專利名稱：基于抗ctla－4的疾病免疫治療的替代性治療終點(diǎn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般性涉及分子免疫學(xué)和人類疾病的治療。具體涉及使用抗人CTLA-4抗體的優(yōu)化的治療方法。
背景技術(shù)：
脊椎動物免疫系統(tǒng)需要多種信號以實(shí)現(xiàn)最佳的免疫活化(見，如Janeway，Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.1989；541-14；PaulWilliam E.編，Raven Press，N.Y.，《Fundamental Immunology》，第四版(1998)，具體為第12和13章，第441至478頁)。T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)和抗原呈遞細(xì)胞(APC)之間的相互作用是免疫應(yīng)答所必需的。T細(xì)胞和APC上的許多粘附分子的水平在免疫應(yīng)答期間升高(Springer等人，A.Rev.Immunol.1987；5223-252；Shaw和Shimuzu，《Current Opinion inImmunology》，1988編，Kindt和Long，192-97；及Hemler，ImmunologyToday 1988；9109-113)。這些分子水平的升高可能有助于解釋為何活化的APC比靜息APC更有效地刺激抗原特異性T細(xì)胞增殖(Kaiuchi等人，J.Immunol.1983；131109-114；Kreiger等人，J.Immunol.1985；1352937-2945；McKenzie，J Immunol.1988；1412907-2911；及Hawrylowicz和Unanue，J.Immunol.1988；1414083-4088)。
T細(xì)胞免疫應(yīng)答是涉及細(xì)胞間(特別是T細(xì)胞和輔助細(xì)胞之間，例如T細(xì)胞與APC之間)相互作用(Springer等人，A.Rev.Immunol.1987；5223-252)并產(chǎn)生可溶性免疫介質(zhì)(細(xì)胞因子或淋巴因子)(Dinarello，NewEngl.J.Med 1987；317940-945；Sallusto，J.Exp.Med.1997；1791109-1118)的復(fù)雜過程。該應(yīng)答受一些T細(xì)胞表面受體調(diào)節(jié)，所述受體包括T細(xì)胞受體復(fù)合物(Weiss，Ann.Rev.Immunol.1986；4593-619)和其他“輔助性”表面分子(Allison，Curr.Opin.Immunol.1994；6414-419；Springer，1987，同上)。許多這些輔助分子是天然存在的細(xì)胞表面分化抗原(CD)，所述抗原由單克隆抗體在該細(xì)胞表面的反應(yīng)所定義(McMichael編，《Leukocyte Typing III》，Oxford Univ.Press，Oxford，N.Y.，1987)。
免疫球蛋白超家族的同型二聚體糖蛋白——CD28抗原(Aruffo和Seed，Proc.Natl.Acad.Sci.1987；848573-8577)是見于大部分成熟的人類T細(xì)胞上的輔助分子(Damle等人，J.Immunol.1983；13l2296-2300)?，F(xiàn)有證據(jù)提示，該分子在有別于由T細(xì)胞受體復(fù)合物啟動的替代性T細(xì)胞活化途徑中行使功能(June等人，Mol.Cell.Biol.1987；74472-4481)。與CD28抗原反應(yīng)的單克隆抗體(MAb)可以增加由多種多克隆刺激引發(fā)的T細(xì)胞應(yīng)答(June等人綜述，同上)。這些刺激作用可能導(dǎo)致作為mRNA穩(wěn)定性增加結(jié)果(Lindsten等人，1989，同上)的MAb誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生(Thompson等人，Proc.Natl.Acad.Sci 1989；861333-1337；及Lindsten等人，Science 1989；244339-343)。
公認(rèn)CTLA-4對抗CD28活性并抑制T細(xì)胞活化(kummel，J.Exp.Med.1995；182459-465；Krunmmel等人，Int′l Immunol.1996；8519-523；Chambers等人，Immunity 1997；7885-895)。CTLA-4缺陷小鼠遭受大量淋巴組織增生(Chambers等人，同上)。據(jù)報道，CTLA-4阻斷在體外(Walunas等人，Immunity 1994；1405-413)和體內(nèi)(Kearney，J.Immunol.1995；1551032-1036)增加T細(xì)胞應(yīng)答、加劇抗腫瘤免疫(Leach，Science1996；2711734-1736)并加重誘導(dǎo)的自身免疫性疾病(Luhder，J Exp.Med.1998；187427-432)。還據(jù)報道，CTLA-4對T細(xì)胞免疫應(yīng)答的最初特征具有替代或額外的影響(Chambers，Curr.Opin.Immunol.1997；9396-404；Bluestone，J.Immunol.1997；1581989-1993；Thompson，Immunity 1997；7445-450)。這與觀察到一些自身免疫患者具有CTLA-4自身抗體是一致的。阻斷CTLA-4的自身抗體可能在這些患者體內(nèi)起致病性作用(Matsui，J.Immunol.1999；1624328-4335)。
在上文討論的多個研究中使用了非人類CTLA-4抗體。另外，抗人CTLA-4的人類抗體已被描述為許多疾病狀況(例如治療或預(yù)防病毒和細(xì)菌感染及治療癌癥)將下的免疫刺激調(diào)節(jié)物(例如PCT出版物WO01/14424和PCT出版物WO 00/37504)。美國專利No.5,855,887公開了將T細(xì)胞與CTLA-4阻斷劑組合而增加哺乳動物T細(xì)胞對抗原刺激應(yīng)答的方法。美國專利No.5,811,097公開了通過施用CTLA-4阻斷試劑降低非T細(xì)胞腫瘤生長的方法。美國專利申請No.09/644,668和09/948,939公開了人CTLA-4抗體。這些專利和申請每個都在此引用作為參考。
本節(jié)或本說明書其它地方任何參考文獻(xiàn)的引用或討論僅用于闡明本發(fā)明的描述，而不是承認(rèn)任何這類參考文獻(xiàn)是此處描述的任何發(fā)明的“現(xiàn)有技術(shù)”。
發(fā)明概述本發(fā)明提供通過對患者施用劑量足以誘導(dǎo)臨界反應(yīng)(breakthroughevent)的抗CTLA-4抗體，并檢測患者體內(nèi)的臨界反應(yīng)從而治療患者癌癥的新方法。在一個實(shí)施方案中，臨界反應(yīng)是對存在于非癌細(xì)胞上的抗原的自身免疫應(yīng)答。在另一個實(shí)施方案中，臨界反應(yīng)為3或4級。根據(jù)本發(fā)明的方法，施用劑量逐漸升高的抗CTLA-4抗體來誘導(dǎo)臨界反應(yīng)。在另一個實(shí)施方案中，以降低的給藥間隔施用抗CTLA-4抗體來誘導(dǎo)臨界反應(yīng)。在另一個實(shí)施方案中，臨界反應(yīng)是非腫瘤相關(guān)的自身免疫的表現(xiàn)。本發(fā)明癌癥治療提供施用抗CTLA-4抗體的治療有效量方案。本發(fā)明也提供確定這些劑量方案的方法。
此處引用的所有出版物、圖、GenBank登陸參考文獻(xiàn)(序列)、ATCC保藏物、專利和專利申請在此明確引用，以作參考為全部目的，如每個被單獨(dú)說明程度相同。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了更有效的、以可預(yù)測的CTLA-4抗體為基礎(chǔ)的癌癥治療方法。本發(fā)明的方法代表了使用抗CTLA-4抗體治療癌癥的重大進(jìn)展，因?yàn)樗鼈儽苊饬藢颊叩目贵w用藥劑量不足。在以抗CTLA-4抗體治療的癌癥患者當(dāng)中，出乎意料地發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)的出現(xiàn)與治療反應(yīng)之間的統(tǒng)計上的顯著相關(guān)性。盡管避免嚴(yán)重的“不良反應(yīng)”是重癥癌癥患者治療的目標(biāo)，本發(fā)明的方法以誘導(dǎo)并檢測這些反應(yīng)(在此稱為“臨界反應(yīng)”(BE))為目標(biāo)。對這些患者誘導(dǎo)顯著但是可逆的臨界反應(yīng)在醫(yī)學(xué)上是合理的，因?yàn)樽銐騽┝康目笴TLA-4抗體治療可能減輕患者的癌癥或延長壽命。
BE是急性、劑量相關(guān)的、易于監(jiān)測、并在某種程度上可預(yù)測的?？梢酝ㄟ^停止用藥和/或具有或不具有特異性治療的支持治療(通常為皮質(zhì)類固醇治療)逆轉(zhuǎn)BE。由于抗CTLA-4抗體治療的反應(yīng)與出現(xiàn)BE之間的顯著相關(guān)性，施用一定劑量的抗CTLA-4抗體來誘導(dǎo)BE并檢測BE是治療癌癥的有效方法。
在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗CTLA-4抗體是在WO 01/14424中公開的人單克隆抗體10D1。
本發(fā)明部分基于以人類序列抗CTLA-4抗體在癌癥免疫治療臨床試驗(yàn)(如下所述)期間建立的觀察。該試驗(yàn)證明給予劑量足以誘導(dǎo)BE的抗CTLA-4抗體時抗CTLA抗體在癌癥患者治療中的效力。根據(jù)本發(fā)明，足以誘導(dǎo)BE的劑量施用抗CTLA-4抗體并在患者中檢測BE。
多個研究使得BE與抗腫瘤功效之間的相關(guān)性受到認(rèn)可。例如，在研究的第1組中，十四個IV期黑素瘤患者持續(xù)八周以每三周3mg/kg接受抗CTLA-4抗體10D1(MDX-010)，并聯(lián)合用兩種gap100肽接種。所有患者經(jīng)過原發(fā)腫瘤的先前外科手術(shù)。六個患者先前接受過化學(xué)治療。十一個患者先前接受過免疫治療。通過計算軸向?qū)游鯴射線照像術(shù)(CT)及磁共振(MR)成像測量臨床反應(yīng)。經(jīng)過先前化學(xué)治療的患者11的肺、腦和皮下腫瘤在5個治療周期后完全消除。經(jīng)過先前化學(xué)治療和免疫治療的患者13的腎上腺和肺部腫瘤完全消除。經(jīng)過先前化學(xué)治療和免疫治療的患者1是部分反應(yīng)者(partial responder)。這三個反應(yīng)者每人都經(jīng)歷了3級BE。部分反應(yīng)者者患者1具有3級小腸結(jié)腸炎和皮炎。用甲基強(qiáng)地松龍靜脈內(nèi)治療患者1的自身免疫小腸結(jié)腸炎，這在24小時內(nèi)導(dǎo)致顯著的改善。完全反應(yīng)者患者11具有3級下垂體炎和全垂體機(jī)能減弱?；颊?1接受交替施用的甲狀腺素、睪丸甾酮和氫化可的松。完全反應(yīng)者患者13具有通過苯海拉明(hydoxyzine)治療而解決的3級皮炎。該研究出乎意料地顯示，所有三名患者經(jīng)歷了3級不良反應(yīng)。
在該研究的第2組中，以3mg/kg的初始負(fù)荷劑量和隨后1mg/kg的劑量每三周向具有未切除轉(zhuǎn)移黑素瘤的患者施用與gap100肽疫苗組合黑素瘤的抗CTLA-4抗體10D1。至今，24名患者中三名(13％)具有客觀的腫瘤反應(yīng)。三個反應(yīng)者之一具有3級不良反應(yīng)(腹瀉)。
使用卡方檢驗(yàn)(p＝0.0146)和Fisher精確檢驗(yàn)(p＝0.0116)，在第1組和第2組中發(fā)現(xiàn)反應(yīng)患者和出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)患者之間在統(tǒng)計上的顯著相關(guān)性。見Fisher和Van Belle，1993，《BiostatisticsA methodology for theHealth Sciences》，J.Wiley and Sons，New York。
在另一個研究中，對十七個III或IV期惡性黑素瘤患者施用單劑抗CTLA-4抗體10D1。兩名患者具有部分反應(yīng)。沒有嚴(yán)重(3或4級)不良反應(yīng)。
與經(jīng)批準(zhǔn)的MELACINE方案(包括環(huán)磷酰胺)組合，對十三個惡性黑素瘤患者施用抗CTLA-4抗體10D1(間隔8周的兩次3mg/kg)。未觀察到客觀反應(yīng)及嚴(yán)重不良反應(yīng)。缺乏功效的可能原因包括(1)環(huán)磷酰胺的抑制作用，(2)長的服藥間隔，以及(3)MELACINE作為疫苗的低效能。
綜合上述研究結(jié)果，使用卡方檢驗(yàn)(p＝0.0028)和Fisher精確檢驗(yàn)(p＝0.0049)，發(fā)現(xiàn)在反應(yīng)患者和出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)患者之間在統(tǒng)計上的顯著相關(guān)性。
在十九個完全切除III或IV期黑素瘤的患者的研究中，將患者分為三組，以不同劑量并與gp100、酪氨酸酶和MART-1疫苗組合的抗CTLA-4抗體10D1(0.1、1.0和3.0mg/kg，每月一次，為期六個月，然后每三個月一次，施用兩次)。該研究顯示主要累及皮膚和內(nèi)臟的器官特異性自身免疫樣不良反應(yīng)的劑量依賴型誘導(dǎo)。自身免疫樣不良反應(yīng)是易于處理并可逆的。
在未經(jīng)化學(xué)治療的轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者的治療研究中，抗CTLA-4抗體10D1單獨(dú)或與細(xì)胞毒性化學(xué)治療(達(dá)卡巴嗪)組合來治療患者。入選二十四名患者。接受單一治療的十二名患者中的四人、以及接受組合治療的十二名患者中的三人經(jīng)歷了疾病進(jìn)展。觀察到一名皮疹和搔癢癥的3級SAE。
施用抗CTLA-4抗體與提示自身免疫應(yīng)答的嚴(yán)重不良反應(yīng)關(guān)聯(lián)。SAE很少發(fā)生在單獨(dú)給以單劑3mg/kg抗CTLA-4抗體之后。不良反應(yīng)更頻繁地出現(xiàn)在多次給以抗CTLA-4抗體和抗CTLA-4抗體與黑素瘤肽疫苗組合時。在涉及與肽疫苗聯(lián)合施用抗CTLA-4抗體的研究中，第2組中抗CTLA-4抗體劑量的減少降低了SAE比率。個別患者中抗CTLA-4抗體的血漿濃度與SAE的出現(xiàn)之間沒有發(fā)現(xiàn)可辨別的相關(guān)性。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析確定了BE與治療功效之間出乎意料但卻高度顯著的相關(guān)性。此實(shí)驗(yàn)觀察支持該發(fā)現(xiàn)，即抗CTLA-4抗體給藥高達(dá)誘導(dǎo)BE的程度(通過給藥量、頻率或二者)指示達(dá)到治療最大有效量。
除非指出，術(shù)語“患者”或“受試者”可交替使用，并指哺乳動物(例如人類患者和非人類靈長動物)和實(shí)驗(yàn)動物(例如兔、大鼠和小鼠)及其他動物。動物包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，如綿羊、狗、牛、禽、兩棲動物和爬行動物。
此處所用的“不良反應(yīng)”(AE)指任何不利(通常為計劃外的、甚至是不需要的)與使用醫(yī)學(xué)治療或操作關(guān)聯(lián)的體征(包括異常的實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn))、癥狀或疾病。大多數(shù)AE是暫時的，并且通過停止服藥或降低醫(yī)學(xué)治療劑量、或通過AE治療而逆轉(zhuǎn)。
國立癌癥研究所(National Cancer Institute)將“不良反應(yīng)”定義為可以考慮不考慮的與醫(yī)學(xué)治療或操作有關(guān)的與使用醫(yī)學(xué)治療或操作暫時關(guān)聯(lián)任何不利和計劃外的體征(包括異常的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果)、癥狀或疾病(“CancerTherapy Evaluation Program，Common Terminology Criteria for AdverseEvents”，3.0版，DCTD，NCI，NIH，DHHS，2003年3月31日(http//ctep.cancer.gov)，2003年4月16日出版(2003年5月27日站點(diǎn)訪問))?！安涣挤磻?yīng)”是治療的計劃外結(jié)果。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，不良反應(yīng)的誘導(dǎo)是指示對患者治療癌癥施用足夠劑量的抗CTLA-4抗體的標(biāo)志。在本發(fā)明上下文中，因其對基于抗CTLA-4的癌癥免疫治療起到替代性治療終點(diǎn)的作用，“不良”反應(yīng)并非是計劃外的，而是有意尋求的。因?yàn)榕c抗CTLA-4治療暫時關(guān)聯(lián)的體征、癥狀、異常實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)和疾病是通過本發(fā)明方法治療的蓄意結(jié)果，一些反應(yīng)在此稱為“臨界反應(yīng)(BE)”。
此處所用的“臨界反應(yīng)(BE)”是腫瘤位點(diǎn)的治療效果之外與施用抗CTLA-4抗體暫時關(guān)聯(lián)的蓄意的體征(包括異常的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果)、癥狀或疾病。例如，在與處于治療的黑素瘤空間上分離的位置上導(dǎo)致皮炎的自身免疫應(yīng)答就是BE。BE通常為自身免疫應(yīng)答，但是就本發(fā)明在臨床實(shí)踐中的用途而言，不要求自身免疫病因的病理學(xué)認(rèn)證；例如，如果從其他方面滿足該定義，臨床診斷的任何病因的結(jié)腸炎可以是臨界反應(yīng)。可以根據(jù)用于不良反應(yīng)的NCI分級系統(tǒng)對BE分級。
“自身免疫臨界反應(yīng)(ABE)”是自身免疫應(yīng)答的臨界反應(yīng)。實(shí)踐本發(fā)明時，優(yōu)選的臨界反應(yīng)是自身免疫臨界反應(yīng)。因此，頻繁地使用術(shù)語“自身免疫臨界反應(yīng)”描述本發(fā)明的治療方法。然而，應(yīng)當(dāng)理解，對這類方法有用的臨界反應(yīng)并不必須是免疫反應(yīng)。自身免疫臨界反應(yīng)是優(yōu)選的臨界反應(yīng)。
“嚴(yán)重的不良反應(yīng)(SAE)”是按照國家癌癥研究所(NCI)定義的3或4級不良反應(yīng)。通常將3級AE定義為嚴(yán)重的，通常將4級AE定義為“威脅生命的或致命的”。NCI也明確定義了3和4級不良反應(yīng)。例如，3級結(jié)腸炎由腹痛、發(fā)熱、伴腸梗阻的排便習(xí)慣改變或腹膜征(“Cancer TherapyEvaluation Program”，Common Terminology Criteria for Adverse Events，3.0版，DCTD、NCI、NIH、DHHS，2003年3月31日(http//ctep.cancer.gov)，出版日期2003年4月16日)。該出版物在此引用作為參考并附為附錄1。
“非腫瘤相關(guān)的自身免疫表現(xiàn)”是由或似乎由對非癌癥細(xì)胞上的抗原的免疫靶定而產(chǎn)生的臨床反應(yīng)。因?yàn)樵揃E與包括腫瘤免疫在內(nèi)的整體免疫的活化增高有關(guān)，這類BE是對癌癥細(xì)胞免疫介導(dǎo)的治療效果的特定指征。
術(shù)語“治療”包含施用本發(fā)明的化合物或制劑預(yù)防或延緩癥狀、并發(fā)癥或疾病生物化學(xué)指征的發(fā)作，緩解癥狀或阻止或抑制疾病、病癥或紊亂(例如自身免疫病)的進(jìn)一步發(fā)展。治療可以是疾病表現(xiàn)后的癥狀的預(yù)防性(預(yù)防或延緩疾病發(fā)作、或預(yù)防其臨床或亞臨床癥狀的表現(xiàn))或治療性抑制或緩解。
術(shù)語“晚期癌癥”指不再局限于原發(fā)腫瘤位點(diǎn)的癌癥或根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)的III或IV期癌癥。
術(shù)語“治療有效量”指足以誘導(dǎo)癌癥縮小、減緩癌癥進(jìn)展或終止癌癥進(jìn)展的抗CTLA-4抗體的劑量。另外，“治療有效量”指足以誘導(dǎo)癌癥患者部分或完全反應(yīng)的抗CTLA-4抗體的劑量。
此處所用的術(shù)語“淋巴細(xì)胞”具有本領(lǐng)域的一般意義，指見于血液、淋巴和淋巴組織的單核、非巨噬細(xì)胞白細(xì)胞，即B和T淋巴細(xì)胞。
術(shù)語“細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4”、“CTLA-4”、“CTLA4”“CTLA-4抗原”和“CD152”(見例如Murata(1999)Am.J.Pathol.155453-460)可交替使用，并包括人CTLA-4的變體、異構(gòu)體、種間同源物以及與CTLA-4具有至少一個共同表位的類似物(見例如Balzano(1992)Int.J.Cancer Suppl.728-32)。CTLA-4的完整序列見GenBank登錄號L15006。
術(shù)語“表位”指能夠與抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)決定簇。表位通常由分子的表面化學(xué)活性基團(tuán)組成，例如氨基酸或糖側(cè)鏈，并且通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征及特定的電荷特征。構(gòu)象和非構(gòu)象表位的區(qū)別在于，與前者而非后者的結(jié)合在變性劑的存在下消失。
完整的“抗體”至少包括通過二硫鍵相互連接的兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈。每條重鏈包括重鏈可變區(qū)(在此縮寫為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包括三個結(jié)構(gòu)域，即CH1、CH2和CH3。每條輕鏈包括一個輕鏈可變區(qū)(在此縮寫為LCVR或VL)和一個輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包括一個結(jié)構(gòu)域，即CL?？梢赃M(jìn)一步將VH和VL區(qū)細(xì)分為高變區(qū)(稱為決定簇互補(bǔ)區(qū)(CDR)，高變區(qū)綴以更加保守的的區(qū)域，稱為構(gòu)架區(qū)(FR)。每個VH和VL包括三個CDR和四個FR，從氨基端向羧基端以下列順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重和輕鏈可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。抗體恒定區(qū)可能介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，所述宿主組織或因子包括免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分(Clq)。術(shù)語抗體包括保留CTLA-4結(jié)合能力的完整抗體的抗原結(jié)合部分。結(jié)合部分的實(shí)例包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)F(ab′)2片段，即包含在鉸鏈區(qū)由二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段，(v)由VH結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341544-546)；以及(vi)單獨(dú)的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)。另外，盡管Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域(即VL和VH)由分離的基因編碼，可以使用重組方法通過合成接頭將其連接，所述合成接頭使VL和VH能夠以配對形成單價分子的單個蛋白質(zhì)鏈產(chǎn)生(稱為單鏈Fv(seFv)；見例如Bird等人，Science 1998；242423-426；及Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1988；855879-5883)。這類單鏈抗體作為參考包括于術(shù)語“抗體”中?？梢酝ㄟ^重組技術(shù)或酶或化學(xué)切割完整抗體制備片段。
CTLA-4抗體可以與人CTLA-4上的表位結(jié)合，從而抑制CTLA-4與人B7反受體相互作用。因?yàn)槿薈TLA-4與人B7的相互作用傳導(dǎo)引起具有人CTLA-4受體的T細(xì)胞失活的信號，拮抗該相互作用有效地誘導(dǎo)、加強(qiáng)或延長具有人CTLA-4受體的T細(xì)胞的活化，從而延長或加強(qiáng)免疫應(yīng)答。在美國專利No.5,811,097；5,855,887；6,051,227；PCT出版物WO 01/14424和WO 00/37504；以及美國出版物No.2002/0039581 A1中對抗CTLA-4抗體進(jìn)行了描述。為了說明抗CTLA-4抗體，所有這些參考文獻(xiàn)都在此明確引用為參考。優(yōu)選的臨床抗CTLA-4抗體是如WO 01/14424中所公開的人單克隆抗體10D1(MDX010)。
短語“免疫細(xì)胞應(yīng)答”指免疫系統(tǒng)細(xì)胞對在免疫細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生生物化學(xué)改變的外部或內(nèi)部刺激(例如抗原、細(xì)胞因子、趨化因子和其它細(xì)胞)的應(yīng)答，所述應(yīng)答引起免疫細(xì)胞遷移、靶細(xì)胞的殺傷、噬菌作用、抗體和免疫應(yīng)答的其它可溶性效應(yīng)子的產(chǎn)生等。
術(shù)語“T淋巴細(xì)胞反應(yīng)”和“T淋巴細(xì)胞活性”在此可交替使用以指依賴于T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答組分(即T淋巴細(xì)胞向輔助、細(xì)胞毒性殺傷或抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和/或分化、T淋巴細(xì)胞向B淋巴細(xì)胞提供引起或防止抗體產(chǎn)生的信號、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的特異性靶細(xì)胞殺傷、以及可溶性因子(例如調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞功能的細(xì)胞因子)的釋放)。
術(shù)語“免疫應(yīng)答”指淋巴細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、噬菌細(xì)胞、粒細(xì)胞以及由上述細(xì)胞或肝臟產(chǎn)生的可溶性大分子(包括抗體、細(xì)胞因子和補(bǔ)體)的協(xié)同作用，該協(xié)同所用引起入侵病原體、被病原體感染的細(xì)胞或組織、癌細(xì)胞或正常人體細(xì)胞或組織(在自身免疫性或病理性感染的情況下)的選擇性損傷、破壞或從人體消除。
如此處所使用，短語“細(xì)胞表面受體”包括能夠接受信號并經(jīng)過細(xì)胞質(zhì)膜傳遞這類信號的分子或分子復(fù)合物。本發(fā)明的“細(xì)胞表面受體”的實(shí)例是T細(xì)胞受體(TCR)或CTLA-4的B7配體。
術(shù)語“非特異性T細(xì)胞活化”指獨(dú)立于其抗原特異性的T細(xì)胞的刺激。
“靶細(xì)胞”指受試者(例如人或動物)體內(nèi)能夠被組合物(例如本發(fā)明的人序列抗體或人單克隆抗體；本發(fā)明的雙特異性或多特異性分子)靶定的任何不需要的細(xì)胞。靶細(xì)胞可以是表達(dá)或過表達(dá)人CTLA-4的細(xì)胞。表達(dá)人CTLA-4的細(xì)胞可以包括腫瘤(例如淋巴瘤)細(xì)胞。
本發(fā)明也包括經(jīng)過修飾的抗體。術(shù)語“經(jīng)過修飾的抗體”包括經(jīng)過例如刪除、加入或替換抗體部分而修飾的抗體，例如單克隆抗體、嵌合抗體和人源化抗體。例如，可以通過刪除恒定區(qū)并以旨在增加抗體半壽期(例如血清半壽期)、穩(wěn)定性或親合力的恒定區(qū)取代而修飾抗體。
本發(fā)明的抗體綴合物可以用于修飾給定的生物反應(yīng)或產(chǎn)生生物反應(yīng)(例如招募效應(yīng)細(xì)胞)。不應(yīng)將藥物部分理解為限制于經(jīng)典化學(xué)治療劑。例如，藥物部分可以是具有所需生物活性的蛋白質(zhì)或多肽。這類蛋白質(zhì)可以包括例如酶活性毒素(例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素或白喉毒素)或其活性片段、蛋白質(zhì)(例如腫瘤壞死因子或干擾素α)或生物反應(yīng)修飾因子(例如淋巴因子、白介素1(“IL-1”)、白介素2(“IL-2”)、白介素6(“IL-6”)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒細(xì)胞集落刺激因子(“G-CSF”))或其他生長因子。
臨界反應(yīng)的誘導(dǎo)本發(fā)明方法目的是在避免用藥過量的同時在最短期的時間內(nèi)實(shí)現(xiàn)BE。這通過滴定誘導(dǎo)BE的藥物治療劑量來完成。滴定達(dá)到所需效果的藥物治療劑量的方法在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域廣為人知，例如在高血壓治療中，滴定抗高血壓藥物治療的劑量以實(shí)現(xiàn)對血壓的所需效果。這類方法包括例如以固定的給藥間隔重復(fù)相同的藥物治療給藥劑量，但是優(yōu)選增加給藥劑量、降低給藥間隔或改變給藥劑量與給藥間隔相組合。
抗CTLA-4抗體的初始劑量一般包括每3至8周施用3至10mg/kg抗體?？笴TLA-4抗體初次給藥后，由臨床醫(yī)師對患者監(jiān)測足夠長的時期以檢測BE(檢測方法見下)，該時期一般超過用藥間隔過程或1至4周。由于BE可能要求自身反應(yīng)T細(xì)胞的擴(kuò)充，預(yù)期該反應(yīng)將在任何治療有效量后1至4周出現(xiàn)。監(jiān)測期中沒有出現(xiàn)BE，對臨床醫(yī)師是要求另外施用抗CTLA-4抗體的指征。在一劑CTLA-4抗體后，對患者監(jiān)測BE，施用額外的用量直到至少誘導(dǎo)并檢測到BE。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可能受先前免疫治療、病情、年齡等影響的因素(包括患者的免疫狀態(tài))可以影響引起B(yǎng)E所要求的劑量。熟練的臨床醫(yī)師將能在施用初始劑量和后續(xù)劑量誘導(dǎo)BE時考慮到這些因素。在確定誘導(dǎo)BE的初始劑量和后續(xù)劑量時應(yīng)當(dāng)考慮這些因素。
由于本發(fā)明的方法是在最短的時期內(nèi)誘導(dǎo)BE而不引起患者用藥過量，將監(jiān)測患者BE的時期縮短到1至4周、更優(yōu)選2至3周是有利的。如果要求額外劑量實(shí)現(xiàn)BE，可以增加前期用量的例如10至100％。例如，如果患者最初接受3mg/kg并且計劃3周后接受第二劑，但是沒有在3周時期后實(shí)現(xiàn)BE，則患者的劑量可以增加到6mg/kg(即增加100％)。在另一個實(shí)例中，如果患者最初接受10mg/kg并且計劃8周后接受第二劑，但是沒有在監(jiān)測4周后實(shí)現(xiàn)BE，則可以將患者的給藥間隔從8周降至4周，同時保持10mg/kg的用量。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在實(shí)踐本發(fā)明方法以誘導(dǎo)BE中進(jìn)行多種用藥量和間隔的變化。
臨界反應(yīng)的檢測BE可以表現(xiàn)為癥狀、體征或?qū)嶒?yàn)室檢查異常。因此，這類反應(yīng)的檢測要求患者病史(關(guān)于主訴)、體格檢查和/或影像研究(關(guān)于體征)、以及實(shí)驗(yàn)室研究(關(guān)于實(shí)驗(yàn)室檢查異常)。臨床醫(yī)師可以根據(jù)最初的發(fā)現(xiàn)選擇定制額外的研究，例如內(nèi)窺鏡檢查或活組織檢查。
臨床醫(yī)師特別要留心關(guān)于例如累及皮膚(皮炎、皮疹、搔癢癥)、胃腸道(腹痛、壓痛、腹瀉)、內(nèi)分泌系統(tǒng)(激素水平抑制)和肝臟(肝炎、肝功能測試升高)這類更常見的BE的檢測。然而，臨床醫(yī)師必須準(zhǔn)備檢測任何BE?！癈ancer Therapy Evaluation Program，Common TerminologyCriteria for Adverse Events”列出了BE(不良反應(yīng))并提供這些反應(yīng)的分級體系。該出版物也可以作為幫助臨床醫(yī)師監(jiān)測患者并檢測BE的指導(dǎo)。
患者監(jiān)測包括關(guān)于主訴的定期全面病史和綜合體格檢查。檢查每個對BE易感的器官系統(tǒng)。例如，涉及皮膚病系統(tǒng)的病史包括關(guān)于發(fā)癢、鱗屑、疼痛和皮膚顏色改變的問題。皮膚的體格檢查包括例如所有可見皮膚的嚴(yán)密檢查?；谂R床醫(yī)師的判斷，進(jìn)一步的研究可以包括例如皮膚活組織檢查。
不易于體格檢查及無癥狀的器官系統(tǒng)的BE需要額外依賴實(shí)驗(yàn)室研究和影像研究。例如，使用肝功能檢測和CT掃描可能比體格檢查在更早期檢測到肝炎。
BE的檢測依賴于施用抗CTLA-4抗體后對患者的臨床監(jiān)測。臨床醫(yī)師可以使用大量診斷方法檢測BE。
癌癥治療本發(fā)明的CTLA-4抗體及替代性治療終點(diǎn)可用于惡性腫瘤治療，其中患者先前接受癌癥疫苗或證實(shí)對腫瘤具有某種水平的天然保護(hù)性免疫力。該抗體可以作為單獨(dú)試劑或與一種或多種其他治療劑組合或聯(lián)合用于腫瘤免疫治療的疫苗使用，例如與化學(xué)治療、放射治療、細(xì)胞因子、趨化因子和其它生物信號分子、腫瘤特異性疫苗、自體和異源干細(xì)胞救援(例如用于增強(qiáng)移植物抗腫瘤效果)、其他治療性抗體、分子靶向治療、抗血管生成治療、具有治療目的的感染劑(例如腫瘤定位的細(xì)菌)及基因治療聯(lián)合?？梢詥未位蚨啻问┯迷摽贵w?？梢栽谧魟┗蛐伦魟┲委熤袉为?dú)或與上述治療聯(lián)合使用該抗體。在本發(fā)明的方法中也可以使用旨在治療BE的治療劑(例如類固醇)。因此，在診斷BE后對患者施用治療BE的治療試劑。
本發(fā)明針對腫瘤的治療，特別為免疫學(xué)敏感的腫瘤治療，這些腫瘤是對免疫治療有反應(yīng)的癌癥或出現(xiàn)于免疫受損的患者中的癌癥。在一個實(shí)施方案中，腫瘤是實(shí)體腫瘤?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明治療的腫瘤實(shí)例包括肉瘤和癌，例如(但是不限于)纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴血管肉瘤、淋巴血管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、淋巴瘤、黑素瘤、卡波西肉瘤、尤文氏肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝瘤、膽管癌、絨毛癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎癌、腎母細(xì)胞瘤、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星型細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦[脊]膜瘤、黑素瘤神經(jīng)母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。
在另一個實(shí)施方案中，治療或預(yù)防上皮組織(例如子宮頸、食道和肺的上皮組織)異常增殖(例如組織轉(zhuǎn)化和發(fā)育異常)。因此，本發(fā)明提供已知或可疑為腫瘤形成或癌前病變(preceding progression to neoplasia orcancer)的病癥(具體而言，出現(xiàn)由增生、轉(zhuǎn)化、或更具體的發(fā)育異常組成的非腫瘤形成性細(xì)胞生長)的治療(關(guān)于這類異常生長情況的綜述，見Robbins和Angell，1976，《Basic Pathology》，第二版，W.B.Saunders Co.，Philadelphia，68-79頁)。增生是受控制的細(xì)胞增殖形式，涉及組織或器官內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的增加而沒有結(jié)構(gòu)或功能的顯著改變。但是作為一個實(shí)例，子宮內(nèi)膜的增生經(jīng)常出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌之前。組織轉(zhuǎn)化是一種類型成熟或充分分化細(xì)胞替代另一類型成熟細(xì)胞的受控制的細(xì)胞生長形式。轉(zhuǎn)化可以出現(xiàn)于上皮或結(jié)締組織細(xì)胞。非典型轉(zhuǎn)化包括一定程度無序轉(zhuǎn)化的上皮細(xì)胞。發(fā)育異常多為癌癥的預(yù)兆，主要見于上皮細(xì)胞；它是非腫瘤形成性細(xì)胞生長的最紊亂形式，包括個體細(xì)胞均一性和細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位的丟失。發(fā)育異常的細(xì)胞通常具有異常巨大的深染的核，并呈現(xiàn)復(fù)型。發(fā)育異常特征性地出現(xiàn)于存在慢性刺激或炎癥之處，常見于子宮頸、呼吸道、口腔和膽囊。關(guān)于這類紊亂的綜述，見Fishman等人，1985，《Medicine》，第二版，J.B.Lippincott Co.，Philadelphia。
本發(fā)明也針對非惡性腫瘤和涉及血管發(fā)生增加不適當(dāng)?shù)?inappropriate)細(xì)胞或組織生長的其他紊亂的治療，所述治療通過向發(fā)生不適當(dāng)生長的組織施用治療有效量的本發(fā)明載體。例如，考慮本發(fā)明可用于動靜脈(AV)畸形(特別是顱內(nèi)位點(diǎn))的治療。本發(fā)明也可以用于治療牛皮癬(以炎癥和血管增殖為特征的皮膚病)和良性前列腺肥大(與炎癥并可能與血管增殖有關(guān)的疾病)。也設(shè)想治療其他過度增生(hyperproliferative)紊亂。
使用抗CTLA-4抗體的治療可用于激活以癌癥疫苗治療的患者體內(nèi)預(yù)先存在的記憶反應(yīng)。因此，可以選擇經(jīng)疫苗治療的患者進(jìn)行進(jìn)一步的使用抗CTLA-4抗體的治療，從而進(jìn)一步誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答。
在一個實(shí)施方案中，先以抗癌癥疫苗治療患者。癌癥抗原可以是例如黑素瘤抗原或前列腺癌抗原。在一個實(shí)施方案中，患者為人。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗CTLA-4抗體是人抗CTLA-4抗體。本發(fā)明優(yōu)選的人抗CTLA-4抗體是10D1，但是可以以任何人CTLA-4抗體使用本發(fā)明的方法。在另一個實(shí)施方案中，抗CTLA-4抗體是重組抗體，例如嵌合或人源化(例如CDR嫁接的)抗CTLA-4抗體。
由抗體阻斷CTLA-4可以增強(qiáng)患者對癌細(xì)胞的記憶或再次免疫應(yīng)答。CTLA-4抗體可以與免疫原性劑組合，或單獨(dú)使用以刺激免疫力，所述免疫原性劑例如癌細(xì)胞、純化的腫瘤抗原(包括重組蛋白質(zhì)、肽和碳水化合物分子)、細(xì)胞及以編碼免疫刺激細(xì)胞因子和細(xì)胞表面抗原的基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，例如B7(見例如Hurwitz，A.等人，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.1998；9510067-10071)。
CTLA-4阻斷在接種方案之后是有效的。已設(shè)計許多抗腫瘤的接種實(shí)驗(yàn)策略(見Rosenberg，S.，2000，《Development of Cancer Vaccines》，ASCOEducational Book Spring60-62；Logothetis，C.，2000，ASCO EducationalBook Spring300-302；Khayat，D.2000，ASCO Educational Book Spring414-428；Foon，K.2000，ASCO Educational Book Spring730-738；也見DeVita，V.等人(編)，1997，《CancerPrinciples and Practice of Oncology》，第五版中Restifo，N.和Sznol，M.，《Cancer Vaccines》，第61章，3023-3043頁)。這些策略之一使用自體或異源腫瘤細(xì)胞制備疫苗。腫瘤細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)表達(dá)GM-CSF時，顯示這些細(xì)胞疫苗最有效。對于腫瘤疫苗接種，顯示GM-CSF是抗原呈遞的有效活化物(Dranoff等人，Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.1993；903539-43)。
在大量實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型中，例如哺乳動物癌癥(Hurwitz等人，1998，同上)、原發(fā)性前列腺癌(Hurwitz等人，Cancer Research 2000；602444-8)和黑素瘤(van Elsas等人，J.Exp.Med.1999，190355-66)，加強(qiáng)GM-CSF修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗的抗CTLA-4阻斷改進(jìn)了疫苗效力。在這些實(shí)例中，造成非免疫原性腫瘤(例如B16黑素瘤)對免疫系統(tǒng)的破壞敏感。也可以修飾腫瘤細(xì)胞疫苗表達(dá)其他免疫激活物，其中例如IL2和協(xié)同刺激分子。
多種腫瘤中的基因表達(dá)和大規(guī)?；虮磉_(dá)模式研究導(dǎo)致所謂“腫瘤特異性抗原”的定義(Rosenberg，Immunity 1999；10281-7)。在許多情況下，這些腫瘤特異性抗原是在腫瘤和腫瘤發(fā)生細(xì)胞中表達(dá)的分化抗原，例如黑素細(xì)胞抗原gp100、MAGE抗原、Trp-2。更重要的是，可以證實(shí)這些抗原中許多是見于宿主體內(nèi)的腫瘤特異性T細(xì)胞的靶標(biāo)。CTLA-4阻斷可以作為加強(qiáng)劑，與基于腫瘤中表達(dá)的蛋白質(zhì)和/或肽的重組版本的疫苗聯(lián)合使用，從而加強(qiáng)對這些蛋白質(zhì)的再次或記憶免疫應(yīng)答。免疫系統(tǒng)通常將這些蛋白質(zhì)視為自身抗原，因此對其耐受。腫瘤抗原也可以包括染色體端粒合成所必需的、在85％以上的人類癌癥及僅少數(shù)機(jī)體組織中表達(dá)的蛋白質(zhì)端粒酶(Kim等人，Science 1994；2662011-2013)。可以通過多種方法保護(hù)這些機(jī)體組織免于免疫攻擊。腫瘤抗原也可以是因?yàn)轶w細(xì)胞突變而表達(dá)于癌細(xì)胞中的“新抗原”或來自B細(xì)胞腫瘤的獨(dú)特型，其中體細(xì)胞突變改變了蛋白質(zhì)序列或在兩個無關(guān)序列之間產(chǎn)生融合蛋白質(zhì)(即費(fèi)城染色體中的bcr-ab1)。其他腫瘤疫苗可以包括人類癌癥中涉及的病毒(例如人乳突瘤病毒(Human Papilloma Viruses，HPV)、肝炎病毒(HBV和HCV)和卡波西肉瘤(Kapos′s Herpes Sarcoma Virus，KHSV)的蛋白質(zhì)?？梢耘cCTLA-4阻斷聯(lián)合使用的另一種形式的腫瘤特異性抗原是從腫瘤組織自身分離、經(jīng)過純化的熱休克蛋白(HSP)。這些熱休克蛋白含有腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)片段，這些HSP向抗原呈遞細(xì)胞遞送以產(chǎn)生腫瘤免疫非常有效(Suot和Srivastava，Science 1995；2691585-1588；Tamura等人，Science 1997，278117-120)。
樹突狀細(xì)胞(DC)是可用于引發(fā)抗原特異性應(yīng)答的有效的抗原呈遞細(xì)胞。DC可以離體產(chǎn)生，并可負(fù)載多種蛋白質(zhì)和肽抗原以及腫瘤細(xì)胞提取物(Nestle等人，Nature Medicine 1998；4328-332)。也可以通過遺傳學(xué)方法轉(zhuǎn)導(dǎo)DC以表達(dá)這些腫瘤抗原。為了免疫，也可以將DC直接與腫瘤細(xì)胞融合(Kugler等人，Nature Medicine 2000；6332-336)。作為疫苗接種的方法，可以用CTLA-4阻斷有效增強(qiáng)DC免疫而活化更有效的抗腫瘤反應(yīng)。
另一類可以與CTLA-4阻斷組合的黑素瘤疫苗是從黑素瘤細(xì)胞系裂解物制備、聯(lián)合免疫佐劑的疫苗(例如MELACINE疫苗，該疫苗是兩個人類黑素瘤細(xì)胞系的裂解物加DETOXTM免疫佐劑的混合物)?？梢杂每笴TLA-4加強(qiáng)疫苗治療，伴隨或不伴隨額外的化學(xué)治療。
感染性疾病本發(fā)明的其他方法用于治療曾暴露于特定毒素或病原體的患者。與上文討論的其在腫瘤當(dāng)中的應(yīng)用相似，抗體介導(dǎo)的CTLA-4阻斷和替代性治療終點(diǎn)可以單獨(dú)使用、或作為佐劑與疫苗組合以刺激對病原體、毒素和自身抗原的再次或記憶免疫應(yīng)答。已證實(shí)CTLA-4阻斷在巴西日圓線蟲(Nippostrongylus brasiliensis)(McCoy，K.等人，(1997)186(2)；183-187)和杜氏利氏曼原蟲(Leishmania donovani)(Murphy，M.等人，(1998)J.Immunol.1614153-4160)感染的急性期有效。該治療途徑可能對其特別有用的病原體的實(shí)例包括目前尚無有效疫苗的病原體、或傳統(tǒng)疫苗不完全有效的病原體。這包括(但不限于)HIV、肝炎(甲、乙和丙)、流行性感冒、皰疹、賈第蟲(Giardia)、瘧疾(Malaria)、利氏曼原蟲(Leishmania)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)。，CTLA-4阻斷在加強(qiáng)抗HIV這類在感染過程中呈現(xiàn)變化抗原的媒介所建立的感染的免疫力中尤其有用。在施用抗人CTLA-4時，這些新的表位被識別為外源的，從而激發(fā)強(qiáng)烈的T細(xì)胞應(yīng)答，該應(yīng)答不受通過CTLA-4的負(fù)信號抑制。
引起可用本發(fā)明方法治療的感染的致病性病毒的一些實(shí)例包括肝炎(甲、乙或丙)、皰疹病毒(例如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、Epstein Barr病毒)、腺病毒(adenovirus)、流感病毒(influenza virus)、黃病毒(flaviviruses)、艾柯病毒(echovirus)、鼻病毒(rhinovirus)、柯薩奇病毒(coxsackie virus)、冠狀病毒(cornovirus)、呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytial virus)、腮腺炎病毒(mumps virus)、輪狀病毒(rotavirus)、麻疹病毒(measles virus)、風(fēng)疹病毒(rubella virus)、微小病毒(parvovirus)、痘病毒(vaccina virus)、HTLV病毒、登革熱病毒(dengue virus)、乳頭瘤病毒(papillomavirus)、軟疣病毒(molluscum virus)、脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)、狂犬病毒(rabies virus)、JC病毒和蟲媒腦炎病毒(arboviralencephalitis virus)。
引起可以用本發(fā)明方法治療的感染的致病性細(xì)菌的一些實(shí)例包括衣原體(Chlamydia)、立克次體菌(rickettsial bacteria)、結(jié)核菌(mycobacteria)、葡萄球菌(staphylococci)、鏈球菌(streptococci)、肺炎球菌(pneumonococci)、腦膜炎球菌(meningococci)和conococci、克雷伯菌(klebsiella)、變形桿菌(proteus)、沙雷氏菌(serratia)、假單胞菌(pseudomonas)、軍團(tuán)菌(legionella)、白喉(diphtheria)、沙門菌(salmonella)、桿菌(bacilli)、霍亂菌(cholera)、破傷風(fēng)(tetanus)、肉毒菌(botulism)、炭疽(anthrax)、鼠疫(plague)、鉤端螺旋體(leptospirosis)和萊姆病細(xì)菌(Lyme disease bacteria)。
引起可以用本發(fā)明方法治療的感染的致病性真菌的一些實(shí)例包括假絲酵母(Candida)(白酵母(albicans)、克柔酵母(krusei)、光滑酵母(glabrata)、熱帶酵母(tropicalis)等)、新隱球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉(Aspergillus)(煙曲霉(fumigatus)、黑曲霉(niger)等)、毛霉屬(GenusMucorales)(毛霉(Mucor)、犁頭霉(Absidia)、根霉(Rhizophus))、申克氏孢子菌絲(sporothrix schenckii)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、副球孢子菌(Paracoccidioidesbrasiliensis)、厭酷球孢子菌(Coccidioides immitis)和莢膜組織胞漿菌(Histoplasma capsulatum)。
引起可以用本發(fā)明方法治療的感染的致病性寄生蟲的一些實(shí)例包括溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoeba histolytica)、結(jié)腸小袋纖毛蟲(Balantidium coli)、福氏耐格里阿米巴(Naegleria fowleri)、棘阿米巴(Acanthamoeba sp.)、藍(lán)氏賈第蟲(Giardia lambia)、隱孢子蟲(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺孢子蟲(Pneumocystis carinii)、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax)、巴貝斯蟲(Babesiamicroti)、布氏錐蟲(Trypanosoma brucei)、枯西錐蟲(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani)、剛地弓形蟲(Toxoplasma gondi)、巴西日圓線蟲(Nippostrongylus brasiliensis)。
促進(jìn)有利的自身免疫應(yīng)答抗CTLA-4抗體及替代性治療終點(diǎn)激發(fā)和擴(kuò)增自身免疫應(yīng)答的能力在許多實(shí)驗(yàn)體系(EAE-實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎，MS小鼠模型(Perrin等人，J Immunol 1996；1571333-1336)；糖尿病(Luhder等人，1998，如上))中得到證明。事實(shí)上，使用腫瘤細(xì)胞和肽疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤反應(yīng)揭示許多抗腫瘤反應(yīng)涉及抗自體反應(yīng)性(anti-self reactivities)(抗CTLA-4+GM-CSF修飾的B16黑素瘤中觀察到褪色，van Elsas等人，如上；在Trp-2疫苗接種小鼠中的褪色(Overwijk等人，Proc.Natl.Aead.Sci.U.S.A.1999962982-2987)；由TRAMP腫瘤細(xì)胞疫苗引起的自身免疫前列腺炎(Hurwitz 2000，如上)、黑素瘤肽抗原疫苗接種以及在人類臨床試驗(yàn)中觀察到的白癜風(fēng)(Rosenberg和White，J Immunother Emphasis TumorImmunol 1996；1981-4))。
因此，為了為疾病治療設(shè)計有效產(chǎn)生針對自身蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答的疫苗接種方案，可以考慮聯(lián)合不同自身蛋白質(zhì)使用抗CTLA-4加強(qiáng)。例如，阿爾茨海默病涉及Aβ肽在腦內(nèi)淀粉樣沉淀中的不當(dāng)積聚；抗淀粉樣蛋白的抗體應(yīng)答可以清除這些淀粉樣沉淀(Sehenk等人，Nature 1999；400173-177)。
也可以使用其他自身蛋白質(zhì)作為靶標(biāo)，例如IgE用于過敏和哮喘、TNF用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。最后，可以使用抗CTLA-4抗體誘導(dǎo)對多種激素的抗體應(yīng)答。針對生殖激素的中和抗體應(yīng)答可以用于避孕。也可以考慮將針對特定的腫瘤生長所必需的激素或其它可溶性因子的中和抗體應(yīng)答作為為可能的疫苗接種目標(biāo)。
上述使用抗CTLA-4抗體和替代治療性終點(diǎn)的類似方法可用于誘導(dǎo)治療性自身免疫應(yīng)答以治療其他自身抗原不當(dāng)積聚的患者，其中自身抗原例如淀粉樣沉淀(包括阿爾茨海默病腦中的Aβ)、細(xì)胞因子(例如TNFα和IgE)。
實(shí)施例也通過下列實(shí)施例描述本發(fā)明。然而，這些或該說明書中無論何處的其他實(shí)例的用途僅是說明性的，決不限制本發(fā)明或任何列舉術(shù)語的范圍和含意。同樣，本發(fā)明不限于任何在此描述的具體優(yōu)選實(shí)施方案。實(shí)際上，在閱讀本說明書的基礎(chǔ)上，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，本發(fā)明的許多修改和變化是顯而易見并且可以建立而不背離本發(fā)明精神和范圍的。本發(fā)明因此僅受限于附帶的權(quán)利要求條款連同權(quán)利要求所授權(quán)的全部范圍的等價物。實(shí)施例1抗CTLA-4抗體與黑素瘤肽/IFA對于切除的III/IV期黑素瘤的臨床試驗(yàn)結(jié)果十九名經(jīng)切除的III期(兩名患者)或IV期(17名患者)黑素瘤患者接受0.3、1和3mg/kg劑量的CTLA-4抗體10D1)，并且每次注射含有完全弗氏佐劑(IFA)的gp100/酪氨酸酶/MART-1肽疫苗。患者為HLA-A2+，無先前IFN-α治療。腫瘤對gp100、酪氨酸酶和/或MART-1為IHC陽性。排除標(biāo)準(zhǔn)包括自身免疫疾病和之前接受MDX-010或MART-1、gp100和酪氨酸酶肽治療。酪氨酸酶368-376(370D)、MART-1 26-35(27L)和gp100209-217(210M)肽各與野生型相差一個增加HLA結(jié)合的氨基酸修飾。
6周內(nèi)每4周使用抗CTLA-4抗體和肽疫苗，然后每3個月施用兩次(共8劑)。每次以每劑1mg乳化于IFA中皮下施用肽疫苗。三組分別靜脈接受0.3、1.0或3.0mg/kg的抗CTLA-4抗體。
表1-疾病狀態(tài)和藥物相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)

表2-給藥概括

*由于出現(xiàn)自身免疫表現(xiàn)，中止MDX-010，肽繼續(xù)
SAE包括1)一名40歲男性在首次輸入3mg/kg抗CTLA-4抗體后出現(xiàn)2級腹瀉(兩天)和3級腹痛(十天)。腹部和盆腔CT掃描顯示末端回腸和盲腸壁的增厚及炎癥。四天后重復(fù)CT掃描顯示腹部發(fā)現(xiàn)物的消退?；颊甙Y狀得到治療，于發(fā)作后第16天消退。
2)一名42歲女性在第二次輸入3mg/kg抗CTLA-4抗體六天后出現(xiàn)3級腹瀉。以靜脈內(nèi)水化作用和抗生素治療該患者。
3)一名54歲男性在第三次輸入3mg/kg抗CTLA-4抗體后出現(xiàn)3級腹瀉?；颊叽蟊惆准?xì)胞(WBC)陽性。腹瀉經(jīng)抗生素治療，于發(fā)作后第8天消退。
4)一名56歲男性在第二次輸入1mg/kg抗CTLA-4抗體后出現(xiàn)3級血性腹瀉和雙側(cè)葡萄膜炎。患者大便白細(xì)胞陽性，乙狀結(jié)腸鏡檢查顯示腸壁感染，CT掃描顯示盲腸壁增厚。患者對口腔和局部類固醇治療具有幾乎即刻的反應(yīng)。所有癥狀在三個月后消退。
結(jié)論在最高劑量隊(duì)列沒有復(fù)發(fā)。觀察到抗CTLA-4抗體劑量依賴的、器官特異性自身免疫樣不良反應(yīng)。這些不良反應(yīng)是易于處理并且可逆的。
實(shí)施例2外科不可切除的III或IV期黑素瘤患者中單劑抗CTLA-4抗體的臨床試驗(yàn)結(jié)果執(zhí)行公開標(biāo)記的I期多中心(multicenter)臨床試驗(yàn)，在十七名具有不可切除的進(jìn)行性惡性黑素瘤患者中評價MAb 10D1的安全性和藥物動力學(xué)。中值年齡為59歲(范圍20-79)。九名患者先前接受過免疫治療，六名經(jīng)過先前放射治療，五名經(jīng)過先前化學(xué)治療。所有患者在90分鐘內(nèi)靜脈接受3mg/kg單劑10D1，然后隨訪毒性、藥物動力學(xué)、循環(huán)T細(xì)胞活化和臨床產(chǎn)出。所有輸注完成，僅有輕微不良反應(yīng)。七名患者具有輕微、可逆的皮疹或搔癢癥?？贵w的血漿水平持續(xù)一至四個月?；罨闹車鶷細(xì)胞沒有顯著增加，除輕微皮疹之外沒有臨床自身免疫性跡象。兩個患者經(jīng)歷了部分反應(yīng)，包括三個軟組織腫塊的消退和肺部腫塊消退超過50％。此外，經(jīng)歷肺部腫塊消退超過50％的患者是先前經(jīng)過黑素瘤疫苗治療的患者，提示抗CTLA-4抗體治療能夠激活預(yù)先存在的對腫瘤的記憶應(yīng)答。該研究的結(jié)果以明確免疫學(xué)和抗腫瘤活性證據(jù)說明抗CTLA-4治療是良好耐受的。
表2-患者特征及結(jié)果概括

1H＝激素，R＝放射治療，C＝化學(xué)治療，I＝免疫治療2PD＝進(jìn)行性疾病，PR＝部分反應(yīng)，SD＝穩(wěn)定疾病3包括IL-2和樹突狀細(xì)胞疫苗的免疫治療。
實(shí)施例3抗CTLA-4抗體與gp100肽疫苗組合的臨床試驗(yàn)結(jié)果A.第1組十四名進(jìn)行性IV期黑素瘤患者接受抗CTLA-4抗體10D1，與兩個HLA-A*0201限制的gp100肽聯(lián)合接種?；颊咛卣鞲爬ㄓ诒?中。
表3-患者特征和結(jié)果

1C＝化學(xué)治療，H＝激素，I＝免疫治療，R＝放射治療2pD＝進(jìn)行性疾病，SD＝穩(wěn)定疾病，PR＝部分反應(yīng)，CR＝完全反應(yīng)3CNS＝中樞神經(jīng)系統(tǒng)4患者病癥在顯示陽性應(yīng)答之前表現(xiàn)得更差5LFT＝肝功能測試所有患者為具有卡氏行為狀態(tài)評分(Karnofsky performance status)＞60％的HLA 0201+。六個患者具有內(nèi)臟轉(zhuǎn)移?；颊邲]有自身免疫或免疫缺陷疾病的跡象。所有患者其原發(fā)病灶經(jīng)過先前外科手術(shù)。六個患者經(jīng)過先前化學(xué)治療。十一個患者經(jīng)過先前免疫治療，包括干擾素α(患者2、5-8、10、12和13)、低劑量IL-2(患者2、5和13)、高劑量靜脈內(nèi)IL-2(患者4、7和8)、全細(xì)胞黑素瘤疫苗(患者1、2和6)、NY-ESO-1肽疫苗(患者4和5)以及GM-CSF(患者9)?；颊呶唇?jīng)先前gp100免疫，在治療前三個月內(nèi)沒有經(jīng)過系統(tǒng)治療。
每三周施用一個治療周期，治療周期由下列組成90分鐘內(nèi)靜脈施用3mg/kg抗CTLA-4抗體10D1、隨后在一個肢端皮下注射1mg乳化于完全弗氏佐劑(IFA)中的gp100209-217(210M)肽(IMDQVPFSV)、并在另一肢端皮下注射1mg乳化于IFA的gpl00280-288(288V)肽(YLEPGPVTV)(合成肽由國家癌癥中心癌癥治療法評估計劃小組提供)?；颊咴谥委熐凹懊績蓚€治療周期后三周接受血液采集。通過Ficoll-Hypaque分離來分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)，并在含有10％二甲亞砜的熱滅活人AB血清中冰凍保存，于-180℃儲存至進(jìn)一步使用。
使用胸腔、腹部和盆腔計算軸向?qū)游鯴射線照像術(shù)(CT)及腦磁共振成像(MRI)評價臨床反應(yīng)。在開始治療4周內(nèi)及然后每兩個治療周期后執(zhí)行這些影像研究。需要評估疾病位點(diǎn)時使用額外的放射學(xué)研究。在治療前后計算各患者腫瘤的最長直徑總和(世界衛(wèi)生組織RECIST標(biāo)準(zhǔn))。將部分反應(yīng)定義為所有可評估轉(zhuǎn)移的最長直徑總和持續(xù)至少一個月、至少30％但是低于100％的下降，并且沒有新的或增大的腫瘤。將完全反應(yīng)定義為所有可評估轉(zhuǎn)移的最長直徑總和持續(xù)至少一個月的100％的下降，并且沒有新腫瘤。
對患者評估自身免疫應(yīng)答?；颊咴谥委熐昂烷_始治療后的三個月接受眼科檢查。所有患者在研究開始前對甲狀腺球蛋白Ab、類風(fēng)濕因子和抗核抗體進(jìn)行陰性血清血液檢測。研究期間每三周測量人抗人(抗獨(dú)特型)Ab、紅細(xì)胞沉降速率、抗核Ab、甲狀腺刺激激素和游離T4水平。
使用包被CTLA-4-Ig(R & D Systems，Minneapolis，Minnesota)的微滴定孔，以標(biāo)準(zhǔn)ELISA測定MDX-010的血漿濃度。在板上孵育血漿樣品稀釋物。使用與p-NPP底物顯色的堿性磷酸酶標(biāo)記的山羊抗人IgG F(ab)特異性探針檢測結(jié)合的抗CTLA-4Ab。
使用比ELISPOT或四聚體試驗(yàn)更靈敏的12天體外致敏試驗(yàn)在可獲得PBMC檢測的全部11個患者中評定免疫反應(yīng)性(Rosenberg，S.A.等人，Immunologic and therapeutic evaluation of a synthetic peptide vaccine forthe treatment of patients with metastatic melanoma.Nat.Med.4321-327(1998))。將冰凍保存的PBMC解凍，并在含有10％熱滅活的人AB血清的基于Iscove的完全培養(yǎng)基中與1μM天然gp100209-217或gp100280-288肽和300IU/ml IL-2培養(yǎng)。在培養(yǎng)開始11至13天后收獲細(xì)胞，并與腫瘤細(xì)胞或肽脈沖的T2細(xì)胞共培養(yǎng)過夜。使用商業(yè)ELISA測定法(Pierce-Endogen，Rockford，Illinois)測量釋放到上清液中的干擾素γ(IFN-γ)。所有十一名患者在一至四個治療周期后表現(xiàn)出成功的抗天然gpl00209-217肽免疫。成功免疫六名患者抗天然gp100280-288肽。
Fc受體阻斷并以抗體(BD Biosciences，San Diego，California)或四聚體(Beclznan Coulter Immunomics，San Diego，California)染色后實(shí)施流式細(xì)胞術(shù)分析。比較兩個周期前后九名患者PBMC上表面標(biāo)志的表達(dá)。治療后CD3+CD4+細(xì)胞(P＝0.0004；配對t檢驗(yàn))和CD3+CD4+(推測為CD8+)細(xì)胞(P＝0.04)上的HLA-DR(活化標(biāo)志)表達(dá)顯著增加。CD3+CD4+細(xì)胞也表現(xiàn)為治療后CD45RO(記憶細(xì)胞標(biāo)志)表達(dá)顯著增加(P＝0.04)。表達(dá)CD69、CD25和CTLA-4的細(xì)胞群百分比沒有變化。
患者1、11和13為應(yīng)答者。(表15)患者1在兩個治療周期后單獨(dú)的肺臟病灶收縮?；颊?3單獨(dú)的肺臟病灶和腎上腺病灶完全消退?；颊?1具有31個肺臟病灶，兩個皮下病灶和一個腦部病灶。腦部病灶在兩個治療周期后從0.5cm生長至大約1.0cm。三個額外的治療周期后，患者11所有病灶(包括腦部病灶)完全消退。
1/2級不良反應(yīng)包括腹瀉(患者3、5和14)、皮疹(患者14)、肺滲出物和輕微的胸膜炎胸痛(患者4)和白癜風(fēng)(患者2和6)。
六名患者出現(xiàn)七個3級不良反應(yīng)，包括皮炎(患者1、2和13)、結(jié)腸炎/小腸炎(患者1和9)、下垂體炎(患者11)和肝炎(患者12)。所有患者在停止治療并實(shí)施支持療法和類固醇治療后恢復(fù)。沒有復(fù)發(fā)或繼發(fā)自身免疫事件。
除了出現(xiàn)抗核抗體(ANA)的患者5和12之外，自身免疫篩查血液測試正常。
首劑后MDX-010的平均峰值為72±33μg/mL，在第二劑之前的波谷為12±7μg/mL。在血漿濃度或抗體清除毒性之間沒有觀察到明確的相關(guān)性，然而觀察到腫瘤抑制或毒性。
患者1(部分應(yīng)答者)在第二個治療周期后一周出現(xiàn)結(jié)合嚴(yán)重搔癢癥的泛發(fā)紅斑斑丘疹。皮膚活組織檢查表現(xiàn)與過敏性藥疹一致的周圍血管淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞滲出、乳頭狀皮膚水腫及表皮海綿層水腫。兩天后，患者1出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉，并被給予靜脈內(nèi)水化作用。胃腸內(nèi)窺鏡檢查和活組織檢查表現(xiàn)為多處炎癥和黏膜潰瘍，伴有顯著的十二指腸和結(jié)腸淋巴細(xì)胞增多、漿細(xì)胞增多和嗜酸性粒細(xì)胞增多。免疫組織化學(xué)研究顯示炎性滲出物中CD3+細(xì)胞(CD8+＞CD4+細(xì)胞)顯著、漿細(xì)胞多克隆化(polyclonality)以及脈管系統(tǒng)和上皮細(xì)胞中MHC-1和HLA-DR表達(dá)增加。診斷為自身免疫性小腸結(jié)腸炎，并以靜脈內(nèi)甲基強(qiáng)地松龍治療患者?；颊咴?4小時內(nèi)得到顯著的臨床改善，類固醇在五天內(nèi)逐漸減少?；颊邲]有癥狀的復(fù)發(fā)。
患者2在第一個治療周期后一周出現(xiàn)輕微的全身搔癢癥，在其接受疫苗注射的肢端(右臂和左腿)，該搔癢癥在隨后的兩周內(nèi)發(fā)展為嚴(yán)重的環(huán)形紅斑疹(circumferential，erythematous macular rash)。皮膚活組織檢查顯示表皮海綿層水腫、顯著的乳頭狀皮膚水腫以及見于膠原蛋白自身免疫性的血管受累的顯著的淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞滲出。以羥嗪和苯海拉明對患者2進(jìn)行對癥治療。皮疹在數(shù)周后清除。該患者在隨后的三周中于雙側(cè)上肢出現(xiàn)白癜風(fēng)。
患者9在第二個治療周期后11天出現(xiàn)腹瀉。內(nèi)窺鏡檢查顯示泛結(jié)腸炎。結(jié)腸活組織檢查顯示伴有顯著的細(xì)胞滲出和腺窩膿腫的嚴(yán)重炎癥。免疫組織化學(xué)研究證實(shí)滲出的淋巴細(xì)胞多數(shù)為CD3+(CD4+細(xì)胞占優(yōu)勢)、漿細(xì)胞為多克隆的、上皮細(xì)胞MHC-1和HLA-DR表達(dá)增加?；颊吒篂a經(jīng)靜脈內(nèi)甲基強(qiáng)地松龍治療得到改善，并通過逐漸減少的口服地塞米松得到控制。
患者11(完全應(yīng)答者)在接受第四個治療周期后出現(xiàn)性格改變和記憶問題。腦MRI顯示左側(cè)顳葉轉(zhuǎn)移的消失而無其他異常。進(jìn)一步評估顯示不可檢測水平的甲狀腺刺激激素、游離T4、促腎上腺皮質(zhì)激素、生長激素、催乳素和睪丸甾酮，提示全垂體機(jī)能減退。重復(fù)的集中MRI顯示垂體腺為正常大小的上限。因?yàn)榛颊呔哂型耆R床反應(yīng)，沒有使用高劑量類固醇。該患者接受替代劑量的甲狀腺素、睪丸甾酮和氫化可的松?；颊叩男愿窈陀洃洰惓Ｏ?。六周后的隨訪MRI顯示垂體腺大小輕微降低。
患者12在第三個治療周期后三周進(jìn)行的血常規(guī)檢測中出現(xiàn)異常肝酶和抗核抗體。肝活組織檢查顯示含有大量小葉炎癥病灶的急性肝炎，病灶主要由淋巴細(xì)胞組成。免疫組織化學(xué)研究顯示以CD3+為主的細(xì)胞滲出，在肝門附近區(qū)域主要伴CD4+細(xì)胞及在肝小葉內(nèi)主要伴CD8+細(xì)胞。在隨后兩周中，患者的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平峰值達(dá)到2860U/L(正常為6-41)，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平峰值達(dá)到1193U/L(正常為9-34)。制定低劑量口服強(qiáng)的松治療，所有值在后來四周中降至正常。
患者13(部分應(yīng)答者)在接受第四個治療周期后一周出現(xiàn)嚴(yán)重的泛發(fā)紅斑和搔癢皮疹。皮膚活組織檢查顯示周圍血管淋巴細(xì)胞滲出伴淺表真皮中大量的嗜酸性粒細(xì)胞。免疫組織化學(xué)研究顯示主要為CD3+細(xì)胞(CD4+＞CD8+細(xì)胞)。從皮疹活檢組織培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞均為CD8+，97％與gap100209-217HLA-A*0201四聚體反應(yīng)。皮疹經(jīng)羥嗪治療緩慢消除。
B.第2組在3mg/kg抗CTLA-4抗體的初始負(fù)荷劑量之后，第2組的患者每三周接受劑量為1mg/kg的組合肽疫苗的抗CTLA-4抗體與，除此之外，第2組的方案與第1組相同。第2組研究正在進(jìn)行。到此為止，24名患者中3名(13％)已經(jīng)出現(xiàn)客觀的腫瘤反應(yīng)，24名患者中2名已經(jīng)出現(xiàn)SAE(8％)。
表4-患者特征和結(jié)果概括

1H＝激素，R＝放射治療，C＝化學(xué)治療，I＝免疫治療2PD＝進(jìn)行性疾病，PR＝部分應(yīng)答者，SD＝穩(wěn)定疾病3此時沒有獲得患者反應(yīng)數(shù)據(jù)結(jié)論本研究證實(shí)組合黑素瘤肽疫苗的抗CTLA-4抗體的臨床反應(yīng)與自身免疫樣不良副作用的出現(xiàn)強(qiáng)烈相關(guān)。具有嚴(yán)重自身免疫樣不良作用的八名患者中四人(50％)具有臨床反應(yīng)。28名患者中僅2人(7％)在不存在任何嚴(yán)重自身免疫樣不良作用下具有反應(yīng)。
實(shí)施例4抗CTLA-4抗體與經(jīng)批準(zhǔn)的MELACINE方案聯(lián)合的臨床試驗(yàn)結(jié)果給十三名惡性黑素瘤患者施用與經(jīng)批準(zhǔn)的MELACINE方案(包括環(huán)磷酰胺)組合的抗CTLA-4抗體10D1(相隔8周兩次給藥3mg/kg)和。沒有觀察到客觀反應(yīng)和嚴(yán)重的不良反應(yīng)。
實(shí)施例5實(shí)施例3(抗CTLA-4抗體與gp100肽疫苗組合的臨床試驗(yàn))結(jié)果的統(tǒng)計分析38名患者中六人具有客觀的腫瘤反應(yīng)。這六名應(yīng)答者中四人(66.7％)具有嚴(yán)重的自身免疫不良反應(yīng)。沒有應(yīng)答的32名患者中僅四人具有嚴(yán)重的自身免疫不良反應(yīng)(12.5％)。
表5-嚴(yán)重的自身免疫不良反應(yīng)分布(n＝38)

實(shí)施連續(xù)調(diào)整的(continuity-adjusted)卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)檢查應(yīng)答者和非應(yīng)答者之間不同的自身免疫發(fā)生率。使用卡方檢驗(yàn)(p＝0.0146)和Fisher精確檢驗(yàn)(p＝0.0116)都發(fā)現(xiàn)應(yīng)答患者與出現(xiàn)嚴(yán)重自身免疫不良反應(yīng)的患者之間統(tǒng)計的顯著相關(guān)性。
實(shí)施例6實(shí)施例2、3和4的結(jié)果的統(tǒng)計分析68名患者中八人具有客觀的腫瘤反應(yīng)。這八名應(yīng)答者中四人(50％)具有嚴(yán)重的自身免疫不良反應(yīng)。沒有應(yīng)答的60名患者中僅四人具有嚴(yán)重的自身免疫不良反應(yīng)(6.7％)。
表6-嚴(yán)重的自身免疫不良反應(yīng)分布

實(shí)施連續(xù)調(diào)整的卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)檢查應(yīng)答者和非應(yīng)答者之間的自身免疫發(fā)生率差異。使用卡方檢驗(yàn)(p＝0.0028)和Fisher精確檢驗(yàn)(p＝0.0049)都發(fā)現(xiàn)應(yīng)答患者與出現(xiàn)嚴(yán)重自身免疫不良反應(yīng)的患者之間統(tǒng)計的顯著相關(guān)性。
引用的參考文獻(xiàn)在本發(fā)明的說明書中引用并討論了大量參考文獻(xiàn)(包括專利、專利申請和多種出版物)。這些參考文獻(xiàn)的引用和/或討論僅供闡明本發(fā)明的描述，而非承認(rèn)任何這些參考文獻(xiàn)是在此描述的本發(fā)明的“現(xiàn)有技術(shù)”。在本說明書中引用和討論的所有參考文獻(xiàn)在此以其整體引用作為參考，如同每一單個參考文獻(xiàn)被引用作為參考一樣。
權(quán)利要求
1.對需要治療的患者進(jìn)行癌癥治療的方法，該方法包括以足以誘導(dǎo)臨界反應(yīng)的劑量施用抗CTLA-4抗體并檢測臨界反應(yīng)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中臨界反應(yīng)為自身免疫應(yīng)答。
3.權(quán)利要求1的方法，依照附錄1中列出的“Cancer TherapyEvaluation Program，Common Terminology Criteria for Adverse Events”，3.0版，其中臨界反應(yīng)為3或4級臨床反應(yīng)。
4.權(quán)利要求1的方法，其中臨界反應(yīng)由施用劑量逐步升高的抗CTLA-4抗體誘導(dǎo)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中臨界反應(yīng)由以降低的給藥間隔施用抗CTLA-4誘導(dǎo)。
6.權(quán)利要求1的方法，其中臨界反應(yīng)包括非腫瘤相關(guān)的自身免疫性表現(xiàn)。
7.權(quán)利要求1的方法，其中癌癥為免疫敏感的腫瘤。
8.權(quán)利要求1的方法，其中癌癥為惡性黑素瘤。
9.確定抗CTLA-4抗體對于癌癥治療的治療有效量方案的方法，該方法包括對受試者調(diào)節(jié)抗CTLA-4抗體給藥或劑量方案或二者，直至在受試者中觀察到臨界反應(yīng)，該劑量即為治療有效量方案。
10.權(quán)利要求9的方法，其中臨界反應(yīng)為自身免疫應(yīng)答。
11.權(quán)利要求9的方法，依照附錄1中列出的“Cancer TherapyEvaluation Program，Common Terminology Criteria for Adverse Events”，3.0版，其中臨界反應(yīng)為3或4級臨床反應(yīng)。
12.權(quán)利要求9的方法，其中臨界反應(yīng)由施用劑量逐步升高的抗CTLA-4抗體誘導(dǎo)。
13.權(quán)利要求9的方法，其中臨界反應(yīng)由以降低的給藥間隔施用抗CTLA-4誘導(dǎo)。
14.權(quán)利要求9的方法，其中臨界反應(yīng)為非腫瘤相關(guān)的自身免疫性的外部表現(xiàn)。
15.權(quán)利要求9的方法，其中癌癥為免疫敏感的腫瘤。
16.權(quán)利要求9的方法，其中癌癥為惡性黑素瘤。
17.對需要治療的患者治療黑素瘤的方法，該方法包括以足以誘導(dǎo)臨界反應(yīng)的劑量施用抗CTLA-4抗體10D1并檢測臨界反應(yīng)。
18.權(quán)利要求17的方法，其中臨界反應(yīng)為自身免疫應(yīng)答。
19.權(quán)利要求17的方法，依照附錄1中列出的“Cancer TherapyEvaluation Program，Common Terminology Criteria for Adverse Events”，3.0版，其中臨界反應(yīng)為3或4級臨床反應(yīng)。
20.權(quán)利要求19的方法，其中臨界反應(yīng)選自腹瀉、小腸結(jié)腸炎、皮炎、下垂體炎、全垂體功能減退、皮炎和搔癢癥。
21.權(quán)利要求17的方法，其中臨界反應(yīng)由施用劑量逐步升高的抗CTLA-4抗體誘導(dǎo)。
22.權(quán)利要求17的方法，其中臨界反應(yīng)由以降低的給藥間隔施用抗CTLA-4誘導(dǎo)。
23.權(quán)利要求17的方法，其中臨界反應(yīng)選自皮炎、白癜風(fēng)和小腸結(jié)腸炎。
24.權(quán)利要求1的方法，其中施用治療癌癥的額外治療劑。
25.權(quán)利要求1的方法，其中施用治療BE的額外治療劑。
全文摘要
本發(fā)明提供使用抗人CTLA－4的人序列抗體的治療方法。特別是提供治療癌癥的方法。
文檔編號G01N33/574GK1816567SQ200480018775
公開日2006年8月9日 申請日期2004年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月30日
發(fā)明者I·洛伊, G·M·尼科爾 申請人:梅達(dá)雷克斯公司