專利名稱：口腔粘膜病變著色呈色檢測劑及其配制方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種以著色反應(yīng)來檢驗(yàn)口腔粘膜及異常粘膜細(xì)胞病變的檢測劑，特指一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑及其配制方法和應(yīng)用，將適當(dāng)比例的甲基藍(lán)、伊紅、煌綠及甘油醇的混合溶液涂抹患部，利用癌癥病變中組織異常生長時細(xì)胞會聚集核醣核酸與去氧核醣核酸的特性，甲基藍(lán)與伊紅在該處會顯現(xiàn)不易脫色的藍(lán)紫色；再利用慢性發(fā)炎與退化病變所生成的組織較為致密的原理，使煌綠與甘油醇在該患部呈現(xiàn)綠至藍(lán)綠色，因此而達(dá)到雙重檢驗(yàn)的效果，有效地篩檢口腔粘膜病變。
本發(fā)明為一種簡易且有效的口腔粘膜細(xì)胞病變的檢驗(yàn)試劑配方，利用特殊細(xì)胞組織著色劑的呈色反應(yīng)判別病情的種類，達(dá)到雙重檢驗(yàn)的目的。此發(fā)明供醫(yī)護(hù)人員能簡便而準(zhǔn)確地靠著肉眼評斷初步病情，及早發(fā)現(xiàn)口腔癌的可疑病灶，同時更能應(yīng)用于口腔粘膜病變患者的病情追蹤檢查，確定懷疑的病灶及其分布范圍，以決定切片部位及手術(shù)位置，并增加手術(shù)的精確性，降低人們因患口腔癌的死亡率，為一極具突破性的醫(yī)學(xué)新技術(shù)。
據(jù)統(tǒng)計，因?yàn)閲顺闊熂熬捉罊壚频炔划?dāng)?shù)娘嬍沉?xí)慣，近年來國內(nèi)患口腔癌的人口數(shù)有逐年上升的趨勢，其高居十大死因中男性癌癥的第五名。
然而口腔癌根據(jù)發(fā)現(xiàn)的早，患者的存活率可高達(dá)75％，根據(jù)晚期才發(fā)現(xiàn)，其患者五年的存活率則降低至18％，因此可知早期診斷是否患有口腔癌的重要性，讓國人可及早發(fā)現(xiàn)及早治療，同時站在預(yù)防醫(yī)學(xué)的角度，篩檢預(yù)防口腔癌較的發(fā)病后再來治療，不僅是減清患者的痛苦，而且更可節(jié)省大量的醫(yī)療資源及成本。
早期癌癥病變細(xì)胞檢測方式除了用目視加觸診法外，只能用病理切片檢查，目視加觸診判斷的結(jié)果準(zhǔn)確率低，誤診機(jī)率高；而病理切片檢查雖然最為準(zhǔn)確，但卻過程麻煩，且須耗費(fèi)大量的人力與時間，無法早點(diǎn)得知診斷結(jié)果，因此使病患延誤了醫(yī)治的時機(jī)，同時也提高了死亡率。
另一種相關(guān)于口腔皮膜病變的TBO(Toludine blue 0)檢測試劑，其檢驗(yàn)結(jié)果為單一呈色結(jié)果，只對惡性化細(xì)胞(根據(jù)癌細(xì)胞、急性發(fā)炎細(xì)胞)具檢驗(yàn)效果，而且其檢測劑本身含有較高的毒性，對人體易產(chǎn)生不良的影響，根據(jù)一委托中山醫(yī)學(xué)微生物學(xué)科組織病毒實(shí)驗(yàn)室所作的細(xì)胞毒性試驗(yàn)，詳細(xì)說明請參考附件一。
該試驗(yàn)為XTT實(shí)驗(yàn)，將不同濃度TBO檢測劑及本檢測劑(以下簡稱GEM)分別加在Fibroblast(ATCC CCL 163)與HeLa Cell(ATCC CCL2)中，二十四小時后加入XTT滅劑，以分光計吸收光譜測OD值，分析比較兩者的毒性，其結(jié)果根據(jù)表一、表二所示，TBO檢測劑的毒性強(qiáng)度在正常纖維細(xì)胞組織中比GEM檢測劑高出約十倍，因此說明傳統(tǒng)的TBO檢測劑的毒性較大，在使用上具較高的危險性。
本發(fā)明的主要目的是提供一種簡易安全且準(zhǔn)確度高的口腔粘膜細(xì)胞病變檢驗(yàn)檢測劑，利用特殊細(xì)胞組織著色劑的呈色反應(yīng)判別病情的程度，達(dá)到雙重檢驗(yàn)的目的，以期及早發(fā)現(xiàn)病端、及早治療及增進(jìn)國人健康的目的。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑，其特征是它包括如下成分和配比乳酸1％的水溶液95ml，
甲基藍(lán) 0.5-3.0克，伊紅G0.2-1.0克，煌綠 0.2-1.0克，甘油醇 50ml。
一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是它包括如下步驟(1)按如下成分和配比備料乳酸1％的水溶液95ml，甲基藍(lán) 0.5-3.0克，伊紅G 0.2-1.0克，煌綠0.2-1.0克，甘油醇 50ml。
(2)配制①先將甲基藍(lán)和伊紅G加入乳酸的純水溶液中充分混合，于常溫常壓下靜置等待其充分溶解混合，備用；②將煌綠溶于甘油醇攪拌混合后，加入步驟①的混合溶液，再次充分?jǐn)嚢瑁爻合蚂o置待完全均勻即可。
該甲基藍(lán)的劑量為在每95ml的1％乳酸中加入2.0克。該伊紅劑量為每95ml的1％乳酸中加入0.5克。該煌綠的加入劑量為每50ml的甘油醇中加入0.5克。該煌綠用甲基綠取代。該甲基綠的劑量為每50ml的甘油醇中加入0.2-1.0克。該乳酸純水溶液的濃度為1％。該配方的組成劑量為每95ml的1％乳酸中加入2.0克甲基藍(lán)和0.5克伊紅。該配方的組成劑量為每50ml的甘油醇中加入0.5克煌綠。
一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的應(yīng)用，其特征是該檢測劑搭配一媒染劑使用。該搭配的媒染劑為乳酸的純水溶液。
本發(fā)明的相關(guān)原理說明如下本發(fā)明的口腔粘膜病變?nèi)旧噬珯z測劑配方中加入一定比例組合的甲基藍(lán)(Methylene blue)和伊紅(Eosin G)染料，因該兩染劑為鹼性，同時對酸性組織產(chǎn)生親和性的異質(zhì)染色劑，主要針對去氧核醣核酸(DNA)與核醣核酸(RNA)等氨基酸或多醣體的類酸性組織有反應(yīng)，同時因?yàn)榘┘?xì)胞的快速生長造成核酸(DNA、RNA)比一般細(xì)胞較為聚集，因此可以選擇性的在惡性化的細(xì)胞上染上一片深藍(lán)紫色，達(dá)到檢驗(yàn)出癌癥細(xì)胞的第一重效果。
本發(fā)明的口腔粘膜病變?nèi)旧噬珯z測劑配方之中加入另外一定比例的煌綠(Malachite green)與甘油醇(Glycerol)混合溶液，該理論基礎(chǔ)為；甘油醇可溶解煌綠，同時為無毒性的組織浸潤劑，因此煌綠可隨甘油醇滲透入因慢性發(fā)炎或退化性病變所生的致密組織，將該處病變?nèi)境删G色或藍(lán)綠色，以達(dá)到檢驗(yàn)輕度病變的第二重效果。
本發(fā)明的口腔粘膜病變?nèi)旧噬珯z測劑在識別上及診斷上應(yīng)用的有效性請見附件二，該附件二為光田醫(yī)院牙科部口腔顎面外科及口腔病理科，將本檢測劑應(yīng)用于臨床病診的評估報告。
該報告中指出，本檢測劑針對口腔病變者予以檢查，染色后，隨即切片檢查以取得病理組織學(xué)診斷，使用的方法為先以一作為媒染劑的乳酸(Lacticacid)水溶液噴灑疑似口腔患部2-3次，吐掉后再以主著色劑噴射2-3次，待一分鐘后，充分漱口后，即染色完成。
判斷準(zhǔn)則為依著色的結(jié)果分為強(qiáng)陽性、陽性及陰性，其中強(qiáng)陽性的染色部位呈現(xiàn)深藍(lán)紫色，界限分明，且表面不規(guī)則；陽性部分則染色界限皆不明顯，表面也較規(guī)則；遇有懷疑是否為陽性者，可再沾用乳酸水溶液輕拭粘膜表面，若顏色退落，或原先即未染色成功，皆可判定為陰性。
該臨床實(shí)驗(yàn)的檢驗(yàn)人數(shù)為148人，篩檢的專一性可達(dá)90％以上，其敏感度頗高，因此具有相當(dāng)重要的參考價值。
為使貴審查委員能進(jìn)一步了解本發(fā)明口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配方、制法及其它配置條件，茲詳細(xì)說明根據(jù)后本發(fā)明中口腔粘膜病變?nèi)旧噬珯z測劑的配制方法的主著色劑分為兩大部分第一部分為甲基藍(lán)2.0克及伊紅G 0.5克，加入1％乳酸的純水溶液95ml中充分混合，于常溫常壓下靜置24小時，待其完全溶解。
第二部分將煌綠0.5克溶于5ml的甘油醇中，充分?jǐn)嚢杌旌虾螅湃胍淹瓿傻牡谝徊糠秩芤褐?，再次充分?jǐn)嚢?，常溫常壓下靜置24小時，使其完全溶解后，以濾紙過濾掉未溶解的顆粒，取濾液即成。
另外在媒染劑部分將1％乳酸的純水溶液加入食用色素及香料，分裝即成，供主著色劑染色前，將其噴灑于患部使用。
附件一中山醫(yī)學(xué)微生物學(xué)科組織病毒實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞毒性試驗(yàn)(共14頁)。
附件二光田醫(yī)院牙科部口腔顎面外科及口腔病理科的臨床病診評估報告(共3頁)。
權(quán)利要求
1.一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑，其特征是它包括如下成分和配比乳酸 1％的水溶液95ml，甲基藍(lán)0.5-3.0克，伊紅G 0.2-1.0克，煌綠 0.2-1.0克，甘油醇50ml。
2.一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是它包括如下步驟(1)按如下成分和配比備料乳酸1％的水溶液95ml，甲基藍(lán) 0.5-3.0克，伊紅G 0.2-1.0克，煌綠0.2-1.0克，甘油醇 50ml。(2)配制①先將甲基藍(lán)和伊紅G加入乳酸的純水溶液中充分混合，于常溫常壓下靜置等待其充分溶解混合，備用；②將煌綠溶于甘油醇攪拌混合后，加入步驟①的混合溶液，再次充分?jǐn)嚢?，常溫常壓下靜置待完全均勻即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該甲基藍(lán)的劑量為在每95ml的1％乳酸中加入2.0克。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該伊紅劑量為每95ml的1％乳酸中加入0.5克。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該煌綠的加入劑量為每50ml的甘油醇中加入0.5克。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該煌綠用甲基綠取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該甲基綠的劑量為每50ml的甘油醇中加入0.2-1.0克。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該乳酸純水溶液的濃度為1％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該配方的組成劑量為每95ml的1％乳酸中加入2.0克甲基藍(lán)和0.5克伊紅。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的配制方法，其特征是該配方的組成劑量為每50ml的甘油醇中加入0.5克煌綠。
11.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的應(yīng)用，其特征是該檢測劑搭配一媒染劑使用。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的口腔粘膜病變著色呈色檢測劑的應(yīng)用，其特征是該搭配的媒染劑為乳酸的純水溶液。
全文摘要
一種口腔粘膜病變著色呈色檢測劑及其配制方法和應(yīng)用，它包括按如下成分和配比備料乳酸1％的水溶液95ml，甲基藍(lán)0.5－3.0克，伊紅G0.2－1.0克，煌綠0.2－1.0克，甘油醇50ml；將甲基藍(lán)和伊紅G加入乳酸的純水溶液中充分混合，將煌綠溶于甘油醇攪拌混合后，加入混合溶液，常溫常壓下靜置待完全均勻即可。利用癌癥病變中組織異常生長時細(xì)胞會聚集核醣核酸與去氧核醣核酸的特性，甲基藍(lán)與伊紅在該處會顯現(xiàn)不易脫色的藍(lán)紫色，使煌綠與甘油醇在患部呈現(xiàn)綠至藍(lán)綠色，達(dá)到雙重檢驗(yàn)的效果，有效地篩檢口腔粘膜病變。
文檔編號G01N33/52GK1390948SQ0111596
公開日2003年1月15日 申請日期2001年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月12日
發(fā)明者錢佑 申請人:仲華生化科技股份有限公司