專利名稱：測(cè)量動(dòng)態(tài)內(nèi)部校準(zhǔn)真值劑量反應(yīng)曲線的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測(cè)定裝置以及制造所述測(cè)定裝置的方法，所述測(cè)定裝置用于檢測(cè)生物樣品中存在的被分析物及其含量。
背景技術(shù)：
免疫測(cè)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在傳統(tǒng)上由外部校準(zhǔn)參照標(biāo)準(zhǔn)帶動(dòng)(driven)。當(dāng)前用于典型免疫診斷測(cè)定的分析方法提供了基于通常接受的外部標(biāo)準(zhǔn)參照測(cè)量的診斷測(cè)試結(jié)果。當(dāng)進(jìn)行測(cè)定時(shí)，許多公知的差異已經(jīng)顯然地導(dǎo)致定量誤差，這導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果的變化。例如，測(cè)定靈敏度的測(cè)量通過基于下述測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計(jì)分析描述靈敏度反復(fù)測(cè)量低濃度的樣品以確定樣品結(jié)果在統(tǒng)計(jì)上不為零。由于產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)誤差與實(shí)際測(cè)量數(shù)的平方根成反比，該方法不實(shí)際測(cè)量固有的測(cè)定靈敏度。進(jìn)一步的改進(jìn)已經(jīng)獲得一些改善。在本技術(shù)領(lǐng)域稱為分析靈敏度的零點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)量幾次并且靈敏度限度成為等于自M(平均值)等于2-3SD(標(biāo)準(zhǔn)偏差)的濃度。然而，該理論上確定的精密度的不正確程度可達(dá)一個(gè)數(shù)量級(jí)。任何導(dǎo)出的外部校準(zhǔn)曲線的伴隨配合線不產(chǎn)生真值動(dòng)態(tài)劑量反應(yīng)曲線，這在實(shí)際的靈敏度中導(dǎo)致相當(dāng)大的誤差。
為了進(jìn)一步測(cè)量該分析測(cè)量的精確性，精確度被用于限定平均測(cè)量值與真值的接近。測(cè)量上的差異被認(rèn)為是偏差或精確程度。偏差可以超過測(cè)定的范圍。本技術(shù)領(lǐng)域中用于測(cè)量該真值的方法需要發(fā)展。
測(cè)定的可復(fù)驗(yàn)性或在分析測(cè)定中估計(jì)的誤差在本技術(shù)領(lǐng)域中被稱為變異系數(shù)百分比(％CV)。樣品的濃度、溫度、熱以及邊緣效應(yīng)的變化、顆粒的不完全懸浮以及固相沉淀可以影響自動(dòng)測(cè)定分析機(jī)器。分級(jí)分離(fraction separation)以及計(jì)算誤差也影響精密度結(jié)果。在光學(xué)系統(tǒng)中，由于濁度的影響、熒光團(tuán)的存在、燈以及檢測(cè)裝置的老化以及試劑隨著時(shí)間的老化會(huì)產(chǎn)生誤差。這些因素通常引起信噪比的顯著降低。差的吸量作用(pipetting)以及儀器的準(zhǔn)備周期可引起機(jī)械操作誤差。
作為直接的結(jié)果，用于任何分析方法的精密度的評(píng)估均要求使用限定的或標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)照溶液測(cè)量已知以及有關(guān)的濃度的變異性以產(chǎn)生基線校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。這種校準(zhǔn)器的精確測(cè)定基于測(cè)量在預(yù)定的間隔的系列稀釋的已知濃度，然后將其以內(nèi)插值替換。可以使用商品參照溶液以及自行制備的參照溶液或參照標(biāo)準(zhǔn)，但通常使用標(biāo)準(zhǔn)的或共有的基質(zhì)(pooledmatrices)校準(zhǔn)，這些基質(zhì)可能與實(shí)際的病人測(cè)試樣品相差甚遠(yuǎn)?？朔@些誤差的部分解決方案為在寬濃度范圍內(nèi)繪制精密度圖以獲得精密度分布圖或測(cè)定的校準(zhǔn)。
交叉反應(yīng)、測(cè)定專一性、偏差引起的干擾、抗原、抗體、結(jié)合部位的改變、低劑量(競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定)以及高劑量(三明治夾心測(cè)定)鉤狀效應(yīng)(hook effects)、異嗜性抗體干擾、內(nèi)源性干擾的自體抗體、補(bǔ)體、類風(fēng)濕因子、固相抗體結(jié)合中的干擾、內(nèi)源信號(hào)發(fā)生物質(zhì)、酶抑制劑、催化劑以及輔助因子也已經(jīng)被顯示出表現(xiàn)測(cè)定中的混雜活性(confoundingactivity)，該混雜活性包括交叉反應(yīng)、基質(zhì)效應(yīng)以及自動(dòng)免疫測(cè)定儀器與取樣器中樣品的遺留物(carry over)。
對(duì)于診斷應(yīng)用而言，質(zhì)量控制的樣品可能不反映病人體內(nèi)的實(shí)際臨床濃度，可能不反映處理中的被分析物的光譜并且干擾樣品基質(zhì)而不再反映病人樣品的含量。質(zhì)量控制的樣品可以測(cè)量不同濃度差的性能，該性能可能不反映臨床決定要點(diǎn)。
因此，需要一種能可靠地校準(zhǔn)的免疫測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種測(cè)定裝置的內(nèi)部動(dòng)態(tài)校準(zhǔn)方法，所述測(cè)定裝置具有測(cè)定表面，用于確定樣品中被分析物的濃度。含有預(yù)定量的被分析物的多個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)印制在測(cè)定表面上。含有用于與所述被分析物結(jié)合的試劑的測(cè)試點(diǎn)也印制在測(cè)定表面上。在引入測(cè)定裝置之前，用可檢測(cè)的標(biāo)記物復(fù)合物標(biāo)記被分析物。被分析物-可檢測(cè)的標(biāo)記物復(fù)合物在測(cè)試點(diǎn)與試劑結(jié)合。樣品中抗原的量與測(cè)試點(diǎn)中可檢測(cè)的標(biāo)記物的強(qiáng)度成比例。校準(zhǔn)點(diǎn)含有不同預(yù)定量的被分析物。任何未標(biāo)記的可檢測(cè)的標(biāo)記物將與校準(zhǔn)點(diǎn)結(jié)合。這樣，獲得一條內(nèi)部校準(zhǔn)的校準(zhǔn)曲線。測(cè)試點(diǎn)中可檢測(cè)的標(biāo)記物的強(qiáng)度可以與該校準(zhǔn)曲線比較以獲得一絕對(duì)值。
該方法提供了一種通過使用一單個(gè)測(cè)定裝置迅速實(shí)施的定量分析，為了滿足作為每測(cè)試量的被分析物濃度的函數(shù)的被分析物的已知濃度，該測(cè)定裝置具有含有已知最少量的測(cè)試流體的能力，也具有使流體流過該裝置的能力。校準(zhǔn)點(diǎn)以及測(cè)試點(diǎn)都印制在一單個(gè)測(cè)定裝置內(nèi)，從而該測(cè)定裝置只需涂覆一單一的、含有被分析物以及過量的優(yōu)選地為抗體的檢測(cè)試劑的預(yù)混合溶液。
本發(fā)明還包括一種通過在一共同的測(cè)試平臺(tái)裝置上印制校準(zhǔn)物以及測(cè)試樣品而獲得動(dòng)態(tài)真值劑量反應(yīng)曲線的方法。該測(cè)試平臺(tái)至少具有一個(gè)測(cè)試點(diǎn)。每個(gè)測(cè)試點(diǎn)具有多個(gè)相應(yīng)的校準(zhǔn)點(diǎn)。將在標(biāo)示的X/Y坐標(biāo)處獲得的比較濃度動(dòng)態(tài)校準(zhǔn)點(diǎn)的總數(shù)的信號(hào)集合以形成動(dòng)態(tài)內(nèi)部校準(zhǔn)真值劑量反應(yīng)曲線。在類似的處理中，未知的測(cè)試點(diǎn)標(biāo)記反應(yīng)讀數(shù)也通過所有獲得的讀數(shù)集合。使用平臺(tái)形式的多重測(cè)試陣列或矩陣意味著已獲得正確測(cè)試結(jié)果時(shí)接近100％的置信限度。共同的測(cè)試平臺(tái)與相同的測(cè)試流體接觸，并且由于校準(zhǔn)物及測(cè)試樣品與相同的測(cè)試流體同時(shí)接觸，通過產(chǎn)生的真值劑量反應(yīng)校準(zhǔn)曲線確定測(cè)試樣品中存在的被分析物濃度的精確測(cè)量。本發(fā)明提供了意料不到的結(jié)果當(dāng)使用該披露的方法以及裝置處理測(cè)試樣品時(shí)，未出現(xiàn)使用已知技術(shù)中的方法所導(dǎo)致的各種誤差。
根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了一種測(cè)定樣品溶液中被分析物的量的方法，該方法包括下述步驟●準(zhǔn)備一種測(cè)定裝置，該測(cè)定裝置具有一測(cè)定表面，所述測(cè)定表面上印制有多個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)以及一個(gè)測(cè)試點(diǎn)，校準(zhǔn)點(diǎn)含有預(yù)定量的被分析物，測(cè)試點(diǎn)含有用于與所述被分析物結(jié)合的試劑；●準(zhǔn)備一種含有用于與被分析物結(jié)合的試劑的溶液，所述試劑用可檢測(cè)標(biāo)記物標(biāo)記；●將被分析物引入所述溶液以形成樣品溶液；●將所述樣品溶液引到所述測(cè)定裝置上；●測(cè)量所述校準(zhǔn)點(diǎn)中可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度；
●繪制所述校準(zhǔn)點(diǎn)中被分析物的量與所述可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度的相關(guān)性的校準(zhǔn)曲線；●測(cè)量所述測(cè)試點(diǎn)中可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度；以及●通過比較可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度與所述校準(zhǔn)曲線中所述強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的被分析物的量計(jì)算所述測(cè)試點(diǎn)中存在的被分析物的量。


圖1是用于實(shí)施固定陣列測(cè)試的本發(fā)明的一種測(cè)定裝置的俯視圖；圖2所示證實(shí)單一的以及集合的免疫復(fù)合物是可以計(jì)量的；圖3所示說明測(cè)試樣品中的抗原濃度不影響校準(zhǔn)點(diǎn)中的熒光強(qiáng)度；圖4是PicoTip陣列印制、點(diǎn)大小以及陣列矩陣的圖解；圖5所示說明了使用動(dòng)態(tài)真值劑量反應(yīng)測(cè)量的被分析物濃度與熒光的相互關(guān)系；以及圖6是用于測(cè)試與人體血漿中已存在的微生物反應(yīng)的各個(gè)抗體的存在性的測(cè)定裝置的俯視圖。
具體實(shí)施例方式
本方法用于校準(zhǔn)一種測(cè)定裝置。圖1示出了一種優(yōu)選的測(cè)定裝置。該測(cè)定裝置具有一個(gè)測(cè)定表面10，該表面優(yōu)選地包含一個(gè)裝載區(qū)域18以及一個(gè)讀數(shù)區(qū)域16。在讀數(shù)區(qū)域16上至少印制一個(gè)、優(yōu)選地至少印制兩個(gè)測(cè)試點(diǎn)20。更優(yōu)選地，檢測(cè)被分析物存在的多個(gè)點(diǎn)印制在讀數(shù)區(qū)域16上。測(cè)試點(diǎn)20包括與蛋白質(zhì)被分析物特異地結(jié)合的試劑。優(yōu)選地，該試劑是與被分析物特異地結(jié)合的結(jié)合抗體。也可以使用本技術(shù)領(lǐng)域中已知的結(jié)合特異被分析物的其它試劑。在本發(fā)明的下述討論中，試劑所指的將是一種抗體。
該結(jié)合抗體優(yōu)選地在空間上隔開以使各個(gè)結(jié)合抗體可以在沒有與相鄰的抗原復(fù)合體發(fā)生硬脂酸位阻的情況下與測(cè)試抗原結(jié)合。優(yōu)選地，不反應(yīng)的蛋白質(zhì)在測(cè)試點(diǎn)將結(jié)合抗體隔開。
讀數(shù)區(qū)域16上印制有校準(zhǔn)點(diǎn)22。該校準(zhǔn)點(diǎn)包括預(yù)定量的所述被分析物，以用于與未反應(yīng)的與可檢測(cè)的標(biāo)記物結(jié)合的、在器具中的試劑反應(yīng)。校準(zhǔn)點(diǎn)可以使所述標(biāo)記的強(qiáng)度與存在的抗原的量相關(guān)。因而，測(cè)試點(diǎn)中的標(biāo)記強(qiáng)度可用于獲得存在的抗原的量。
校準(zhǔn)點(diǎn)具有與被分析物的動(dòng)態(tài)范圍相一致的被分析物的濃度。該動(dòng)態(tài)范圍是病人中通常發(fā)現(xiàn)的被分析物濃度。定量需要在最低濃度與最高濃度的范圍內(nèi)并且與臨床有關(guān)的濃度相關(guān)。
與當(dāng)前用于免疫測(cè)定的典型方法相關(guān)聯(lián)的許多問題源自通過引入用于校準(zhǔn)的外部標(biāo)準(zhǔn)參照樣品確定的測(cè)定校準(zhǔn)。通過不使用這些標(biāo)準(zhǔn)的外部校準(zhǔn)樣品，本發(fā)明方法提供了更精確的結(jié)果。
在開發(fā)用于測(cè)量各分析物數(shù)量的平臺(tái)裝置時(shí)，校準(zhǔn)點(diǎn)以及未知濃度的測(cè)試點(diǎn)都被印制在相同的測(cè)試平臺(tái)上，未使用外部標(biāo)準(zhǔn)以產(chǎn)生校準(zhǔn)線或基線。校準(zhǔn)測(cè)試點(diǎn)以已知濃度的被分析物印制。測(cè)試點(diǎn)也以預(yù)定的X-Y位置被印制，該測(cè)試點(diǎn)只包含捕獲試劑，該捕獲試劑優(yōu)選地為一種特異于用于測(cè)試中的被分析物的抗體。然后，將測(cè)試樣品與過量的、優(yōu)選為抗體的標(biāo)記物試劑和被分析物結(jié)合。標(biāo)記物抗體之前與一個(gè)單獨(dú)的、在適當(dāng)波長(zhǎng)(例如，650納米)發(fā)光的熒光標(biāo)記物結(jié)合。然后，使用層流使標(biāo)記抗體/抗原復(fù)合物以及游離的、剩余的標(biāo)記物抗體流過測(cè)試平臺(tái)。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解也可以使用不依賴于層流的其它測(cè)定裝置。例如，為了本發(fā)明的目的，也可以應(yīng)用一種導(dǎo)管形式的裝置，其通過擴(kuò)散限制的動(dòng)力學(xué)，抗體/抗原復(fù)合物以及剩余的游離標(biāo)記物抗體流過該裝置。
在此種方式中，標(biāo)記抗體/未知濃度的抗原復(fù)合物被捕獲抗體測(cè)試點(diǎn)結(jié)合，而游離的標(biāo)記抗體與已知濃度的預(yù)印制抗原點(diǎn)結(jié)合。待測(cè)量的未知濃度的測(cè)試點(diǎn)以及包含被分析物動(dòng)態(tài)范圍的已知濃度的校準(zhǔn)點(diǎn)同時(shí)與同樣的測(cè)試流體樣品接觸。層流有效地將被分析物組分置于各個(gè)結(jié)合部位的附近以增大各個(gè)締合常數(shù)的最佳附著動(dòng)力。
當(dāng)由適當(dāng)波長(zhǎng)的輻射激活時(shí)，在讀數(shù)器中檢查測(cè)試平臺(tái)以確定與平臺(tái)上的點(diǎn)相結(jié)合的各個(gè)熒光標(biāo)記物的濃度。校準(zhǔn)點(diǎn)，優(yōu)選地最初印制被分析物達(dá)十種不同的濃度，產(chǎn)生一動(dòng)態(tài)內(nèi)部真值劑量反應(yīng)曲線，該曲線為測(cè)定提供非常準(zhǔn)確的校準(zhǔn)參照。由未知濃度的測(cè)試點(diǎn)讀取的強(qiáng)度與該校準(zhǔn)線進(jìn)行比較。該未知測(cè)試濃度準(zhǔn)確地且有效地插入由已知的校準(zhǔn)點(diǎn)獲得的動(dòng)態(tài)內(nèi)部真值劑量反應(yīng)校準(zhǔn)中。
測(cè)試的每一測(cè)定裝置提供類似的準(zhǔn)確且可再現(xiàn)的結(jié)果，該結(jié)果確認(rèn)用于平臺(tái)上動(dòng)態(tài)校準(zhǔn)的本發(fā)明方法提供一種準(zhǔn)確的、提高的且靈敏的確定被分析物的方法，該方法用于人類以及動(dòng)物臨床應(yīng)用中的診斷使用以及被分析物的檢測(cè)的定量測(cè)定和定性測(cè)定。該直接且顯著的益處說明當(dāng)使用所描述的方法(動(dòng)態(tài)內(nèi)部校準(zhǔn)TM)處理時(shí)，這些測(cè)定沒有表現(xiàn)出所描述的由當(dāng)前使用的源自外部校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)的其它方法進(jìn)行這些測(cè)定時(shí)所產(chǎn)生的誤差。
可以同時(shí)校準(zhǔn)與測(cè)試的功能也提高了確保獲得的測(cè)量值是真值的置信水平。本發(fā)明的方法允許在同一測(cè)定裝置上同時(shí)進(jìn)行幾種不同的被分析物測(cè)試。用于測(cè)試不同被分析物的幾套測(cè)試點(diǎn)或測(cè)試陣列以及用于不同被分析物的多套相應(yīng)的校準(zhǔn)點(diǎn)或校準(zhǔn)陣列可以在同一測(cè)定裝置上同時(shí)進(jìn)行。為了達(dá)到優(yōu)于99％的測(cè)試置信水平，該測(cè)試需進(jìn)行至少三次。也可以在一單個(gè)測(cè)試平臺(tái)上同時(shí)使用和進(jìn)行多組不同的測(cè)試。本發(fā)明的出乎意料的結(jié)果證明測(cè)試中的誤差消除了，可復(fù)驗(yàn)性提高了，用于任何測(cè)試的動(dòng)態(tài)范圍被容易地延伸至包括必需的被分析物濃度范圍，顯著地提高了靈敏度以及變異系數(shù)。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的這些優(yōu)點(diǎn)的集合也相當(dāng)多地節(jié)省了測(cè)試結(jié)果的時(shí)間。一個(gè)重要的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明的形式為獨(dú)立的裝置并且可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)用。
所描述的測(cè)定裝置和方法有效地闡述了一種用于被分析物和/或標(biāo)記物濃度準(zhǔn)確測(cè)定的新穎的、定量的以及快速的方法，通常用于與疾病處理相關(guān)的診斷性臨床標(biāo)記物。標(biāo)記物濃度的迅速、準(zhǔn)確測(cè)量的直接好處是允許標(biāo)記物濃度的迅速的動(dòng)態(tài)檢測(cè)，該標(biāo)記物濃度作為諸如提高、穩(wěn)定或降低濃度的疾病處理的指標(biāo)；也允許用于在生產(chǎn)特異標(biāo)記物蛋白質(zhì)的修飾基因表達(dá)中迅速地定量監(jiān)測(cè)藥效以指示藥效。
實(shí)施例實(shí)施例1定量熒光免疫測(cè)定三明治夾心免疫測(cè)定基質(zhì)采用了一特異于感興趣的抗原的捕獲抗體以及一用于檢測(cè)被分析物和免疫復(fù)合物的結(jié)合有熒光的二級(jí)抗體。人體絨膜促性腺激素(HCG)是人體懷孕的一個(gè)標(biāo)志物，其在該平臺(tái)測(cè)定中作為用于測(cè)試的抗原。當(dāng)前，該測(cè)試的動(dòng)態(tài)分析范圍在使用5μL的測(cè)定體積時(shí)在1至150fmol/uL(280-37,600mIU/mL)之間。使用該裝置計(jì)算的HCG濃度與已知的濃度比較，在數(shù)值之間(圖2，y＝1.0717x+9.9313)具有極好的一致性，并且在各個(gè)測(cè)試濃度的平均值之間具有高度的相關(guān)性(r＝0.9786)。圖2所示圖形表明當(dāng)與該裝置平臺(tái)結(jié)合時(shí)，單一的以及集合的免疫復(fù)合物提供了可計(jì)量的熒光。
實(shí)施例2在各種樣品抗原濃度測(cè)量抗原點(diǎn)熒光測(cè)定原理是基于定量的、非競(jìng)爭(zhēng)性的、異質(zhì)的免疫測(cè)定。第一發(fā)生(generation)裝置印制有用于標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)校準(zhǔn)的濃度遞減的一系列抗原點(diǎn)；這些抗原點(diǎn)之后是捕獲抗體點(diǎn)。含有抗原的測(cè)試樣品用已經(jīng)結(jié)合了各自的指示劑或染料的凍干檢測(cè)抗體處理。該測(cè)試樣品與標(biāo)記物反應(yīng)2分鐘，然后被分配入待嵌入讀數(shù)器中的芯片測(cè)定裝置中。測(cè)量各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度。讀數(shù)器軟件將未知抗原濃度的捕獲抗體點(diǎn)的熒光與已知濃度的真值劑量反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的熒光比較、計(jì)算測(cè)試抗原的濃度。圖3所示數(shù)據(jù)證實(shí)了測(cè)試樣品中的抗原濃度不影響校準(zhǔn)點(diǎn)中抗原的熒光強(qiáng)度。
實(shí)施例3印制在測(cè)定裝置平臺(tái)上的高級(jí)陣列如圖4所示，含有100個(gè)測(cè)試點(diǎn)的四個(gè)10×10矩陣各使用2.6mm×2.6mm平臺(tái)區(qū)域。點(diǎn)至點(diǎn)的中央至中央的間隔為260μm。在每斑點(diǎn)散布的小滴數(shù)目的增量為每陣列矩陣每點(diǎn)1至4小滴?？偟男酒瑴y(cè)定裝置讀數(shù)區(qū)域?yàn)?000μm×10000μm。該印制模式允許在平臺(tái)讀數(shù)區(qū)域上印制1200點(diǎn)。每次測(cè)試最少具有5個(gè)點(diǎn)，3個(gè)用于校準(zhǔn)，2個(gè)用于測(cè)試點(diǎn)，每個(gè)平臺(tái)支持240次測(cè)試。該技術(shù)優(yōu)點(diǎn)允許fmol/ml的抗原檢測(cè)靈敏度以及為了通過能倍增需要的測(cè)試矩陣以使校準(zhǔn)曲線最優(yōu)化而獲得診斷結(jié)果中的最佳置信度，增加多元測(cè)試陣列數(shù)目。圖4提供了在芯片測(cè)定裝置平臺(tái)上的高級(jí)PicoTip Array印制技術(shù)的圖解。
實(shí)施例4使用真值劑量反應(yīng)陣列測(cè)量校準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度與人體副甲狀腺荷爾蒙濃度的相關(guān)性如圖5所示，測(cè)量人體副甲狀腺荷爾蒙的濃度以確定動(dòng)態(tài)內(nèi)部真值劑量反應(yīng)校準(zhǔn)曲線。該測(cè)試證實(shí)該真值的劑量反應(yīng)在測(cè)試的整個(gè)動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)精確地繪制。
實(shí)施例6當(dāng)測(cè)試人體血漿中12種不同抗體與12種微生物接觸反應(yīng)時(shí)，多元格式的布局如圖6所示，測(cè)試陣列以每次測(cè)試的四種濃度被印制成三重陣列，而在人體IgG免疫球蛋白的情形下，校準(zhǔn)陣列在6種濃度以三重陣列印制。4點(diǎn)×5點(diǎn)陣列被用于以二進(jìn)位編碼形式測(cè)量熒光標(biāo)記物(Dy647)的反應(yīng)以當(dāng)測(cè)定平臺(tái)被嵌入讀數(shù)裝置時(shí)確定該測(cè)定平臺(tái)的特性。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到或可以確定僅僅通過常規(guī)的實(shí)驗(yàn)，可以得到許多上述本發(fā)明實(shí)施方案的等同實(shí)施方式。這些等同實(shí)施方式是意圖包括在下述權(quán)利要求范圍之中的。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定樣品中被分析物的量的方法，所述方法包括下述步驟●準(zhǔn)備一種測(cè)定裝置，該測(cè)定裝置具有一表面，所述表面上印制有多個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)以及一測(cè)試點(diǎn)，所述校準(zhǔn)點(diǎn)含有預(yù)定量的被分析物，所述測(cè)試點(diǎn)含有用于與所述被分析物結(jié)合的試劑；●準(zhǔn)備一種含有特異用于被分析物的樣品試劑的溶液，所述樣品試劑用可檢測(cè)標(biāo)記物標(biāo)記；●將所述樣品引入所述溶液中，以形成一個(gè)樣品溶液；●將所述樣品溶液引到所述測(cè)定裝置上；●測(cè)量所述校準(zhǔn)點(diǎn)中可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度；●繪制所述校準(zhǔn)點(diǎn)中被分析物的量與所述可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度的相關(guān)性的校準(zhǔn)曲線；●測(cè)量所述測(cè)試點(diǎn)中可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度；以及●通過比較可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度與所述校準(zhǔn)曲線中所述強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的被分析物的量計(jì)算所述測(cè)試點(diǎn)中存在的被分析物的量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述試劑是捕獲抗體，并且所述樣品試劑是與所述被分析物特異結(jié)合的抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述測(cè)定裝置具有一個(gè)用于接收樣品溶液的裝載部以及一個(gè)讀數(shù)部，在所述讀數(shù)部上印制有所述多個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)以及印制有所述測(cè)試點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)在1微微升至1微升的體積范圍內(nèi)印制。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，所述體積范圍為1微微升至4微微升。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)在1微微米至12毫米的量范圍內(nèi)印制。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之一所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)在25微米至300微米的量范圍內(nèi)印制。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7之一所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)以預(yù)定的X-Y坐標(biāo)印制在陣列中。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8之一所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)陣列在預(yù)定的濃度印制。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)的印制濃度包括了根據(jù)測(cè)試樣品中待發(fā)現(xiàn)的測(cè)試基質(zhì)的動(dòng)態(tài)范圍。。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)陣列的印制濃度包括了根據(jù)測(cè)試樣品中待發(fā)現(xiàn)的測(cè)試基質(zhì)的動(dòng)態(tài)范圍。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述測(cè)定裝置的表面基本上是平的。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)具有與被分析物的動(dòng)態(tài)范圍相應(yīng)的被分析物濃度。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述校準(zhǔn)點(diǎn)布置在至少三個(gè)陣列中，以便對(duì)一個(gè)測(cè)試重復(fù)三次或更多次。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述測(cè)試點(diǎn)布置在至少三個(gè)陣列中，以便對(duì)該相同測(cè)試重復(fù)三次或更多次。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的測(cè)定裝置，其特征在于，所述測(cè)試可以相同或不同。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述單個(gè)測(cè)試中的單個(gè)被分析物在所述測(cè)定裝置上測(cè)量。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于相同測(cè)試的多個(gè)陣列中的單個(gè)被分析物在所述測(cè)定裝置上測(cè)量。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，不同的被分析物在所述測(cè)定裝置上同時(shí)測(cè)量。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法以及測(cè)定裝置，其特征在于，多次不同測(cè)試中的多種不同的被分析物在所述測(cè)定裝置上同時(shí)測(cè)量。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種測(cè)定樣品溶液中被分析物的量的方法。該方法包括使用一種具有基本上是平的測(cè)定表面的測(cè)定裝置。在該表面上印制有多個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)、一個(gè)測(cè)試點(diǎn)。校準(zhǔn)點(diǎn)含有預(yù)定量的被分析物，而測(cè)試點(diǎn)包括用于結(jié)合被分析物的捕獲抗體。被分析物被混入具有用于被分析物的樣品抗體的溶液中，其中抗體用可檢測(cè)的標(biāo)記物標(biāo)記。將樣品溶液引入測(cè)定裝置的裝載部以輸送至所述讀數(shù)部。下一步驟為測(cè)量校準(zhǔn)點(diǎn)中可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度。然后，利用獲得的數(shù)據(jù)，繪制所述校準(zhǔn)點(diǎn)中被分析物的量與所述可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度的相互關(guān)系的校準(zhǔn)曲線。可以測(cè)量測(cè)試點(diǎn)中可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度，通過比較可檢測(cè)標(biāo)記物的強(qiáng)度與所述校準(zhǔn)曲線中強(qiáng)度相應(yīng)的被分析物的量計(jì)算所述測(cè)試點(diǎn)中存在的被分析物的量。
文檔編號(hào)G01N33/53GK101044402SQ200580031583
公開日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2005年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月20日
發(fā)明者彼德·萊亞, 多梅尼卡·多利奧, 劉峻 申請(qǐng)人:烏梅迪克有限公司