專利名稱：乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于臨床血液免疫檢測方法技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法。
背景技術(shù)：
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一種世界性的傳染病，我國是高流行區(qū)，全國人群感染率為60％左右。據(jù)我國疾病檢測點傳染病發(fā)病率推算全國每年肝炎發(fā)病人數(shù)達到269萬例，其中15-40歲病人占63.1％。據(jù)統(tǒng)計，我國現(xiàn)患肝炎的病人數(shù)約3000萬人，其中60％以上為慢性乙肝患者。乙肝五項是目前最常用的HBV感染指標。五項的檢測有助于乙肝病毒感染的早期發(fā)現(xiàn)、監(jiān)視病情發(fā)展、治療效果監(jiān)測。目前臨床實驗室檢測的方法，仍多是自60年代發(fā)展起來的放射免疫分析法和80年代興起的酶聯(lián)免疫分析法。但由于放免法必須使用放射性標記物，檢測設(shè)備復(fù)雜，必需用專門的放射性探測器對檢測結(jié)果進行測定，對操作人員也存在有放射性污染與傷害。同時，常用的碘-125、碘-131和磷-32等半衰期短的核素，其保存時期不長，也給臨床使用帶來了不便。而酶免法雖然避免了放免法的污染、煩瑣、保存期短等問題，但由于其檢測范圍窄、靈敏度低等缺點仍不能滿足臨床的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種精密度高、靈敏度高和穩(wěn)定性強，以及能有更好的特異性和準確性的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)上述目的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，是通過乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒表面抗原，通過乙型肝炎病毒表面抗體(抗-HBs)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒表面抗體，通過乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒e抗原，通過乙型肝炎病毒e抗體(抗-HBe)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒e抗體，通過乙型肝炎病毒核心抗體(抗-HBc)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒核心抗體。
乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒表面抗原抗體的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒特異性表面抗原標準品、酶標記乙肝病毒表面抗原抗體、發(fā)光底物構(gòu)成，乙型肝炎病毒表面抗體(抗-MBs)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒表面抗體系列標準品、酶標記乙肝病毒表面抗原、發(fā)光底物構(gòu)成，乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒e抗原(HBeAg)抗體的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒特異性e抗原系列標準品、酶標記乙肝病毒e抗原抗體、發(fā)光底物構(gòu)成，乙型肝炎病毒e抗體(抗-HBe)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒e抗原(HBeAg)的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒表面抗體系列標準品、酶標記乙肝病毒e抗原、發(fā)光底物構(gòu)成，乙型肝炎病毒核心抗體(抗-HBc)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒核心抗體系列標準品、酶標記乙肝病毒核心抗體、發(fā)光底物構(gòu)成。
免疫反應(yīng)滴定微孔板包被抗表面抗原單克隆抗體或多克隆抗體，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒表面抗原純品或人血清中乙肝病毒表面抗原，并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記HBsAg單克隆抗體或多克隆抗體，辣根過氧化物酶標記HBsAg抗體的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
免疫反應(yīng)滴定微孔板包被有基因工程合成乙肝病毒表面抗原，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒表面抗體純品或人血清中乙肝病毒表面抗體并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記基因合成乙肝病毒表面抗原，辣根過氧化物酶標記HBsAg的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
免疫反應(yīng)滴定微孔板包被有抗e抗原單克隆抗體或抗e抗原多單克隆抗體，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒e抗原純品或人血清中乙肝病毒e抗原并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記HBeAg單克隆抗體或多克隆抗體，辣根過氧化物酶標記HBeAg抗體的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
免疫反應(yīng)滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒e抗原時，先過量包被單克隆抗體，再包被e抗原，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒e抗體純品或人血清中乙肝病毒e抗體并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒e抗原單克隆抗體，辣根過氧化物酶標記抗-HBe的工作濃度為1∶3000以上，酶標記物中加入鼠抗，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
免疫反應(yīng)滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒核心抗原，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒核心抗體純品或人血清中乙肝病毒核心抗體并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記基因合成乙肝病毒核心抗體，辣根過氧化物酶標記抗-HBc的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
包被板制作在包被緩沖液中加入單抗制成工作液，滴入免疫反應(yīng)滴定微孔板的孔中包被，然后甩去液體，用洗液洗滌，用封閉液封閉。
其中包被緩沖液選用碳酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液或PBS緩沖液。
碳酸鹽緩沖液由Na2CO31.59g、NaHCO32.94g、H2O1000ml組成，PH9.6。
Tris-HCl緩沖液由Tris6.06g、NaCl8.2g、蒸餾水1000ml組成，PH7.4。
PBS緩沖液由Na2HPO42.9g、KH2PO40.2g、NaCl8.0 g、KCl0.2g、蒸餾水1000ml組成，PH7.4封閉液選用PBS-BSA緩沖液。
PBS-BSA緩沖液由Na2HPO42.9g、KH2PO40.2g、NaCl8.0g、KCl0.2g、蔗糖25.0g、BSA10.0g、蒸餾水1000ml組成，PH7.4抗體標記取辣根過氧化物酶溶于去離子水，加入過碘酸鈉溶液活化，加入乙二醇反應(yīng)，將反應(yīng)混合物裝入透析袋，用醋酸緩沖液透析，加入待標記物混勻，碳酸緩沖液調(diào)PH至堿性，加入NaHB4溶液反應(yīng)后，裝入透析袋，用磷酸鹽緩沖液透析，分裝后加入蛋白保護劑，-20℃保存。
標準品的配制用分析緩沖液將高值陽性血清(基因合成抗原)做倍比稀釋，以國家標準品(購自中國生物制品檢定所)為標準進行標定。分裝2-8℃保存?zhèn)溆?，標準品設(shè)置5-10個。
分析緩沖液由0.05M磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、0.01M氯化鈉的3％牛血清白蛋白(BSA)組成，PH為7.2。
發(fā)光底物系統(tǒng)HRP-魯米諾發(fā)光體系A(chǔ)液0.15mM高效發(fā)光劑；0.59 mM羥基香豆素；0.35mM沒食子酸；pH7.4，0.2MTris-Hcl緩沖液。
B液0.85mM氨基酸氧化酶；0.8％吐溫-20(V/V)；0.5mM金屬離子絡(luò)合劑(DTPA)；0.12mM維生素C；pH6.5，0.2M乙酸-乙酸鹽緩沖液。
本發(fā)明是針對臨床實驗室，為其提供一種既可手工操作，又可適用于某些標準全自動檢測儀器的檢測手段，本發(fā)明采用的化學(xué)發(fā)光免疫分析法，是利用辣根過氧化物酶催化發(fā)光底物，則發(fā)光底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并釋放大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)中間體，當其回到穩(wěn)定的基態(tài)時，可同時發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號檢測儀器即可測量光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣品中的待測物質(zhì)的量成正比。因此，可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質(zhì)的含量。其中，表面抗原的最小檢出量為0.1ng/ml；標準曲線范圍為0-200ng/ml，檢測范圍大，精密度高，變異＜10％，在檢測實驗中具有很好的重復(fù)性，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。表面抗體的最小檢出量為2mIU/ml；標準曲線范圍為0-1000mIU/ml，檢測范圍大，精密度高，變異＜10％，在檢測實驗中具有很好的重復(fù)性，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。e抗原的最小檢出量為0.05NCU/ml；標準曲線范圍為0-10NCU/ml，檢測范圍大，精密度高，變異＜10％，在檢測實驗中具有很好的重復(fù)性，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。e抗體的最小檢出量為0.5NCU/ml；標準曲線范圍為0-30 NCU/ml，檢測范圍大，精密度高，變異＜10％，在檢測實驗中具有很好的重復(fù)性，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。核心抗體的最小檢出量為0.05NCU/ml；標準曲線范圍為0-8NCU/ml，檢測范圍大，精密度高，變異＜10％，在檢測實驗中具有很好的重復(fù)性，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。
本發(fā)明對人血清中的乙肝病毒標示物進行測定，只需取少量樣品即可進行，對被檢測者沒有任何傷害，測定所用時間較短，測定一般僅需一個多小時即可完成，方便快捷。本發(fā)明避免了放射免疫法的放射性污染、有效期短、操作復(fù)雜等缺點，為臨床提供了一種檢測乙肝病毒的更準確、方便、快捷的方法，能夠更好地滿足臨床的需要。


圖1是實施例表面抗原的標準曲線；圖2是實施例表面抗體的標準曲線；圖3是實施例e抗原的標準曲線；圖4是實施例e抗體的標準曲線；圖5是實施例核心抗體的標準曲線。
具體實施例方式
實施例，(一)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量檢測試劑盒的制備1、包被板制作采用PH9.6 0.05M碳酸鹽(CB)緩沖液作為包被緩沖液，加入表面抗原4ug/ml，按照100ul/孔進行包被，37度3小時后4℃過夜，然后甩去液體，用洗液洗滌，采用1％牛血清白蛋白-磷酸鹽(BSA-PBS)-2.5％蔗糖(0.01 M，PH＝7.2)作為封閉液，4℃封閉過夜方式進行封閉。
2、抗體標記1)取辣根過氧化物酶12mg溶于3ml新鮮配制的去離子水中。
2)按51ul/1mg酶加入0.1mol/L的過碘酸鈉溶液，混勻，4℃60分鐘活化。
3)按26ul/1mg酶加入乙二醇，充分混勻，4℃反應(yīng)30分鐘，終止反應(yīng)。
4)按上述反應(yīng)混合物裝入透析袋，對1mmol/L醋酸緩沖液透析，4℃過夜，換透析液2-3次。
5)按1.5mg待標記物/1mg酶加入待標記的HBsAg單克隆抗體或多克隆抗體，充分混勻，用PH9.6的0.2mol/L碳酸緩沖液調(diào)PH至9.3±0.1。
6)按47ul/1mg酶加入0.106M(4mg/nl)NaHB4溶液，混勻，4℃反應(yīng)2小時。
7)裝入透析袋，用0.067mol/L PH7.0磷酸鹽緩沖液中4℃條件下透析過夜，其間換液3-4次。
8)取出，測體積，暫存4℃，質(zhì)檢后分裝，加入蛋白保護劑(BB2)，-20℃保存。
3、標準品的配制選用3％分析緩沖液，將高值陽性血清做倍比稀釋，以國家標準品(購自中國生物制品檢定所)為標準進行標定。分裝成0.5ml/瓶，2-8℃保存?zhèn)溆谩?br> 表面抗原標準品設(shè)置為0ng/ml、0.2ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、60ng/ml、200ng/ml。
分析緩沖液由0.05M磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、0.01M的氯化鈉的3％牛血清白蛋白(BSA)組成，PH7.4。
(二)、乙型肝炎病毒表面抗體(抗-HBs)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒的制備制備方法同表面抗原定量檢測試劑盒。表面抗體標準品設(shè)置為0mIU/ml、5mIU/ml、40mIU/ml、250mIU/ml、600mIU/ml、1000mIU/ml。
(三)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒的制備制備方法同表面抗原定量檢測試劑盒。e抗原標準品設(shè)置為0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1NCU/ml、4NCU/ml、10NCU/ml。
(四)、乙型肝炎病毒e抗體(抗-HBe)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒的制備制備方法同表面抗原定量檢測試劑盒。e抗體標準品設(shè)置為0NCU/ml、1NCU/ml、3NCU/ml、8NCU/ml、15NCU/ml、30NCU/ml。
(五)、乙型肝炎病毒核心抗體(抗-HBc)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒的制備制備方法同表面抗原定量檢測試劑盒。核心抗體標準品設(shè)置為0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1.5NCU/ml、4NCU/ml、8NCU/ml。
(六)、本發(fā)明中檢測試劑盒的使用操作程序如下實驗前準備1、選擇低、中、高3個血清標本。將所有檢測試劑及血清標本恢復(fù)至室溫18-25℃(約需30分鐘)。
2、將恒溫箱或水浴鍋調(diào)至反應(yīng)溫度。
3、將發(fā)光底物A、B液等比例混合至本次實驗所需體積(每孔需100μl，可按照每條包被板8孔需混合后的發(fā)光底物1ml混合，依次推類)。
實驗操作步驟1、將所需用量的包被板條放置在支架上；2、在包被孔中分別加入50μl標準品、血清樣品。
3、每孔再分別加入酶標記抗體溶液50μl。微量震蕩器上振蕩1分鐘混合均勻。
4、置37℃溫浴60分鐘。
5、用洗板機以洗液洗6次，然后在吸水紙上拍干。
6、每孔加入混合后的發(fā)光底物50μl，室溫(18-25℃)反應(yīng)5分鐘。
7、化學(xué)發(fā)光檢測儀器測發(fā)光強度值。
以標準品濃度值的對數(shù)值為橫坐標(X軸)，以標準品發(fā)光強度值的對數(shù)值為縱坐標(Y軸)，建立標準曲線，進行計算。
圖1是表面抗原的標準曲線，表面抗原標準品設(shè)置為0ng/ml、0.2ng/ml、lng/ml、10ng/ml、60ng/ml、200ng/ml，標準品按照每孔50μl加入包被板，加入樣本50μl，然后每孔加入酶標記抗體溶液50μl，震蕩1分鐘，貼封膜，放入溫箱溫育。底物在溫育開始后混合，等體積混合A、B，按每孔需50μl。溫育1小時后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上機檢測。檢測結(jié)果如下表

由此可以看出，表面抗原的最小檢出量為0.1ng/ml；標準曲線范圍為0-200ng/ml，檢測范圍大，精密度高，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。
圖2是表面抗體標準曲線，表面抗體標準品設(shè)置為0mIU/ml、5mIU/ml、40mIU/ml、250mIU/ml、600mIU/ml、1000mIU/ml。標準品按照每孔50μl加入包被板，加入樣本50μl，然后每孔加入酶標記抗體溶液50μl，震蕩1分鐘，貼封膜，放入溫箱溫育。底物在溫育開始后混合，等體積混合A、B，按每孔需50μl。溫育1小時后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上機檢測。檢測結(jié)果如下表

由此可以看出，表面抗體的最小檢出量為2mIU/ml；標準曲線范圍為0-1000mIU/ml，檢測范圍大，精密度高，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。
圖3是e抗原標準曲線，e抗原標準品設(shè)置為0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1NCU/ml、4NCU/ml、10NCU/ml。標準品按照每孔50μl加入包被板，加入樣本50μl，然后每孔加入酶標記抗體溶液50μl，震蕩1分鐘，貼封膜，放入溫箱溫育。底物在溫育開始后混合，等體積混合A、B，按每孔需50μl。溫育1小時后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上機檢測。檢測結(jié)果如下表

由此可以看出，e抗原的最小檢出量為0.05NCU/ml；標準曲線范圍為0-10NCU/ml，檢測范圍大，精密度高，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。
圖4是e抗體標準曲線，e抗體標準品設(shè)置為0NCU/ml、1NCU/ml、3NCU/ml、8NCU/ml、15NCU/ml、30NCU/ml。標準品按照每孔50μl加入包被板，加入樣本50μl，然后每孔加入酶標記抗體溶液50μl，震蕩1分鐘，貼封膜，放入溫箱溫育。底物在溫育開始后混合，等體積混合A、B，按每孔需50μl。溫育1小時后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上機檢測。檢測結(jié)果如下表

由此可以看出，e抗體的最小檢出量為0.5NCU/ml；標準曲線范圍為0-30NCU/ml，檢測范圍大，精密度高，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。
圖5是核心抗體標準曲線，核心抗體標準品設(shè)置為0NCU/ml、0.1NCU/ml、0.3NCU/ml、1.5NCU/ml、4NCU/ml、8NCU/ml。標準品按照每孔50μl加入包被板，加入樣本50μl，然后每孔加入酶標記抗體溶液50μl，震蕩1分鐘，貼封膜，放入溫箱溫育。底物在溫育開始后混合，等體積混合A、B，按每孔需50μl。溫育1小時后洗板5次，每孔加入混合后的底物50μl，上機檢測。檢測結(jié)果如下表

由此可以看出，核心抗體的最小檢出量為0.05NCU/ml；標準曲線范圍為0-8NCU/ml，檢測范圍大，精密度高，準確性高，本發(fā)明試劑盒可以準確回算國家標準品。
本發(fā)明臨床結(jié)果和酶免臨床結(jié)果比較本發(fā)明對臨床上所使用的試劑對照陰陽性，總共對照臨床血清3607份(男性2001人，女性1606人)表面抗原測定結(jié)果分析

如上表，表面抗原有28份不符合樣本的經(jīng)臨床病歷分析，有23份與本發(fā)明結(jié)果一致。其中2份是由于酶免靈敏度低漏檢所致。
表面抗體測定結(jié)果分析

如上表，表面抗體有135份不符合樣本的經(jīng)臨床病歷分析，有130份與本發(fā)明結(jié)果一致，其中27份是由于酶免靈敏度低漏檢所致。
e抗原測定結(jié)果分析

如上表，e抗原有45份不符合樣本的經(jīng)臨床病歷分析，有40份與本發(fā)明結(jié)果一致，其中5份是由于酶免靈敏度低漏檢所致。
e抗體測定結(jié)果分析

如上表，e抗體有100份不符合樣本的經(jīng)臨床病歷分析，有82份與本發(fā)明結(jié)果一致，其中45份是由于酶免靈敏度低漏檢所致。
核心抗體測定結(jié)果分析

如上表，核心抗體有96份不符合樣本的經(jīng)臨床病歷分析，有79份與本發(fā)明結(jié)果一致，其中31份是由于酶免靈敏度低漏檢所致。
通過以上對照，可以明確顯示出本發(fā)明靈敏度高、特異性好，定量準確，與臨床高度符合，而且沒有產(chǎn)生任何污染，具有很高的臨床推廣價值。
權(quán)利要求
1.乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，通過乙型肝炎病毒表面抗原化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒表面抗原，通過乙型肝炎病毒表面抗體化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒表面抗體，通過乙型肝炎病毒e抗原化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒e抗原，通過乙型肝炎病毒e抗體化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒e抗體，通過乙型肝炎病毒核心抗體化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒核心抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，乙型肝炎病毒表面抗原化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒表面抗原抗體的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒特異性表面抗原標準品、酶標記乙肝病毒表面抗原抗體、發(fā)光底物構(gòu)成；乙型肝炎病毒表面抗體化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒表面抗原的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒表面抗體系列標準品、酶標記乙肝病毒表面抗原、發(fā)光底物構(gòu)成，乙型肝炎病毒e抗原化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒e抗原抗體的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒特異性e抗原系列標準品、酶標記乙肝病毒e抗原抗體、發(fā)光底物構(gòu)成；乙型肝炎病毒e抗體化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒e抗原的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒表面抗體系列標準品、酶標記乙肝病毒e抗原、發(fā)光底物構(gòu)成；乙型肝炎病毒核心抗體化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒由包被有乙肝病毒核心抗原的免疫反應(yīng)滴定微孔板、乙肝病毒核心抗體系列標準品、酶標記乙肝病毒核心抗體、發(fā)光底物構(gòu)成。
3.如權(quán)利要求2所述的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，免疫反應(yīng)滴定微孔板包被抗表面抗原單克隆抗體或多克隆抗體，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒表面抗原純品或人血清中乙肝病毒表面抗原，并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記乙型肝炎病毒表面抗原單克隆抗體或多克隆抗體，辣根過氧化物酶標記乙型肝炎病毒表面抗原抗體的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為用HRP-魯米諾發(fā)光體系。
4.如權(quán)利要求2所述的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，免疫反應(yīng)滴定微孔板包被有基因工程合成乙肝病毒表面抗原，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒表面抗體純品或人血清中乙肝病毒表面抗體并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記基因合成乙肝病毒表面抗原，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒表面抗原的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
5.如權(quán)利要求2所述的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，免疫反應(yīng)滴定微孔板包被有抗乙肝病毒e抗原單克隆抗體或抗乙肝病毒e抗原多單克隆抗體，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒e抗原純品或人血清中乙肝病毒e抗原并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒e抗原的單克隆抗體或多克隆抗體，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒e抗原抗體的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
6.如權(quán)利要求2所述的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，免疫反應(yīng)滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒e抗原時，先過量包被單克隆抗體，再包被e抗原，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒e抗體純品或人血清中乙肝病毒e抗體并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒e抗原單克隆抗體，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒e抗原單克隆抗體的工作濃度為1∶3000以上，酶標記物中加入鼠抗，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
7.如權(quán)利要求2所述的乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，其特征在于，免疫反應(yīng)滴定微孔板包被基因工程合成乙肝病毒核心抗原，系列標準品由分析緩沖液為基質(zhì)，加入乙肝病毒核心抗體純品或人血清中乙肝病毒核心抗體并添加色素配制而成，辣根過氧化物酶標記基因合成乙肝病毒核心抗體，辣根過氧化物酶標記乙肝病毒核心抗體的工作濃度為1∶3000以上，發(fā)光底物為HRP-魯米諾發(fā)光體系。
全文摘要
本發(fā)明屬臨床血液免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種乙肝病毒的化學(xué)發(fā)光定性定量檢測方法，該方法通過乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒表面抗原，通過乙型肝炎病毒表面抗體(抗－HBs)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒表面抗體，通過乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒e抗原，通過乙型肝炎病毒e抗體(抗－HBe)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒e抗體，通過乙型肝炎病毒核心抗體(抗－HBc)化學(xué)發(fā)光定性定量檢測試劑盒檢測乙型肝炎病毒核心抗體。本發(fā)明檢測乙肝病毒準確、方便、快捷，能夠更好地滿足臨床的需要。
文檔編號G01N21/76GK1963512SQ20061010739
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月10日
發(fā)明者付光宇, 李桂林, 李彬, 張學(xué)東, 黃曉, 馬建軍, 吳學(xué)煒 申請人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司