一種用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片及其制備方法和檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微流控芯片技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測 微流控芯片及其制備方法和檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 急癥腹痛（acute abdominal pain)是急診患者最常見的病癥之一。其就診全年 均可出現(xiàn)，高峰分別是秋季（9~11月）和夏季（6~8月），就診年齡集中在15~44歲 之間（占就診總數(shù)的72. 7%)。常涉及內(nèi)、外、兒、婦產(chǎn)甚至神經(jīng)、精神各科的疾病。其主要 病因是腹腔內(nèi)臟器官發(fā)生病變、結(jié)構(gòu)機(jī)能失常、腹外鄰近器官損傷和/或全身性疾病所致。 據(jù)統(tǒng)計，非創(chuàng)傷性急癥腹痛疾病中急性胰腺炎的發(fā)病率最高，其次是急性胃腸炎、急性腸梗 阻、急性闌尾炎、急性膽管炎、潰瘍急性穿孔等。該類疾病往往具有發(fā)病急、變化快、病情復(fù) 雜且嚴(yán)重等特點，加之，目前醫(yī)院急診科臨床醫(yī)生趨于年輕化，在急診診斷方面經(jīng)驗不足， 容易診斷有誤或治療欠妥，這樣可能造成不良后果，甚至死亡。因此，對急癥腹痛的診斷要 求較高，能否及時做出明確的診斷，進(jìn)行合理的治療，將直接影響著疾病的治療與預(yù)后。針 對此現(xiàn)象，本發(fā)明提出將血清中胰蛋白酶原_2(TPS II )、血清淀粉樣蛋白A(SSA)、超敏C反 應(yīng)蛋白（hs-CRP)、降鈣素原（PCT)與抵抗素進(jìn)行聯(lián)合檢測的急癥腹痛排查方案，研制相應(yīng) 的檢測試劑盒，對急癥腹痛常見的急性胰腺炎、急性闌尾炎、急性腹膜炎、急性胃腸炎與潰 瘍性急性穿孔進(jìn)行排除。
[0003] 目前，國外在臨床急癥腹痛的檢測方面，主要通過結(jié)合患者病史，進(jìn)行體格檢查、 實驗室輔助檢查，根據(jù)患者病情選擇性地進(jìn)行血糖、妊娠試驗、血電解質(zhì)、肝腎功能、腹部CT 檢查、腹腔診斷性穿刺以及腹水分析等檢查分析，然后綜合考慮，提出相應(yīng)的治療方案。此 外，還采用對急癥腹痛患者尿胰蛋白酶原-2的檢測，進(jìn)行急性胰腺炎的排查，但對于急癥 腹痛相關(guān)的其他疾病的排查尚沒有相關(guān)生物標(biāo)記物的報道。在國內(nèi)，對于急癥腹痛的臨床 檢測與國外臨床檢測相似，但TPS II在國外臨床診斷中的應(yīng)用開展較早，而在國內(nèi)是近兩 年陸續(xù)才開始在三級甲等醫(yī)院走入臨床應(yīng)用，它的臨床應(yīng)用價值依舊處于進(jìn)一步的探索 中。本發(fā)明通過對急癥腹痛患者血清中TPS II、SSA、hs-CRP、PCT與抵抗素進(jìn)行聯(lián)合檢測， 結(jié)合現(xiàn)行的微流控技術(shù)，實現(xiàn)對急癥腹痛常見疾病的簡捷、快速排查，為臨床醫(yī)生做出及時 合理的診斷提供輔助工具。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明的第一個目的是提供一種用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微 流控芯片。通過建立一種多指標(biāo)聯(lián)合檢測的免疫分析方法，為急癥腹痛的相關(guān)疾病的排查 提供一種靈敏度高、精確性好并且方便快速的微流控分析方法，幫助臨床醫(yī)生對急癥腹痛 相關(guān)疾病做出及時診斷，也為病情評估或預(yù)后判斷進(jìn)行輔助判斷。
[0005] 本發(fā)明的第二個目的是提供了用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片的 制備方法。
[0006] 本發(fā)明的第三個目的是提供了用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片的 檢測方法。
[0007] 技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種用于急癥腹痛疾病排查的 免疫檢測微流控芯片，所述檢測微流控芯片包括進(jìn)樣口、微流體通道、反應(yīng)池、檢測單元和 出樣口，所述進(jìn)樣口、反應(yīng)池和出樣口由微流體通道串行聯(lián)接，所述檢測單元分布于反應(yīng)池 中。
[0008] 進(jìn)一步地，所述檢測單元包括五個檢測單元，依次為胰蛋白酶原_2檢測單元、超 敏C反應(yīng)蛋白檢測單元、血清淀粉樣蛋白A檢測單元、降鈣素原檢測單元及抵抗素檢測單 J Ll 〇
[0009] 進(jìn)一步地，所述的微流控芯片由玻璃石英、聚二甲基硅氧烷（PDMS)、聚甲基丙烯酸 甲酯（PMM)、聚對苯二甲酸乙二醇酯（PET)或聚酯（PC)材料中的一種或幾種加工而成。 [0010] 進(jìn)一步地，所述芯片的形狀為圓柱狀，胰蛋白酶原_2(TPS II )檢測單元、超敏C反 應(yīng)蛋白（hs-CRP)檢測單元、血清淀粉樣蛋白A(SSA)檢測單元、降鈣素原（PCT)檢測單元及 抵抗素（resistin)檢測單元依次平均分布于該檢測芯片的反應(yīng)池中。
[0011] 進(jìn)一步地，所述各個檢測單元預(yù)先固定有各個檢測指標(biāo)發(fā)生免疫反應(yīng)所需的抗 體，固定方式是物理吸附、化學(xué)交聯(lián)、溶膠-凝膠包埋、微珠固定中的一種或幾種。
[0012] 進(jìn)一步地，所述的反應(yīng)池其容積大于反應(yīng)體系所需的各種溶液體積的最大值，以 保證能夠完全容納所需添加的試劑。
[0013] 進(jìn)一步地，所述的反應(yīng)池和微流體通道具有避光特性。所述的避光特性是指構(gòu)成 反應(yīng)池和微流體通道的材料對波長600~800nm的可見光具有全吸收的性質(zhì)，即該波長特 征的光無法通過芯片材料直接照射到樣品溶液上。
[0014] 檢測過程中被測樣品依次全部通過各個檢測單元，保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可 靠性。所述的檢測單元中間帶有小孔，以保證抗體的固定，防止各個檢測指標(biāo)之間的交叉污 染及檢測過程中抗原抗體的充分反應(yīng)。
[0015] 上述的用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片的制備方法，該微流控芯片 是利用ELISA雙抗夾心法，利用連接于固相載體上的抗體和標(biāo)記抗體分別與樣品中被檢測 抗原分子上兩個抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體免疫復(fù)合物。
[0016] 具體包括以下步驟：1)芯片氧化；2)包被抗體；3)封閉；4)加抗原；5)加標(biāo)記抗 體。
[0017] 上述的用于急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片的檢測方法，包括以下步 驟：待檢測血樣品溶液借助外接的泵閥系統(tǒng)或其他的控流系統(tǒng)依次經(jīng)由進(jìn)樣口和微流體通 道進(jìn)入反應(yīng)池，并在反應(yīng)池中與各個檢測單元內(nèi)固定的熒光或酶標(biāo)記的抗體進(jìn)行抗原抗體 特異性反應(yīng)，產(chǎn)生特定的信號；最后采集反應(yīng)產(chǎn)物產(chǎn)生的信號強(qiáng)度并進(jìn)行分析，從而實現(xiàn)待 測樣品中的抗原含量的檢測，然后結(jié)合制定的急癥腹痛疾病的篩查方案，實現(xiàn)對急癥腹痛 疾病的排查。
[0018] 有益效果：本發(fā)明基于微流控芯片技術(shù)平臺，集樣品進(jìn)樣、免疫反應(yīng)和光電檢測于 一體，極大地簡化了操作流程，降低了樣品和試劑消耗，并且不需要配備昂貴的儀器，極大 地降低了使用成本，使現(xiàn)場即時檢測成為可能，具有可預(yù)見的巨大的經(jīng)濟(jì)價值和社會價值。
【附圖說明】
[0019] 圖1 一種用于單樣品的急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片示意圖，（a)為 該芯片的側(cè)視平面圖，（b)為該芯片的檢測單元的俯視圖，（c)為該芯片的檢測單元側(cè)視 圖；其中：1為進(jìn)樣口，2為微流體通道，3為反應(yīng)池，4為出樣口，5為檢測單元，A為TPS II 檢測單元，B為SSA檢測單元，C為hs-CRP檢測單元，D為PCT檢測單元，E為抵抗素檢測單 元；
[0020] 圖2急癥腹痛疾病排查的免疫檢測微流控芯片檢測原理圖。
【具體實施方式】
[0021] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合具體實施例，并參照 附圖，對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0022] 實施例1 :
[0023] 一種檢測微流控芯片，依次包括進(jìn)樣口 1、微流體通道2、反應(yīng)池3、檢測單元5和出 樣口 4,所述進(jìn)樣口 1、反應(yīng)池3和出樣口 4由微流體通道2串行聯(lián)接，所述檢測單元5分布 于反應(yīng)池3中。反應(yīng)池3中包括五個檢測單元，依次為胰蛋白酶原-2檢測單元、超敏C反 應(yīng)蛋白檢測單元、血清淀粉樣蛋白A檢測單元、降鈣素原檢測單元及抵抗素檢測單元。微流 控芯片由玻璃石英、聚二甲基硅氧烷（PDMS)加工而成。
[0024] 芯片的形狀為圓柱狀，胰蛋白酶原-2(TPS II )檢測單元、超敏C反應(yīng)蛋白 (hs-CRP)檢測單元、血清淀粉樣蛋白