專利名稱:紙片法胺試驗(yàn)檢測(cè)加德納菌及胺試紙的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種婦女陰道病菌檢測(cè)的試紙,特別是加德納菌的檢測(cè)試紙制備方法以及加德納菌的檢測(cè)方法。
背景技術(shù):
陰道加德納菌(Gardnerolla Vaginalis.av)是非特異陰道病的重要病菌,已證實(shí)該菌可經(jīng)性接觸傳播,引起敗血癥、尿路感染、腎周膿腫或陰道膿腫等病癥,并可引起多種并發(fā)癥如早產(chǎn)、絨毛膜羊炎、輸卵管炎、子宮內(nèi)膜炎、子宮腫瘤等,所以醫(yī)院的婦產(chǎn)科和性病科、傳染病科常常對(duì)加德納菌進(jìn)行檢測(cè),以便對(duì)癥治療。由于加德納菌生長(zhǎng)要求苛刻,難于獲得純培養(yǎng),因而對(duì)此菌的檢測(cè)方法一直都處在探索和研究階段,所以近年來醫(yī)學(xué)雜志發(fā)表了一些檢驗(yàn)加德納菌的方法,《哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》1998年第1期“陰道加德納菌”一文中介紹了加德納菌有幾種檢驗(yàn)方法一、顯微鏡檢查法;二、胺試驗(yàn)法;三、分泌物PH測(cè)定法;四、熒光抗體法;五、氣相色譜法;六、細(xì)菌自動(dòng)分析法;七、多聚酶鏈反應(yīng)法(PCR法);《臨床檢驗(yàn)雜志》1992年第4期公開了加德納菌的檢驗(yàn)方法是以多價(jià)蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、氨基酸、鹽、葡萄糖為培養(yǎng)基,加入胸腹水為營(yíng)養(yǎng)添加劑,先培養(yǎng)后涂片,用革蘭氏染色法和吖啶橙染色,顯微鏡檢查;《右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》1999年第21卷提出用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測(cè)陰道加德菌,所需標(biāo)本、試劑、儀器均購(gòu)自國(guó)外。
上述公開的幾種加德納菌的檢測(cè)方法大部份成本較高、操作麻煩,需專門的儀器設(shè)備,只有條件好的城市醫(yī)院才能實(shí)施,許多普通醫(yī)院難以購(gòu)置高檔儀器,因而無法開展檢測(cè)工作。
技術(shù)內(nèi)容為了克服已有技術(shù)的不足,本發(fā)明人經(jīng)過幾年的艱苦探索和研究,找到了一種不需要高級(jí)儀器設(shè)備,檢測(cè)方法簡(jiǎn)單,適合大醫(yī)院、中小醫(yī)院門診常規(guī)檢驗(yàn)加德納菌感染,也適合鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院檢驗(yàn)陰道感染加德納菌診斷。紙片法胺試驗(yàn)的胺試紙的制備方法如下1、將溴甲酚綠和溴甲酚紫按2∶3的重量比先溶解于無水乙醇,配成1--2%原液。
2、將原液用蒸餾水或去離子水稀釋,使其濃度為0.05%-0.5%之間。
3、用普通濾紙用蒸餾水或去離子水漂洗2-3次,取出干燥,從低濃度染色液起染,直至染至0.5%為止,每次染后,都要在60-80℃的溫度烘干,直至獲得淡黃色或棕黃色的試紙,裁定所用規(guī)格,然后封裝在塑料袋或干燥容器中保存。該試紙?jiān)谑覝貎?nèi)三年不失效。
加德納菌的檢測(cè)方法1、材料與試劑胺試紙,2.0mol/l NH4Cl標(biāo)準(zhǔn)溶液;2、操作取3只青霉素瓶,或者相近似的玻璃瓶,標(biāo)明試驗(yàn)瓶、陽性對(duì)照瓶、陰性對(duì)照瓶。試驗(yàn)瓶、陽性對(duì)照瓶每只加入0.5ml,陰性對(duì)照瓶加入0.6ml無氨生理鹽水。試驗(yàn)瓶加入被檢陰道分泌物,陽性瓶加入0.1mlNH4Cl標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后各瓶加入10%KOH溶液1滴,搖勻,用胺試紙一片蓋在瓶口,以玻片壓住,10分鐘看結(jié)果,試驗(yàn)溫度25-35℃。在瓶口上胺試紙出現(xiàn)圓形均勻藍(lán)紫色為陽性,不變色為陰性。當(dāng)試驗(yàn)瓶試紙變藍(lán)紫色時(shí),報(bào)告紙片法胺試驗(yàn)陽性,不變色報(bào)告為陰性。
與當(dāng)前國(guó)內(nèi)外同類技術(shù)比較1、嗅覺氣味法胺試驗(yàn)法,為方法為之一,是1978年由pheifer提出,在分泌物中加入10%KOH溶液,用鼻子靠近分泌物聞其是否發(fā)出“腥樣”氨臭味,靠嗅覺判別陰性,主觀因素大,結(jié)果不可靠。
2、查線索細(xì)胞診斷法,為方法為之二,該方法需時(shí)間較長(zhǎng),人員素質(zhì)要求高,準(zhǔn)確性也不太高,不能作為常規(guī)使用。
3、用培養(yǎng)方法診斷法,為方法之三,這個(gè)方法是“金標(biāo)準(zhǔn)”,一旦培養(yǎng)出來即能確診,但該方法更費(fèi)時(shí),3-5天出報(bào)告,設(shè)備多,條件要求高,人員素質(zhì)要求更高,一般地縣級(jí)醫(yī)院都極難開展該項(xiàng)培養(yǎng)。
本發(fā)明的特點(diǎn)是,利用陰道分泌物中帶有加德納菌的胺物質(zhì)遇堿分解出氨氣的原理,使胺試紙變色,該方法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、方便門診作常規(guī)檢驗(yàn)及質(zhì)控。試紙穩(wěn)定性好,密封保存三年不失效。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一稱取20克溴甲酚綠和30克溴甲酚紫,先用50毫升無水乙醇溶解,然后用1升去離子水溶解,攪拌均勻,取普通濾紙用得到的溶液浸透,取出干燥,再浸濕,干燥,重復(fù)3次,然后在60-90℃的烘箱烘干,裁成2.5*2.5cm2紙片,于塑料袋或干燥容器中保存。
實(shí)施例二,稱取50克溴甲酚綠和80克溴甲酚紫用0.2升無水乙醇溶解,然后加入3升蒸餾水溶解,攪拌均勻,取普通濾紙浸在該溶液中,取出干燥,再浸濕、干燥,重復(fù)4次,然后在60-90℃的烘箱烘干,裁成5*5cm2紙片,于干燥容器或塑料袋中保存,使用前再裁小。
加德納菌的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1、本發(fā)明人用本發(fā)明方法與革蘭色法對(duì)比,隨機(jī)取省級(jí)醫(yī)院婦科門診患者573份陰道分泌物涂片,革蘭染色鏡檢陰道加德納菌形態(tài)細(xì)菌和類桿菌形態(tài)的細(xì)菌≥11個(gè)/HP者占74份,正常陰道分泌物499份,本方法陽性71份,陰性502份。X2檢驗(yàn)P>0.05,兩組差異無顯著意義,其符合率99.5%,敏感性95.9%,特異性100%。
2、本方法與原胺試驗(yàn)法對(duì)比,檢查294份分泌物,原胺試驗(yàn)陰性21份,(包括可疑陽性9份),本發(fā)明方法試驗(yàn)陽性36份,經(jīng)X2處理,P<0.01,表明兩種試驗(yàn)方法差異有非常顯著性意義。
3、本發(fā)明方法與查線索細(xì)胞法對(duì)比對(duì)婦科門診1368份陰道分泌物標(biāo)本做本發(fā)明方法試驗(yàn),陽性170份,將170份陽性患者分泌物查線索細(xì)胞,有149份陽性,兩者符合率87.6%。
4、本發(fā)明與培養(yǎng)加德納菌對(duì)比共試驗(yàn)457份陰道分泌物,本發(fā)明方法試驗(yàn)陽性37份,分離出44株加德納菌,經(jīng)統(tǒng)計(jì)敏感性84.1%,特異性100%,陽性預(yù)測(cè)性100%,陰性預(yù)測(cè)值98.3%。
權(quán)利要求
1.一種加德納菌的檢測(cè)試紙制備方法,其特征在于(1)將溴甲酚綠和溴甲酚紫按2∶3的量先溶解于無水乙醇配成1-2%原液;(2)將原液用蒸餾水或去離子水稀釋,使其濃度為0.05%-0.5%之間;(3)用普通濾紙用蒸餾水或去離子水漂洗2-3次,取出干燥,從低濃度染色液起染,直至染至0.5%為止,每次染后,都要在60-80℃內(nèi)烘干,直至獲得淡黃色或棕黃色的試紙,裁定所用規(guī)格,然后封裝在塑料袋或干燥容器中保存。
2.一種采用權(quán)利要求1所述的試紙檢測(cè)加德納菌的方法,其特征在于取3只青霉素瓶,或者相近似的玻璃瓶,標(biāo)明試驗(yàn)瓶、陽性對(duì)照瓶、陰性對(duì)照瓶,在試驗(yàn)瓶、陽性對(duì)照瓶中每只加入0.5ml,陰性對(duì)照瓶加入0.6ml無氨生理鹽水,試驗(yàn)瓶加入被檢陰道分泌物,陽性瓶加入0.1mlNH4Cl標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后各瓶加入10%KOH溶液1滴,搖勻,用胺試紙一片蓋在瓶口,以玻片壓住,10分鐘看結(jié)果,試驗(yàn)溫度25-35℃。在瓶口上胺試紙出現(xiàn)圓形均勻藍(lán)紫色為陽性,不變色為陰性。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種對(duì)婦女陰道感染加德納菌進(jìn)行檢測(cè)的方法及檢測(cè)試紙的制備方法,它是用溴甲酚綠和溴甲酚紫用乙醇溶解,然后加入蒸餾水稀釋,取普通濾紙浸在溶液中,干燥,得試紙然后保存在干燥塑料袋中,使用方法是取陰道分泌物置于試瓶中,加入堿液,將試紙置于瓶口,若發(fā)生變色說明加德納菌感染,此方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、不僅適用城市的大中醫(yī)院診斷檢查,也適用于鄉(xiāng)村衛(wèi)生院進(jìn)行檢查。
文檔編號(hào)G01N33/52GK1401789SQ0112839
公開日2003年3月12日 申請(qǐng)日期2001年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月28日
發(fā)明者宋紹業(yè) 申請(qǐng)人:宋紹業(yè)