專利名稱：一種蛋白質(zhì)芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及芯片技術(shù)和體外臨床診斷檢測技術(shù)領(lǐng)域，更確切地說，涉及一種適于多指標(biāo)、多人份并行檢測的蛋白質(zhì)芯片。
背景技術(shù)：
利用抗原、抗體反應(yīng)檢測疾病是一種成熟的、重要的診斷方法，在臨床上已獲得了廣泛應(yīng)用。但是，目前的免疫學(xué)檢測方法，如ELISA、放射同位素標(biāo)記、金標(biāo)、熒光、化學(xué)發(fā)光、時間分辨熒光等，大多是單指標(biāo)檢測，嚴(yán)格地說，是一種單指標(biāo)、多人份檢測，如果能變?yōu)橐欢嘀笜?biāo)、多人份檢測，則檢測效率會有很大提高，耗費(fèi)的時間、人力將會大大減少。
蛋白質(zhì)芯片技術(shù)的發(fā)展，為實(shí)現(xiàn)臨床診斷的快速化、并行化、高通量化，即多指標(biāo)、多人份同時檢測提供了可能。Ruo-pan Huang、Thomas.o.Joos對如何在NC、PDVF等膜上構(gòu)建蛋白質(zhì)微點(diǎn)陣及進(jìn)行疾病診斷進(jìn)行了研究，其方法、原理為(1)用高速機(jī)器人點(diǎn)樣儀把相應(yīng)疾病的抗原或抗體點(diǎn)到膜上，(2)加待測血清于膜上反應(yīng)，(2)加標(biāo)記過的反應(yīng)液，(3)加化學(xué)發(fā)光液，(4)用CCD獲取圖像，(5)對圖像進(jìn)行分析，診斷疾病。同一張膜上可構(gòu)建多個蛋白質(zhì)點(diǎn)陣，每個點(diǎn)陣檢測一人份，每個點(diǎn)陣內(nèi)部可放置不同疾病的抗原或抗體，進(jìn)行多指標(biāo)檢測，據(jù)此，一張膜可實(shí)現(xiàn)多人份、多指標(biāo)并行化處理。
然而，利用上述原理制造出臨床上方便應(yīng)用的蛋白質(zhì)芯片產(chǎn)品，還必須解決以下問題1、要把各個蛋白質(zhì)點(diǎn)陣分開，不同人份的免疫反應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行，2、膜的兩面都要方便清洗，3、防止反應(yīng)過程中試劑滲漏(膜的通透性很大)，4、反應(yīng)后的膜能方便取出，以便CCD進(jìn)行圖像處理。
因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的使用方便的蛋白質(zhì)芯片。

發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的在于針對上述問題，提供一種可用于臨床應(yīng)用的多指標(biāo)、多人份并行化疾病檢測蛋白質(zhì)芯片。該芯片不僅可方便清洗，而且可防止反應(yīng)過程中試劑滲漏，更能在反應(yīng)后的將膜方便取出，以便CCD進(jìn)行圖像處理。
本實(shí)用新型提供了一種蛋白質(zhì)芯片，它含有以下組件一底座，所述底座具有孔陣列，板的上面有凹槽，凹槽上孔的間隔區(qū)略凸出于凹槽底平面；一反應(yīng)體，所述反應(yīng)體放置于底座的凹槽內(nèi)，所述的反應(yīng)體含有蛋白質(zhì)反應(yīng)膜片；一反應(yīng)室，所述反應(yīng)室具有孔陣列，有向下凸起的平面，凸起的平面嵌入底座的凹槽，將反應(yīng)體固定于底座的凹槽內(nèi)；一塞片，所述塞片上有與底座上的孔大小、形狀相對應(yīng)的凸起，凸起伸入底座的孔內(nèi)；一固定夾，所述固定夾其上有槽，用于夾持迭在一起的反應(yīng)室、反應(yīng)體、和底座的邊緣；其中，上述各個組件是可相互分離的，且當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，反應(yīng)室10和底座上的孔陣列相互對應(yīng)。
在本實(shí)用新型的一優(yōu)選例中，所述反應(yīng)體還包括一位于膜片上方的上墊片，所述的上墊片有孔陣列；一位于膜片下方的下墊片，所述的下墊片有孔陣列；當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，上下墊片的孔陣列與反應(yīng)室和底座的孔陣列相互對應(yīng)。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，上墊片的下表面和下墊片的上表面為粘性表面。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，膜片上有多個蛋白質(zhì)方陣，且當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，膜片上的蛋白質(zhì)方陣與反應(yīng)室和底座的孔陣列相互對應(yīng)。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述膜片以蛋白質(zhì)陣列為單位平均分割成若干小膜片，小膜片之間有縫隙。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述反應(yīng)室向下凸起的平面、反應(yīng)體與底座凹槽的形狀、大小相同、對應(yīng)，其上孔的數(shù)量、大小、位置相同、對應(yīng)。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述的孔陣列具有4-10000個孔。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述的孔為矩形、圓形或橢圓形。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)室、反應(yīng)體、底座和塞片的外形基本上為矩形、六邊形、八邊形或圓形。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述的固定夾的數(shù)量為2-6個。


圖1是本實(shí)用新型的一種實(shí)例的部件分解圖。
圖2是組裝在一起的圖1所示的蛋白質(zhì)芯片的透視圖。
具體實(shí)施方式
參見圖1和圖2，本實(shí)用新型的蛋白質(zhì)芯片包括反應(yīng)室10、反應(yīng)體80、底座50、固定夾70和塞片60五個組件，各組件相互獨(dú)立。
所述的底座50具有孔陣列52，板的上面有凹槽，凹槽上孔的間隔區(qū)56略凸出于凹槽底平面。
所述的反應(yīng)體80放置于底座的凹槽內(nèi)，所述的反應(yīng)體含有蛋白質(zhì)反應(yīng)膜片30。
所述的反應(yīng)室10具有孔陣列12，有向下凸起的平面，凸起的平面嵌入底座50的凹槽，將反應(yīng)體80固定于底座的凹槽內(nèi)?？钻嚵?2的各孔之間有孔間隔區(qū)16。較佳地，孔間隔區(qū)16凸起于反應(yīng)室的上表面。
所述的塞片60上有與底座50上的孔大小、形狀相對應(yīng)的凸起62，凸起62伸入底座50孔內(nèi)，從而防止液體的滲漏。
所述的固定夾70其上有槽，用于夾持迭在一起的反應(yīng)室10、反應(yīng)體80、和底座50的邊緣。
其中，上述各個組件是可相互分離的，且當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，反應(yīng)室10和底座50上的孔陣列相互對應(yīng)。
至于反應(yīng)室10、反應(yīng)體80、底座50、和塞片60的材料，可以選用塑料、玻璃、金屬或陶瓷材料。
固定夾70的材料可選用塑料、金屬材料。
作為反應(yīng)體主要構(gòu)件的蛋白質(zhì)膜片可以是蛋白質(zhì)芯片領(lǐng)域中常用的各種膜片，例如硝酸纖維素(NC)膜片、PDVF膜片等。
在本實(shí)用新型的底座的孔陣列的各孔中，可進(jìn)行不同人份的免疫學(xué)反應(yīng)，板的上面有凹槽，槽內(nèi)孔的間隔區(qū)凸出于槽的底平面，反應(yīng)體放置于底座的凹槽內(nèi)，反應(yīng)室向下有凸起的平面，凸起的平面嵌入底座的凹槽，將反應(yīng)體固定于凹槽內(nèi)，塞片位于底座的下方，其上有與底座上的孔大小、形狀相同的凸起，凸起伸入底座孔內(nèi)，防止反應(yīng)液滲漏，沖洗時又能方便取出。固定夾具有槽狀結(jié)構(gòu)，反應(yīng)室、底座以及塞片的邊緣可卡入其中，反應(yīng)室、反應(yīng)體、底座和塞片被固定在一起。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述反應(yīng)體80包括上墊片20、膜片30和下墊片20。上墊片20具有孔陣列22以及孔間隔區(qū)26。下墊片40具有孔陣列42以及孔間隔區(qū)46。上墊片的下表面和下墊片的上表面有粘性，膜片上有多個蛋白質(zhì)方陣，兩個墊片的粘性面相對，膜片夾于中間，膜片上的蛋白質(zhì)方陣與墊片上的孔陣列相對應(yīng)。
在本實(shí)用新型的另一優(yōu)選例中，所述膜片以蛋白質(zhì)微陣列為單位分割為多個小膜片，小膜片之間有縫隙，每一個小膜片及上面的方陣對應(yīng)著反應(yīng)室、底座上面的孔，反應(yīng)室不同孔之間的反應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行，試劑液不會相互滲透。
本實(shí)用新型所述反應(yīng)室向下凸起的平面、墊片與底座上凹槽的形狀、大小相同、對應(yīng)，其上孔的數(shù)量、大小、位置相同、對應(yīng)。
至于反應(yīng)室和底座等組件的孔陣列的各孔的大小，沒有特別限制，例如為約1毫米×1毫米至20毫米×20毫米，較佳地為約5-10毫米×5-10毫米。
至于孔深度，也沒有特別限制，通常為1-20毫米，較佳地為5-10毫米。
各反應(yīng)孔的體積也沒有特別限制，通常為25微升-5000微升，較佳地為約100-500微升。
本實(shí)用新型的主要優(yōu)點(diǎn)在于a結(jié)構(gòu)簡單。
b裝配和拆卸方便，能有效地防止樣品的交叉污染，易于實(shí)現(xiàn)檢測的自動化。
c一次可以檢測多人，每人可以檢測多個指標(biāo)，縮短了檢測時間，節(jié)省了人力，大大提高了疾病診斷的效率。
下面以病毒性肝炎檢測芯片為具體實(shí)例進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型，但并不限制本實(shí)用新型的范圍。
實(shí)施例1采用圖1、圖2所示的蛋白質(zhì)芯片。本實(shí)用新型提供的一種蛋白質(zhì)芯片包括反應(yīng)室10、反應(yīng)體80、底座50、固定夾70和塞片60五部分，各組件相互獨(dú)立，其中所述蛋白質(zhì)芯片的反應(yīng)室10為有孔的塑料板，板上有向下凸出的平面，本實(shí)用新型所使用的孔是方型的，孔的數(shù)量為48個。反應(yīng)體80由2個墊片40和1個膜片30組成，墊片40為橡膠材料，單面有粘性，上有48個孔；膜片30為NC膜，上有48個蛋白質(zhì)微陣列，每個微陣列由5×5個點(diǎn)組成，其上有甲、乙、丙、丁、戊5種肝炎的12種標(biāo)志物的抗原或抗體，每個蛋白質(zhì)微陣列與反應(yīng)室10上的孔相對應(yīng)。兩個墊片40粘性面相對，把膜片30夾于中間，以防止樣品滲漏、交叉污染；底座50也為48孔塑料板，上面有凹槽，凹槽的大小、形狀與反應(yīng)室10的凸出平面及反應(yīng)體80相同，槽內(nèi)孔的間隔區(qū)凸出于槽的底平面；反應(yīng)體80放置于底座50的槽內(nèi)，其上與反應(yīng)室10下面凸出的平面相接；固定夾70為塑料材料，呈直角結(jié)構(gòu)，內(nèi)角一側(cè)有槽，卡于反應(yīng)室10、底座50的四角，將除塞片60外的整個芯片連為一體；塞片60上有48個與底座50孔的大小、形狀相同的凸起，伸入到底座50的孔內(nèi)，防止反應(yīng)液滲漏。
組裝步驟(1)塞片上的凸起與底座上的孔相對應(yīng)，將塞片、底座連為一體。
(2)膜片貼于其中一個墊片的粘性面上，沿孔壁的中間進(jìn)行切割，將膜片以蛋白質(zhì)點(diǎn)陣為單位分割為48個小方塊，再將第二個墊片貼于膜片上。
(3)反應(yīng)體具有蛋白質(zhì)點(diǎn)陣的面朝上，放入底座的凹槽中。
(4)反應(yīng)室向下凸出的平面卡入底座的凹槽中，(5)將4個固定夾卡于反應(yīng)室、反應(yīng)體、底座連結(jié)體的四角。組裝過程中保持反應(yīng)室、反應(yīng)體與底座上的孔的位置對應(yīng)。
使用方法(1)加一定稀釋的待檢血清樣品100ul于反應(yīng)室的反應(yīng)孔中(同時做空白孔、陰性對照孔及陽性對照孔)，37℃孵育30分鐘。
(2)取下塞片，芯片兩面洗滌4次，拍干，裝上塞片。
(3)在各反應(yīng)孔內(nèi)加反應(yīng)液100ul，37℃溫浴30分鐘。
(4)取下塞片，芯片兩面洗滌4次，拍干。
(5)加發(fā)光液50ul。
(6)取下固定夾、反應(yīng)室，將芯片放入CCD芯片檢測儀照像。
(7)計算機(jī)圖像分析，圖像上的亮點(diǎn)，表示陽性反應(yīng)。
此外應(yīng)理解，在閱讀了本實(shí)用新型的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本實(shí)用新型作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求1.一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，它含有以下組件一底座(50)，所述底座(50)具有孔陣列(52)，板的上面有凹槽，凹槽上孔的間隔區(qū)(56)略凸出于凹槽底平面；一反應(yīng)體(80)，所述反應(yīng)體(80)放置于底座的凹槽內(nèi)，所述的反應(yīng)體含有蛋白質(zhì)反應(yīng)膜片(30)；一反應(yīng)室(10)，所述反應(yīng)室(10)具有孔陣列(12)，有向下凸起的平面，凸起的平面嵌入底座(50)的凹槽，將反應(yīng)體(80)固定于底座的凹槽內(nèi)；一塞片(60)，所述塞片(60)上有與底座(50)上的孔大小、形狀相對應(yīng)的凸起(62)，凸起(62)伸入底座(50)的孔內(nèi)；一固定夾(70)，所述固定夾(70)其上有槽，用于夾持迭在一起的反應(yīng)室(10)、反應(yīng)體(80)、和底座(50)的邊緣；其中，上述各個組件是可相互分離的，且當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，反應(yīng)室(10)和底座(50)上的孔陣列相互對應(yīng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述反應(yīng)體(80)還包括一位于膜片(30)上方的上墊片(20)，所述的上墊片有孔陣列(22)；一位于膜片(30)下方的下墊片(40)，所述的下墊片有孔陣列(42)；當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，上下墊片的孔陣列與反應(yīng)室(10)和底座(50)的孔陣列相互對應(yīng)。
3.如權(quán)利要求2所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，上墊片的下表面和下墊片的上表面為粘性表面。
4.如權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，膜片(30)上有多個蛋白質(zhì)方陣，且當(dāng)?shù)旁谝黄饡r，膜片(30)上的蛋白質(zhì)方陣與反應(yīng)室(10)和底座(50)的孔陣列相互對應(yīng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述膜片(30)以蛋白質(zhì)陣列為單位平均分割成若干小膜片，小膜片之間有縫隙。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述反應(yīng)室(10)向下凸起的平面、反應(yīng)體(80)與底座(50)凹槽的形狀、大小相同、對應(yīng)，其上孔的數(shù)量、大小、位置相同、對應(yīng)。
7.如權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述的孔陣列具有4-10000個孔。
8.如權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述的孔為矩形、圓形或橢圓形。
9.如權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述的反應(yīng)室、反應(yīng)體、底座和塞片的外形基本上為矩形、六邊形、八邊形或圓形。
10.如權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述的固定夾的數(shù)量為2-6個。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種蛋白質(zhì)芯片，它含有以下組件一底座(50)，所述底座具有孔陣列(52)；一反應(yīng)體(80)，反應(yīng)體放置于底座的凹槽內(nèi)；一反應(yīng)室(10)，所述反應(yīng)室具有孔陣列(12)；一塞片(60)，所述塞片上有與底座(50)上的孔大小、形狀相對應(yīng)的凸起(62)；一固定夾(70)；其中，各個組件是相互分離的，且迭放一起時，所述的孔陣列相互對應(yīng)。
文檔編號G01N33/68GK2577283SQ0226136
公開日2003年10月1日 申請日期2002年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月8日
發(fā)明者穆海東 申請人:穆海東