗體，除可能少量存在的天然發(fā)生的突變。單克隆抗體是高度特異性的，即，針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。此外，與通常包括針對(duì)不同抗原決定簇(抗原決定部位)的不同抗體的常規(guī)(多克隆)抗體制劑相反，每個(gè)單克隆體抗體針對(duì)抗原上的單個(gè)決定簇。修飾語(yǔ)"單克隆"表明該抗體的特征為獲自基本上同源的抗體群，而不是解釋為需要通過(guò)任何特定方法來(lái)產(chǎn)生抗體。例如，可以通過(guò)由Kohler等(Nature256:495,1975)首先提出的雜交瘤方法，或通過(guò)重組DNA方法(辨如，美國(guó)專利No.4,816,567)來(lái)制備根據(jù)本發(fā)明所用的單克隆抗體。也可以使用例如Clackson等(Nature352:624-628,1991)和Marks,等(J,Mol.Biol,222:581-597，1991)所述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫(kù)分離單克隆抗體。在此單克隆抗體還包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中的重鏈和/或輕鏈的一部分與得自特定種或?qū)儆谔囟贵w類或亞類的抗體的相應(yīng)序列相同或同源，同時(shí)鏈的剩余部分與得自其它種或?qū)儆诹硪粋€(gè)抗體類或亞類的抗體的相應(yīng)序列相同或同源，以及這樣的抗體的片段，只要它們呈現(xiàn)出所需的生物活性(辨如，美國(guó)專利No.4,816,567;和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855,1984)。非人(如，鼠類)抗體的"人源化"形式是含有得自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。對(duì)于大部分而言，人源化抗體是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中受體的高變區(qū)殘基由來(lái)自非人物種(供體抗體)的具有所需特異性，親和性和容量的高變區(qū)殘基所代替，這些非人物種如小鼠、大鼠、兔子、或非人類的靈長(zhǎng)類動(dòng)物。在一些情況中，人免疫球蛋白框架區(qū)(FR)殘基可以由相應(yīng)的非人殘基所代替。此外，人源化抗體可以包括受體抗體或供體抗體中未發(fā)現(xiàn)的殘基。形成這樣的修飾以進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。通常，人源化抗體可以基本上包括至少一個(gè)或通常兩個(gè)可變域的全部，其中對(duì)應(yīng)于那些非人免疫球蛋白和全部或基本上全部FR的全部或基本上全部高變區(qū)是人免疫球蛋白的那些。人源化抗體還任選包括至少一部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc),通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。對(duì)于綜述，參見Jones等，(Nature321:522-525,1986);Reichmann,等(Nature332:323-329,1988);和Presta,(Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596,1992)。"單鏈Fv"或"sFv"抗體片段包括抗體的VH和Vl結(jié)枸域，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于單個(gè)多肽鏈中。通常，F(xiàn)v多肽進(jìn)一步在VH和Vt結(jié)構(gòu)域之間包括多肽連接物，其使sFv形成抗原結(jié)合所需的結(jié)構(gòu)。對(duì)于綜述,參見Pluckthun(ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies(單克隆抗體的藥理學(xué))，Vol.113,Rosenburg和Moore編輯，Springer誦Verlag,NewYork,pp.269-315，1994)。術(shù)語(yǔ)"雙價(jià)抗體"指的是帶有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小的抗體片段，該片段包括連接相同多肽鏈(Vh-Vl)中的輕鏈可變區(qū)(VL)的重鏈可變區(qū)(Vh)。使用太短的連接物不能在相同鏈的兩個(gè)域之間進(jìn)行配對(duì)，迫使該結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)并形成兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙價(jià)抗體在例如EP404，097;WO93/11161;和Hollinger等(Proc.Natl.Acad.Sd.USA90:6444-6448,1993)中有更全面的描述。表述"線性抗體，，指的是Zapata等(ProteinEng.8(10):1057-1062，1995)中描述的抗體。簡(jiǎn)而言之，這樣的抗體包括一對(duì)串聯(lián)Fd部分(Vh-Ch1-Vh-Ch1),其形成一對(duì)基因結(jié)合區(qū)。線性抗體可以是雙特異性的或單特異性的。根據(jù)本發(fā)明有用的代表性單克隆抗體包括鼠抗人總VEGF單克隆抗體，如設(shè)計(jì)來(lái)測(cè)量人VEGF的OncogeneSciences夾心ELISA試劑盒中找到的那些。根據(jù)本發(fā)明有用的單克隆抗體用來(lái)鑒定不同實(shí)驗(yàn)室預(yù)后測(cè)試中例如臨床樣品中的VEGF蛋白質(zhì)。描述了在此有用的其他分子生物技術(shù)包括抗體制備的綜合性教科書包括Berger和Kimmel(GuidetoMolecularCloningTechniques,MethodsinEnzvmologv,(分子克隆技術(shù)指南，酶學(xué)中的方法)Vol.152,AcademicPress,Inc.);Sambrook等(MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))(笫二版，ColdSpringHarborLaboratoryPress;ColdSpringHarbor,N.Y.;1989)Vol.l誦3);CurrentProtocolsinMolecularBiology(分子生物學(xué)中的通用實(shí)-驗(yàn)方案)(F.M.Ausabel等〔編輯〕,CurrentProtocols,GreenPublishingAssociatesInc.和JohnWiley&Sons,Inc.之間的合營(yíng)，(2000年的增補(bǔ)))；Harlow,等，(MonoclonalAntibodies:ALaboratoryManual(單克隆抗體:實(shí)馬全室手冊(cè))，ColdSpringHarborLaboratoryPress(1988),Paul〔編輯〕；FundamentalImmunologv,(基礎(chǔ)免疫學(xué))(LippincottWilliams&Wilkins(1998));和Harlow等(UsingAntibodies:ALaboratoryManuald吏用抗體實(shí)-驗(yàn)室手冊(cè))，ColdSpringHarborLaboratoryPress(1998))?？梢砸匀魏纬Ｒ?guī)方法來(lái)標(biāo)記根據(jù)本發(fā)明鑒定VEGF蛋白質(zhì)有用的抗體。標(biāo)記實(shí)例是辣根過(guò)氧化物酶，以及抗體標(biāo)記方法的實(shí)例是使用生物素-抗生蛋白鏈菌素復(fù)合物。按照需要，可以以任何方法直接或間接地標(biāo)記本發(fā)明的免疫測(cè)定中用作示蹤劑的抗體，形成可見或使其可見的信號(hào)?？商綔y(cè)標(biāo)記物物質(zhì)包括放射性元素，如311、1251和mI;熒光劑，如異硫氰酸熒光素和其它熒光色素、藻膽蛋白、藻紅蛋白、稀土螯合物、德克薩斯紅、丹酰和玫瑰紅；比色試劑(色原體)；不導(dǎo)電物質(zhì)，如膠體金；生物發(fā)光物；化學(xué)發(fā)光物；染料；酶，如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、a-、卩-半乳糖香酶，及其他的；輔酶；酶底物；酶輔因子；酶抑制劑；酶亞基；金屬離子；自由基；或任何其它提供了檢測(cè)或測(cè)量形成的免疫復(fù)合物的存在或含量的免疫活性或惰性物質(zhì)。酶底物組合的實(shí)例是辣根過(guò)氧化物酶和四曱基聯(lián)苯胺(TMB)，以及堿性磷酸酶和對(duì)硝基苯基磷酸酉旨(pNPP)。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)檢測(cè)和定量系統(tǒng)產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)、生物發(fā)光(BL)或化學(xué)發(fā)光(CL)。在化學(xué)發(fā)光或(CL)生物發(fā)光(BL)測(cè)定中，測(cè)量強(qiáng)度或總的光發(fā)射并且與未知分析物的濃度相關(guān)?？梢允褂霉舛扔?jì)(光電倍增管作為檢測(cè)器)或電荷耦合掐來(lái)定量測(cè)定光，或通過(guò)拍照或X光片來(lái)定性測(cè)量。使用該測(cè)定的主要優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單和分析靈敏度，使得可以檢測(cè)和/或定量非常少量的分析物。示例發(fā)光標(biāo)記是吖啶鏃酯、吖啶鏡磺酰基曱酰胺(acridiniumsulfonylcarboxamide),魯米諾，傘形酮，異氨基苯二酰魯米諾衍生物，發(fā)光蛋白，如水母發(fā)光蛋白和來(lái)自螢火蟲的螢光素酶，海洋細(xì)菌，Vargulla和Renilla。魯米諾可以任選性地與增強(qiáng)分子一起使用，如4-碘苯酚或4-羥基肉桂酸。通常，通過(guò)在堿性條件下使用氧化劑處理來(lái)產(chǎn)生CL信號(hào)。其他發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)是其中信號(hào)(可探測(cè)標(biāo)記)由底物上的酶促反應(yīng)產(chǎn)生的那些。已經(jīng)研發(fā)了CL和BL沖全測(cè)方案，用于測(cè)定4i性;粦酸酶(AP)、葡萄糖氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、辣根過(guò)氧化酶(HRP)和黃。票吟氧^f匕酶標(biāo)記，以及其它的。AP和HRP是兩種酶標(biāo)記，其可以通過(guò)CL和BL反應(yīng)的范圍來(lái)定量。例如，AP可以與底物一起使用，如金剛烷基1,2-二鵬丁烷芳基磷酸酯底物(例如AMPPD或CSPD;Kricka，L丄,"ChemiluminescenceandBioluminescence，Analysisby,"("通過(guò)化學(xué)發(fā)光和生物發(fā)光分析")MolecularBiologyandBiotechnology:AComprehensiveDeskReference(編輯,R.A.Meyers)(VCHPublishers;N.Y.,N.Y.;1995));例如，4-曱氧基-4-(3-磷酸苯基)螺[l,2-二P惡丁烷-3,2，-金剛烷]的二鈉鹽，帶有或不帶有如l-(三辛基轔曱基)-4-(三丁基轔曱基)苯二氯化物的增強(qiáng)分子。HRP可以與底物一起使用,如2，,3，,6，-三氟苯基-曱氧基-10-甲基吖啶滿-9-曱酸酯。CL和BL反應(yīng)不僅適用于酶的分析，而且適用于其他底物、輔因子、抑制劑、金屬離子等。例如，魯米諾、熒火蟲熒光素酶和海洋細(xì)菌熒光素酶反應(yīng)各自是過(guò)氧化物、ATP和NADPH產(chǎn)生或消耗的指示反應(yīng)。它們可以與其它涉及氧化酶、激酶和脫氫酶的反應(yīng)相結(jié)合，并且可以用于測(cè)量耦合反應(yīng)的任何組分(酶、底物、輔因子)?？商綔y(cè)的標(biāo)記可以直接或間接地結(jié)合本發(fā)明的測(cè)定中4吏用的抗體。可探測(cè)標(biāo)記的間接連接的實(shí)例是抗體和標(biāo)記之間的結(jié)合對(duì)的使用或信號(hào)擴(kuò)大系統(tǒng)的使用。用于連接抗體和可探測(cè)標(biāo)記的結(jié)合對(duì)的實(shí)例是生物素/抗生物素蛋白、抗生蛋白鏈菌素、或抗生物素；抗生物素蛋白/抗-抗生物素蛋白；曱狀腺素/曱狀腺素結(jié)合球蛋白；抗原/抗體；抗體/抗-抗體；碳水化合物/凝集素；半抗原/抗半抗原抗體；染料和疏水性分子/疏水蛋白結(jié)合位點(diǎn)；酶抑制劑，輔酶或輔因子/酶；多核酸/同源多核酸序列；熒光素/抗熒光素；二硝基酚/解二硝基酚(anti-dinitrophenol);維生素BU/內(nèi)在因子；可的松、考的松/考的松結(jié)合蛋白；和特異性受體蛋白的配體/膜相連的特異性受體蛋白。各種用于將標(biāo)記直接或間接連接抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，可以共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合標(biāo)記。示例的抗體綴合方法描述于Avarmeas等，Scan.J.Immunol.8(i曾才卜7):7,1978);Bayer等，Meth.Enzymol.62:308,1979;Chandler等，J.Immunol.Meth.53:187,1982;Ekeke和Abuknesha,J.SteroidBiochem.11:1579，1979;Engvall和Perlmann,J.Immunol.109:129,1972;Geoghegan等,Immunol.Comm.7:1,1978;以及Wilson和Nakane，ImmunofluorescenceandRelatedTechniques,Elsevier/NorthHollandBiomedicalPress;Amsterdam(1978)。才艮據(jù)標(biāo)記的性質(zhì)，可以^使用各種4支術(shù)用于^r測(cè)和定量標(biāo)記。對(duì)于熒光劑，大量熒光劑是可用的。對(duì)于化學(xué)發(fā)光物，光度計(jì)或膠巻是可用的。使用酶，可以焚光地、化學(xué)發(fā)光地、分光光度測(cè)量地或在視覺(jué)上確定或測(cè)量熒光的、化學(xué)發(fā)光的、或有色的產(chǎn)物。具有吖啶鏃、苯并吖啶鏡或吖啶滿(acridan)型雜環(huán)系的各種類型的化學(xué)發(fā)光化合物是標(biāo)記的其它實(shí)例。吖啶鏃酯的實(shí)例包括具有雜環(huán)或環(huán)系的那些，這些環(huán)系含有陽(yáng)性氧化態(tài)的雜原子，包括吖啶像、苯并[a]吖啶鏃、苯并[b]吖啶镲、苯并[C]吖啶鏡、苯并咪唑陽(yáng)離子、喹啉條、異喹啉櫞、喹。秦錙、環(huán)狀取代喹啉鏃、菲啶輸和喹喔啉錙這樣的環(huán)系?？梢酝ㄟ^(guò)直接或間接地將吖啶鏡或苯并吖啶鏃酯上的反應(yīng)性功能基團(tuán)連接選擇的抗體來(lái)制備失蹤物，這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的(■#JE，辨如，Weeks等，Clin.Chem.29(8):1474-1479,1983)。化合物的實(shí)例是在芳環(huán)的對(duì)位或間位存在芳基環(huán)離去基團(tuán)和反應(yīng)性功能基團(tuán)的吖啶鏃和苯并吖啶輸酯(W如,美國(guó)專利No.4,745,181和WO94/21823)。如在此所用的，"VEGF途徑定向治療"包括任何耙向VEGF途徑的治療，VEGF途徑包括VEGF蛋白表達(dá)的抑制(例如，反義寡核苷酸)、VEGFR激活必需的膜定位的阻止或VEGFR下游^:應(yīng)物的抑制(例如，Raf絲氨酸/蘇氨酸激酶)。VEGF途徑定向治療包括多激酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑、單克隆抗體和雙芳基脲。激酶抑制劑的實(shí)例是雙芳基脲索拉非尼，它是小分子并且是Raf(蛋白質(zhì)-絲氨酸/蘇氨酸激酶)和VEGFR(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體，受體酪氨酸激酶)的新雙重-作用抑制劑，因此它是腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成的抑制劑(OnyxPharmaceuticals,Richmond,CA和BayerPharmaceuticalsCorporation,WestHaven,CT(USA);Lyons等,Endocrine-RelatedCancer8:219-225，2001)。此外，發(fā)現(xiàn)索拉非尼抑制腫瘤進(jìn)展和新血管生成中涉及的集中其它受體酪氨酸激酶，包括PDGFR國(guó)卩、Flt-3和c-KIT。PD166285(Pfizer,Groton,CT),—種常規(guī)的酪氨酸激酶，可以對(duì)抗PDGF和FGF-2-介導(dǎo)的應(yīng)答(Bansai等，丄NeuroscienceRes.74(4):486-493,2003)。其它耙向VEGF途徑的示例治療包括Sutent/SU11248,PTK787,MLN518,PKC-412,CDP860和XL9999。Sutent/SU11248(舒尼替尼蘋果酸鹽；巧|哚啉-2-酮)(Pfizer,Groton，CT),粑向受體酪氨酸激酶(RTK)，包括PDGFR,具有抗血管生成和抗胂瘤效果。PDGFR通過(guò)調(diào)節(jié)周細(xì)胞(支持血管的細(xì)胞)的增殖和遷移在培養(yǎng)血管生成中起著重要的作用，認(rèn)為Sutent/SU11248能抑制PDGFR的血管生成作用。PTK787(Novartis,Basel,Switzerland和ScheringAG,Berlin,Germany)是抗PDGFR以及抗VEGFR和c-Kit酪氨酸激酶受體的口服小分子才元血管生成劑(anilinophthalazine)(夢(mèng)/;^7,Garcia-Echevera和Fabbro,MiniReviewsinMedicinalChemistry4(3》273-283,2004)。MLN518(之前稱為CT53518;MilleniumPharmaceuticals,Cambridge,MA)是設(shè)計(jì)來(lái)抑制包括PDGFR、FLT3、和c-Kit的III型受體酪氨酸激酶(RTK)的口服小分子。PKC-412[米哚妥林；N-苯曱酰-十字孢堿(十字孢堿的衍生物，鏈霉菌屬細(xì)菌的產(chǎn)物)；Novartis,Basel,Switzerland]抑制PDGFR，VEGFR和多蛋白激酶Cs,"whichmakesitespeciallyattractiveinpatientswithwild-typeKITwithmutationsinPDGFR"("什么使得它在帶有PDGFR突變的野生型KIT的患者中特別有吸引力")(PKC412-AnInterviewwithCharlesBlanke,MD,FACP(www.gistsupport.org/pkc412.html);Reichardt等，J.Clin.Oncol.23(16S):3016,2005)。XL999(來(lái)自Exelixis(SouthSanFrancisco,CA，USA)的幾種光譜選擇性激酶抑制劑(SpectrumSelectiveKinaseInhibitorsTM(SSKI))之一)4中制VEGFR,以及其它RTK,如PDGFR隱卩、FGFR1和FLT3。實(shí)施例在此所述的結(jié)構(gòu)、材料、組合物和方法是本發(fā)明的代表性實(shí)施例，并且理解本發(fā)明的范圍并不為實(shí)施例的范圍所限定。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知道可以根據(jù)公開的結(jié)構(gòu)、材料、組合物和方法以各種變化來(lái)實(shí)踐本發(fā)明，并且將這些變化視為在本發(fā)明的范圍內(nèi)。,滋W/.^于入j&清和j&,7fps銀務(wù)W萄一《關(guān)心凝#諒定用于通過(guò)VEGFELISA分析的合適樣品包括用肝素、檸檬酸鹽或EDTA處理的人血漿。由于可能的干擾因子，在人血清和血漿的制備和測(cè)定中需要特別的小心。在稀釋之前應(yīng)當(dāng)通過(guò)微量離心從樣品中除去任何的絮凝劑物質(zhì)。待檢查的血清或血漿樣品的初始濃度應(yīng)該是12-13%(樣品在樣品稀釋液中為1:8的稀釋度)。例如，40)il的樣品稀釋于280^1的樣品稀釋劑中，并將100pl加入微量培養(yǎng)板孔中?？v才法以下ELISA實(shí)-驗(yàn)方案是用于夾心ELISA(OncogeneScience,Cambridge,MA)來(lái)測(cè)量人血漿和血清中的人VEGF。1、制備平板洗滌的工作溶液(IX)(作為測(cè)定試劑盒的一部分來(lái)提供)。2、對(duì)于每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)使用干凈的移液管尖吸移100至適當(dāng)?shù)目字衼?lái)加入預(yù)先稀釋的樣品和對(duì)照，以及六個(gè)VEGF標(biāo)準(zhǔn)品(0至8000pg/mL)中的每一個(gè)，重復(fù)兩份。將標(biāo)準(zhǔn)品O加入另一個(gè)孔中以用作底物空白的測(cè)定。3、用干凈的塑料包裝或封膜機(jī)蓋住孔。在37°C培養(yǎng)微量滴定板1.5小時(shí)。4、小心的移除塑料包裝或封膜。使用300pL/孔洗滌孔，平板洗滌緩沖液六次循環(huán)(洗滌三個(gè)循環(huán)，將平板翻轉(zhuǎn)180°,再洗滌另三個(gè)循環(huán))。5、將100檢測(cè)抗體吸移至所有孔中，除了底物空白孔，其是留下空的。用新的塑料包裝片蓋住孔。在37。C培養(yǎng)微量滴定板1小時(shí)。6、通過(guò)將適當(dāng)體積的綴合濃縮物(1:50的稀釋度)稀釋至綴合物稀釋劑中來(lái)制備工作綴合物。7、如步驟4所述清洗孔。立即進(jìn)行步驟8。8、將100工作綴合物吸移至所有孔，除了底物空白孔，其是留下空的。用新的塑料包裝蓋住孔。在室溫(20-27°C)培養(yǎng)微量滴定板1小時(shí)。9、通過(guò)混合等份的溶液A和溶液B來(lái)制備工作底物。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的6mL溶液將提供12mL工作底物，足以產(chǎn)生一個(gè)微量滴定板。根據(jù)所用條帶的數(shù)量來(lái)調(diào)節(jié)工作底物的體積。混合孔。10、將工作底物分配至干凈的試劑槽中，并讓其達(dá)到室溫。11、如步驟5所述清洗孔。注意不要讓平板變干。立即進(jìn)行步驟12。12、將100pL工作底物吸移至所有的孔中，并用塑料包裝或封膜蓋住孔。在室溫(20-27。C)培養(yǎng)微量滴定板45分鐘。13、將100^L終止溶液吸移至所有孔中。14、使用分光光度平板讀數(shù)器在650nm的波長(zhǎng)測(cè)量每個(gè)孔中的吸光度。應(yīng)當(dāng)在加入終止溶液后的30分鐘內(nèi)對(duì)孔進(jìn)行讀數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)使用0、150、1000、3000、5000和8000pg/ml6個(gè)不同濃度的VEGF標(biāo)準(zhǔn)品(重組人VEGF)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)進(jìn)行定量分析。人血清和血漿樣品在用索拉非尼治療前，從證實(shí)腎細(xì)胞癌的患者獲得冷凍血漿樣品。,滋辨2^々緊勿應(yīng);#,悉,^^,依照制造商的指導(dǎo)使用VEGFELISA(R&DSystems,Minneapolis,MN)將一式兩份的樣品用來(lái)測(cè)量VEGF水平。對(duì)于每個(gè)患者，測(cè)定一式兩份的測(cè)量值的平均值。對(duì)于使用索拉非尼治療的患者組和使用安慰劑治療的患者組，表1中給出了三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的VEGF的平均水平，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)是基線(預(yù)治療)，第1個(gè)周期笫21天和第3個(gè)周期第1天。圖1中顯示了相同的數(shù)據(jù)。結(jié)果表明索拉非尼治療的患者組在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)具有從基線顯著降低的VEGF水平(使用配對(duì)t檢驗(yàn)，p<<0.01),但是這在安慰劑治療的患者組中沒(méi)有發(fā)生(p>0.05)。表1:VEGF<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>為了說(shuō)明和描述的目的，已經(jīng)呈現(xiàn)了本發(fā)明之前描述的實(shí)施方案。但是這不意味著是窮舉或限制所公開的精確形式，同時(shí)根據(jù)以上的教導(dǎo)顯然可有很多改進(jìn)和變化。為了解釋本發(fā)明的原理，選擇和描述了實(shí)施方案，并且它的實(shí)踐因此能夠使本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不同的實(shí)施方案中以不同的改進(jìn)來(lái)利用本發(fā)明，以此適于所考慮的特定用途。將在此引用的所有參考文獻(xiàn)引入作為參考。權(quán)利要求1.監(jiān)控患者體內(nèi)與VEGF途徑相關(guān)病況和/或監(jiān)控患有所述疾病的患者如何應(yīng)答治療的方法，所述方法包括在免疫上檢測(cè)并定量隨著時(shí)間抽取的患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)水平的連續(xù)改變，其中VEGF蛋白質(zhì)隨時(shí)間的遞增水平表明疾病進(jìn)展或?qū)λ鲋委煹呢?fù)面應(yīng)答，并且其中VEGF蛋白隨時(shí)間的遞減水平表明疾病減輕或?qū)λ鲋委煹恼鎽?yīng)答。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療選自多激酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制、單克隆抗體和雙芳基脲。3.權(quán)利要求l的方法，其中所述治療是VEGF途徑定向治療。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述VEGF途徑定向治療是酪氨酸激酶抑制劑甲磺酸伊馬替尼或雙芳基脲索拉非尼。5.權(quán)利要求l的方法，其中所述疾病是胂瘤發(fā)生前/腫瘤疾病。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述腫瘤發(fā)生前/腫瘤疾病選自轉(zhuǎn)移性成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、隆突性皮膚纖維肉瘤、胃腸間質(zhì)胂瘤、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、慢性骨髓增生性疾病、急性骨髓性白血病、曱狀腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、腦瘤、肝細(xì)胞癌、惡性血液病和導(dǎo)致上述癌癥的初期癌。7.權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步是所述疾病的預(yù)后，其中患者樣品中的所述VEGF蛋白水平表示所述患者更好或更差的預(yù)后。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述預(yù)后是選自應(yīng)答率(RR)、完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)、穩(wěn)定疾病(SD)、進(jìn)展時(shí)間(TTP)、無(wú)進(jìn)展生存(PFS)、總生存率(OS)和臨床益處的臨床結(jié)果，臨床益處包括完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)和穩(wěn)定疾病(SD)。9.權(quán)利要求7的方法，其中VEGF的遞增水平表示早期復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移瘤的更好的可能性。10.權(quán)利要求l的方法，其中所述患者樣品是預(yù)治療樣品。11.權(quán)利要求1的方法，其中所述的患者樣品選自血液、血清、血漿、尿液、唾液、精液、乳汁、腦脊髓液、淚液、痰、粘液、'淋巴、胞液、腹水、胸膜積液、羊水、膀胱沖洗液和支氣管肺泡灌洗液。12.權(quán)利要求l的方法，其中所述患者樣品是血清或血漿。13.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫檢測(cè)和定量是通過(guò)夾心ELISA或等價(jià)測(cè)定形式的免疫測(cè)定來(lái)實(shí)現(xiàn)的。14.權(quán)利要求13的方法，其中夾心ELISA或等價(jià)測(cè)定包括使用一種或多種選擇性結(jié)合VEGF蛋白的單克隆體抗體。15.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括使用免疫測(cè)定來(lái)檢測(cè)或檢測(cè)并定量患者樣品中的一種或多種其他蛋白質(zhì)的水平。16.權(quán)利要求14的方法，其中所述的其他蛋白是選自抑制劑、癌蛋白、生長(zhǎng)因子受體、血管生成因子、轉(zhuǎn)移蛋白、腫瘤標(biāo)記和腫瘤抑制劑的一種或多種。17.權(quán)利要求15的方法，其中所述抑制劑是金屬蛋白酶-1(TIMP-1)的組織抑制劑，所述癌蛋白選自HER-2/neu和rasp21,所述生長(zhǎng)因子受體選自表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體a(PDGFR-a),所述血管生成因子是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，所述轉(zhuǎn)移蛋白是尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA),所述腫瘤標(biāo)記是癌胚抗原(CEA),以及所述胂瘤抑制劑是p53。18.患病的人患者的治療選擇的方法，所述方法包括(a)免疫檢測(cè)和定量取自對(duì)照群體個(gè)體的對(duì)照樣品中VEGF蛋白質(zhì)的平均水平；(b)免疫檢測(cè)和定量隨時(shí)間取自患者的相等患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)水平的連續(xù)變化；(c)比較患者樣品中VEGF蛋白的水平和對(duì)照樣品中VEGF蛋白的平均水平；和(d)根據(jù)患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)水平和對(duì)照樣品中VEGF蛋白的平均水平之間的差異，并且考慮到患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)水平的連續(xù)變化，決定是否使用常規(guī)治療和/或VEGF途徑定向治療來(lái)治療患者。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述患者樣品是預(yù)治療樣品。20.權(quán)利要求18的方法，其進(jìn)一步是所述疾病的預(yù)后，其中患者樣品中的所述VEGF蛋白水平表示所述患者更好或更差的預(yù)后。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述預(yù)后是選自應(yīng)答率(RR)、完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)、穩(wěn)定疾病(SD)、進(jìn)展時(shí)間(TTP)、無(wú)進(jìn)展生存(PFS)、總生存率(OS)和臨床益處的臨床結(jié)果，臨床益處包括完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)和穩(wěn)定疾病(SD)。22.權(quán)利要求18的方法，其中所述疾病是胂瘤發(fā)生前/腫瘤疾病。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述胂瘤發(fā)生前/胂瘤疾病選自轉(zhuǎn)移性成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、隆突性皮膚纖維肉瘤、胃腸間質(zhì)腫瘤、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、慢性骨髓增生性疾病、急性骨髓性白血病、甲狀腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、卯巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、腦瘤、肝細(xì)胞癌、惡性血液病和導(dǎo)致上述癌癥的初期癌。24.權(quán)利要求18的方法，其中患者樣品是來(lái)自對(duì)治療無(wú)應(yīng)答的癌癥患者。25.權(quán)利要求18的方法，進(jìn)一步包括使用免疫測(cè)定來(lái)檢測(cè)或檢測(cè)并定量患者樣品中一種或多種其他蛋白質(zhì)的水平。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述的其他蛋白是選自抑制劑、癌蛋白、生長(zhǎng)因子受體、血管生成因子、轉(zhuǎn)移蛋白、肺瘤標(biāo)記和腫瘤抑制劑的一種或多種。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述抑制劑是金屬蛋白酶-1(TIMP-1)的組織抑制劑,所述癌蛋白選自包含HER國(guó)2/neu和msp21,所述生長(zhǎng)因子受體選自表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體a(PDGFR-a),所述血管生成因子是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF),所述轉(zhuǎn)移蛋白是尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA),所述腫瘤標(biāo)記是癌胚抗原(CEA),以及所述腫瘤抑制劑是p53。28.檢測(cè)患者與VEGF相關(guān)疾病的診斷方法，所述方法包括(a)免疫檢測(cè)和定量取自對(duì)照群體個(gè)體的對(duì)照樣品中VEGF蛋白質(zhì)的平均水平；(b)免疫檢測(cè)和定量隨時(shí)間取自患者的患者樣品中VEGF蛋白質(zhì)水平的連續(xù)變化；(c)比較患者樣品中VEGF蛋白水平和對(duì)照樣品中VEGF蛋白的平均水平；其中患者樣品中VEGF蛋白水平超過(guò)對(duì)照樣品中VEGF蛋白的平均水平表示患者體內(nèi)激活的VEGF途徑和疾病的存在。29.權(quán)利要求28的方法，其中步驟(a)和(b)所述的免疫檢測(cè)和定量是通過(guò)夾心ELISA或等價(jià)測(cè)定形式的免疫測(cè)定來(lái)實(shí)現(xiàn)的。30.權(quán)利要求28的方法，其進(jìn)一步是所述疾病的預(yù)后，其中患者樣品中的所述VEGF蛋白水平表示所述患者更好或更差的預(yù)后。31.權(quán)利要求30的方法，其中所述預(yù)后是選自應(yīng)答率(RR)、完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)、穩(wěn)定疾病(SD)、進(jìn)展時(shí)間(TTP)、無(wú)進(jìn)展生存(PFS)、總生存率(OS)和臨床益處的臨床結(jié)果，臨床益處包括完全應(yīng)答(CR)、部分應(yīng)答(PR)和穩(wěn)定疾病(SD)。32.權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病是腫瘤發(fā)生前/腫瘤疾病。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述胂瘤發(fā)生前/腫瘤疾病選自轉(zhuǎn)移性成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、隆突性皮膚纖維肉瘤、胃腸間質(zhì)腫瘤、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、慢性骨髓增生性疾病、急性骨髓性白血病、曱狀腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、卯巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、腦瘤、肝細(xì)胞癌、惡性血液病和導(dǎo)致上述癌癥的初期癌。34.權(quán)利要求28的方法，進(jìn)一步包括使用免疫測(cè)定來(lái)檢測(cè)或檢測(cè)并定量患者樣品中一種或多種其他蛋白質(zhì)的水平。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述的其他蛋白是選自抑制劑、癌蛋白、生長(zhǎng)因子受體、血管生成因子、轉(zhuǎn)移蛋白、腫瘤標(biāo)記和胂瘤抑制劑的一種或多種。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述抑制劑是金屬蛋白酶-1(TIMP-1)組織抑制劑，所述癌蛋白選自包含HER-2/neu和rasp21,所述生長(zhǎng)因子受體選自表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體a(PDGFR-a),所述血管生成因子是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF),所述轉(zhuǎn)移蛋白是尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA)，所述腫瘤標(biāo)記是癌胚抗原(CEA),以及所述腫瘤抑制劑是p53。全文摘要本發(fā)明涉及生物標(biāo)記和生物標(biāo)記用于癌癥的預(yù)測(cè)和預(yù)后的用途，以及生物標(biāo)記用于監(jiān)控癌癥治療效果的用途。特別地，本發(fā)明涉及VEGF作為多激酶抑制劑的生物標(biāo)記的用途。文檔編號(hào)G01N33/574GK101351709SQ200680050030公開日2009年1月21日申請(qǐng)日期2006年11月1日優(yōu)先權(quán)日2005年11月2日發(fā)明者D·比格伍德,J·J·埃爾廷,P·J·哈默,W·P·卡尼申請(qǐng)人:拜爾健康護(hù)理有限責(zé)任公司