專利名稱：青花菜褐莖病快速診斷方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蔬菜病害的診斷技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種青花菜褐莖病的快速診斷方法。
背景技術(shù)：
青花菜(broccoli)又名西蘭花、綠花菜，是十字花科(Cruciferae)蕓薹屬甘藍(lán)種中以綠或紫色花球?yàn)楫a(chǎn)品的一個(gè)變種，一、二年生草本植物，學(xué)名Brassica oleracea L.var.italica Planch，染色體數(shù)2n＝2x＝18。是由甘藍(lán)演化而來(lái)，演化中心為地中海東部沿岸地區(qū)。以綠色或紫色花球供食用，因其風(fēng)味好、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、鮮綠脆嫩的質(zhì)地、清爽適口的風(fēng)味，深受廣大消費(fèi)者的喜歡，是國(guó)際市場(chǎng)暢銷蔬菜五大品種之一。雖其栽培歷史較短，但發(fā)展很快，英國(guó)、意大利、法國(guó)、荷蘭等國(guó)廣為種植。19世紀(jì)初傳入美國(guó)，后傳到日本。19世紀(jì)末至20世紀(jì)初傳入中國(guó)。青花菜在我國(guó)栽培歷史不長(zhǎng)，八十年代開(kāi)始才有零星種植，浙江省臨海市于1989年開(kāi)始成片試種，1995年在浙江全省形成規(guī)?；a(chǎn)。浙江省是全國(guó)青花菜的主要產(chǎn)區(qū)，主栽區(qū)分布在臺(tái)州的臨海、三門，寧波的象山、慈溪、北侖，紹興的上虞及杭州的蕭山等地，2002年種植面積約1萬(wàn)公頃，占全國(guó)種植面積的70％以上。產(chǎn)品有保鮮、速凍、脫水，并以保鮮為主，全省有20多家專業(yè)生產(chǎn)出口保鮮青花菜的加工廠，主要出口日本、韓國(guó)、新加坡等東南亞國(guó)家和香港地區(qū)，日本是主要市場(chǎng)，年出口量為1萬(wàn)余噸。從1999年開(kāi)始，種植區(qū)域零星發(fā)生花球病變，其后病情逐年加劇，至2002年發(fā)病面積已占25％左右，嚴(yán)重田塊發(fā)病率達(dá)80％以上。該病主要癥狀表現(xiàn)為花球主莖變褐至黑色和花球的小花梗表皮及維管束變褐至黑色，感病花球無(wú)商品價(jià)值，對(duì)青花菜主產(chǎn)區(qū)的農(nóng)民和出口加工企業(yè)的利益造成極大的損失。
以往國(guó)內(nèi)外對(duì)青花菜的研究主要集中在青花菜的遺傳學(xué)、育種學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)及營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)青花菜產(chǎn)量的影響和缺硼引起的青花菜空心等方面，而對(duì)青花菜的褐莖病則尚未見(jiàn)有研究報(bào)道。由于國(guó)內(nèi)外沒(méi)有對(duì)青花菜褐莖病的發(fā)病機(jī)理和發(fā)生規(guī)律進(jìn)行過(guò)系統(tǒng)的研究，而生產(chǎn)上青花菜褐莖病的發(fā)生即逐年加重，導(dǎo)致了近年來(lái)對(duì)該病的治理無(wú)策。
實(shí)際上，青花菜褐莖病是由鞭毛菌亞門、卵菌綱、霜霉目、霜霉屬的寄生霜霉蕓苔屬變種甘藍(lán)類型真菌(Peronospora parasiticaVar.brassica)侵染引起(《中國(guó)真菌總匯》戴芳瀾，科學(xué)出版社，1997年；《真菌鑒定手冊(cè)》魏景超，上?？茖W(xué)技術(shù)出版，1979年)。病菌的卵孢子在病殘?bào)w、土壤或附著在種子表皮上越冬，也可在其他寄主上為害過(guò)冬，土壤中的病菌萌發(fā)直接侵染幼苗，產(chǎn)生大量孢子囊，借風(fēng)雨、氣流傳播，使病害擴(kuò)展蔓延；孢子囊形成和萌發(fā)溫度為8～12℃，侵入適溫為16℃，孢子囊的形成、萌發(fā)和再侵染需要水滴或水膜。菌絲蔓延和吸器的發(fā)育適溫為20～24℃。浙江青花菜主要在冬春季節(jié)栽培，12月至次年3月正值青花菜的花梗抽出或花球形成期，雖然冬季較為干燥，但連續(xù)幾天陰雨天仍時(shí)有發(fā)生，同時(shí)冬天的清晨溫度較低，植株表面經(jīng)常積有露水，在這種情況下霜霉病菌孢子就很容易萌發(fā)浸染進(jìn)入青花菜的主莖與花梗，菌絲在青花菜植株細(xì)胞間迅速繁衍延伸，并向細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)入霜霉病菌所特有的吸器，不斷從細(xì)胞內(nèi)吸取營(yíng)養(yǎng)；至發(fā)病中、后期，在花莖與花梗的髓部組織、維管束已長(zhǎng)滿菌絲，由菌絲向植株分泌的酚類物質(zhì)，導(dǎo)致植株發(fā)病部位呈現(xiàn)出褐色至黑色的病狀。但感染該霜霉病菌的發(fā)病植株在必然表現(xiàn)褐色至黑色病狀的同時(shí)，不一定在發(fā)病部位表面表現(xiàn)出白色霉?fàn)钗?孢囊梗和孢子囊)的病癥；因?yàn)樵摼挥性谔镩g5日平均氣溫6℃以上，5日平均相對(duì)濕度83％以上的情況下，才能在發(fā)病部位表面抽生孢囊梗和產(chǎn)生孢子囊，因此在大多數(shù)情況下，發(fā)病植株僅呈現(xiàn)褐至黑色的病狀，而不表現(xiàn)白色霉?fàn)钗锏牟“Y。所以至今為止，從事青花菜研究和生產(chǎn)的人們往往將其判斷成缺硼等營(yíng)養(yǎng)缺乏癥，因該癥也表現(xiàn)出相類似的褐黑色癥狀。如2002年冬季，浙江杭州市蕭山區(qū)錢江回墾農(nóng)場(chǎng)約有100畝青花菜褐莖病被誤診為營(yíng)養(yǎng)缺乏癥；2003年春上虞海涂約有1000畝青花菜褐莖病也被誤診為營(yíng)養(yǎng)缺乏癥，造成對(duì)青花菜褐莖病的診斷錯(cuò)誤，貽誤了有效防治，造成大量經(jīng)濟(jì)損失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是針對(duì)上述青花菜褐莖病一般僅表現(xiàn)出褐至黑色的病狀，很難表現(xiàn)出白色霉?fàn)钗锊“Y，而易與其它病害相混淆的診斷難題，利用該霜霉病菌在侵害植株細(xì)胞中能形成特有的吸器組織這一特征，研究提出一種技術(shù)簡(jiǎn)便、應(yīng)用快速、判斷準(zhǔn)確的青花菜褐莖病快速診斷方法，。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
青花菜褐莖病快速診斷方法，按如下步驟進(jìn)行(1)田間采樣在生產(chǎn)田間隨機(jī)分別采集帶有褐至黑色病狀和正常的青花菜花球?yàn)闃悠?，備用?2)機(jī)械或手工切片將步驟(1)樣品的花莖或花球的花梗，切成長(zhǎng)×寬×高分別為5mm×5mm×5mm的小方塊，采用切片機(jī)或手工，經(jīng)縱向和/或橫向，切成厚度為0.01mm或小于0.01mm的切片；
(3)顯微鏡觀察將步驟(2)切片置于放大100倍至100倍以上的顯微鏡下觀察；(4)診斷以在顯微鏡下在寄主細(xì)胞里長(zhǎng)有青花菜褐莖病所特有的病原菌結(jié)構(gòu)吸器為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷(見(jiàn)圖2，吸器(2))，有吸器則診斷為由Peronospora parasitica Var.brassica引起的青花菜褐莖??；無(wú)吸器則診斷為正常植株或營(yíng)養(yǎng)缺乏癥植株。
本發(fā)明的有益效果一是應(yīng)用簡(jiǎn)便快速，本方法使用非常簡(jiǎn)單，僅需一臺(tái)光學(xué)顯微鏡和一把切片刀或一臺(tái)切片機(jī)，即可在田間或室內(nèi)進(jìn)行操作。
二是準(zhǔn)確可靠，該方法技術(shù)依據(jù)明確，在顯微觀察時(shí)只要觀察切片中有無(wú)褐莖病特有的病原菌結(jié)構(gòu)——吸器即可，有“吸器”則是褐莖病，無(wú)則不是，所以非常準(zhǔn)確可靠。
三是試驗(yàn)表明，應(yīng)用該方法能在1小時(shí)內(nèi)，快速確診青花菜褐莖病病因，使以往青花菜褐莖病一般僅表現(xiàn)出褐至黑色的病狀，很難表現(xiàn)出白色霉?fàn)钗锊“Y，而易與其它病害相混淆的診斷難題得以解決，若早期就診斷明確為由褐莖病原引起，就能及早采取有效措施使青花菜褐莖病得到及時(shí)的治理，避免造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，該方法可在青花菜的種植栽培區(qū)廣泛推廣使用。


圖1本發(fā)明方法快速診斷流程示意圖。
圖2青花菜褐莖病所特有的病原菌結(jié)構(gòu)——吸器顯微攝影圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
本發(fā)明青花菜褐莖病快速診斷方法，主要由田間采樣、切片、顯微觀察、診斷幾個(gè)步驟組成，具體步驟過(guò)程按照附圖1流程示意進(jìn)行。
實(shí)施例1(室內(nèi)切片機(jī)切片)(1)田間采樣在生產(chǎn)青花菜的田間隨機(jī)采集青花菜花球；(2)室內(nèi)切片機(jī)切片取采集的青花菜花球標(biāo)樣的花莖，或花球的花梗，先切成長(zhǎng)×寬×高分別為5mm×5mm×5mm的小方塊，置于切片機(jī)上，分別進(jìn)行縱向(從表皮組織向髓部組織)和/或橫向切片，切片的厚度為0.01mm或小于0.01mm均可，以健康西蘭花莖部組織為對(duì)照；(3)顯微觀察將切片置于100倍顯微鏡下進(jìn)行鏡檢并顯微攝影；(4)診斷在顯微鏡下能觀察到青花菜褐莖病特有的病原菌結(jié)構(gòu)——吸器的，則是由Peronospora parasitica Var.brassica引起的青花菜褐莖病(見(jiàn)圖2，其中，菌絲1、吸器2、寄主細(xì)胞3)；若在顯微鏡下沒(méi)有觀察到“吸器”則為正常植株或營(yíng)養(yǎng)缺乏癥植株(因該癥也表現(xiàn)出相類似的褐黑色癥狀)。
實(shí)施例2(田間手工切片)(1)田間采樣在生產(chǎn)青花菜的田間隨機(jī)采集青花菜花球。
(2)田間手工切片取采集的青花菜花球標(biāo)樣的花莖，或花球的花梗，直接在田間采用手工刀片，分別進(jìn)行縱向(從表皮組織向髓部組織)和/或橫向切片，切片的厚度為為0.01mm或小于0.01mm均可，以健康西蘭花莖部組織為對(duì)照。
(3)顯微觀察將切片置于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢觀察。
(4)診斷若在顯微鏡下能觀察到青花菜褐莖病特有的病原菌結(jié)構(gòu)——吸器的，則是由Peronospora parasitica Var.brassica引起的青花菜褐莖病，若在顯微鏡下沒(méi)有觀察到“吸器”則為正常植株或營(yíng)養(yǎng)缺乏癥植株。
權(quán)利要求
1.青花菜褐莖病快速診斷方法，其特征是按如下步驟進(jìn)行(1)田間采樣在生產(chǎn)田間隨機(jī)分別采集帶有褐至黑色病狀和正常的青花菜花球?yàn)闃悠?，備用?2)機(jī)械或手工切片將步驟(1)樣品的花莖或花球的花梗，切成長(zhǎng)×寬×高分別為5mm×5mm×5mm的小方塊，采用切片機(jī)或手工，經(jīng)縱向和/或橫向，切成厚度為0.01mm或小于0.01mm的切片；(3)顯微鏡觀察將步驟(2)切片置于放大100倍至100倍以上的顯微鏡下觀察；(4)診斷以在顯微鏡下在寄主細(xì)胞里長(zhǎng)有青花菜褐莖病所特有的病原菌結(jié)構(gòu)吸器為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，有吸器則診斷為由Peronosporaparasitica Var.brassica引起的青花菜褐莖?。粺o(wú)吸器則診斷為正常植株或營(yíng)養(yǎng)缺乏癥植株。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種青花菜褐莖病快速診斷方法，屬于蔬菜病害的診斷技術(shù)領(lǐng)域。該方法由田間采樣、切片、顯微觀察、診斷等幾個(gè)步驟組成，該方法技術(shù)依據(jù)明確，只需在顯微觀察時(shí)觀察切片中有或無(wú)褐莖病特有的病原菌結(jié)構(gòu)——吸器即可作出是或否屬于青花菜褐莖病的判斷，具有設(shè)備要求簡(jiǎn)陋、應(yīng)用簡(jiǎn)便快速、判斷準(zhǔn)確可靠的特點(diǎn)，適于在青花菜的種植栽培區(qū)廣泛推廣使用。
文檔編號(hào)G01N1/06GK1844917SQ200610050539
公開(kāi)日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2006年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月27日
發(fā)明者王漢榮, 王連平, 茹水江, 方麗, 趙建陽(yáng) 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院