專利名稱：一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法。
背景技術：
蛇足石杉(Huperzia serrata)為石杉科石杉屬蕨類植物，又名千層塔。石杉科植 物有5個屬26個種，我國除了蛇足石杉外，還有華南馬尾杉、長柄石杉、中間石杉、長白山石 杉、四川石杉、湖北石杉、閩浙馬尾杉、廣東馬尾杉、馬尾杉、狹葉馬尾杉、龍巖馬尾杉、矮小 馬尾杉等13種。據(jù)有關分析表明，我國的上述植物基本都含有石杉堿甲，它們均是石杉堿 甲的藥物資源。石杉堿甲在植物中的含量在0. 0003% -0. 006%間不等，以蛇足石杉含量和 蘊藏量相對較多。 蛇足石杉是石杉堿甲提取最常用的植物，它的適應性較強，資源十分豐富。全國除 西北地區(qū)部分省區(qū)、華北地區(qū)外均有分布。亞洲其它國家或地區(qū)(如日本、朝鮮、泰國、中南 半島、印度、尼泊爾、緬甸、斯里蘭卡、菲律賓、馬來西亞、印度尼西亞等)、太平洋地區(qū)、俄羅 斯、大洋洲、中美洲有分布。 據(jù)初步估計，僅在武陵山區(qū)一帶，蛇足石杉植物原料年收購量可達150-200噸，按 提取率萬分之五計算，石杉堿甲純品年產(chǎn)量可達7. 5-10kg。 隨著社會的發(fā)展，人口老齡化速度正在加快，使老年性癡呆癥的發(fā)病率相對上升。 目前，歐洲，日本和美國80歲以上的人口中約20%以上的人患有此病。全世界65歲以上的 人口中有5000多萬人患有不同種類的癡呆癥，其發(fā)病率約為5%。據(jù)預測，到2020年癡呆 病人將增加50%。我國近幾年此病的發(fā)病率也在不斷增加。據(jù)國家藥監(jiān)局南方醫(yī)藥經(jīng)濟 研究所所作的一項調(diào)查統(tǒng)計表明，目前中國約500萬AD患者，其中55歲以上人群中的癡呆 發(fā)病率為2. 57%，65歲以上人群中的發(fā)病率為4.6%，75歲以上人群中，患病率為7. 49%。 總體患者中就診率僅為22.8%。因此尋找有效的藥物預防和治療早老年癡呆癥已成為藥物 學家和臨床醫(yī)學工作者的迫切任務。 蛇足石杉提取物石杉堿甲作為第二代乙酰膽堿醋酶抑制劑，由于其獨特的藥理特 征和低毒性，越來越引起人們的高度重視。目前，石杉堿甲作為食品添加劑和營養(yǎng)保健品已 在美國互聯(lián)網(wǎng)上銷售，用于提高記憶功能，在國內(nèi)，它已作為治療AD的新藥被批準上市。
雖然自1985年以來，國內(nèi)外已經(jīng)提出了多種化學合成石杉堿甲的方法，但由于它 的結構復雜，使其化學合成的成本遠高于植物提取，在含有石杉堿甲的石杉科植物中，以蛇 足石杉中石杉堿甲的含量和蘊藏量相對較多。但石杉堿甲在蛇足石杉的含量也僅為萬分之
幾，并且蛇足石杉植物來源困難且生長周期長達8-10年，造成了石杉堿甲的原料藥價格昂
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)行的收率較低，成本較高，市場競爭力弱的調(diào)制方法進行 改進，建立一條具有工業(yè)化可操作性的從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特 征在于包括以下步驟 a.提取取蛇足石杉用2%醋酸溶液攪拌提取；
b.調(diào)堿用氨水調(diào)提取液pH為9，過濾； c.大孔吸附樹脂(SP825型)分離將濾液用大孔吸附樹脂分離；收集目標物濃 縮，干燥，得到石杉堿甲粗品I ; d.堿性氧化鋁柱層析將石杉堿甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿甲醇洗脫；收集 目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品II ; e.腈基鍵合硅膠制備色譜將石杉堿甲粗品II用40%甲醇溶解；用40%甲醇洗 脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲精品。 本發(fā)明一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特征在于包括以下步驟
a.提取取粉碎目數(shù)為20的蛇足石杉，在室溫條件下，用2%醋酸溶液攪拌提取2 小時，提取4次；三四次提取液作為循環(huán)提取溶劑；
b.調(diào)堿用氨水調(diào)提取液pH為9，過濾； c.大孔吸附樹脂(SP825型)分離將濾液用大孔吸附樹脂分離；用90%甲醇洗 脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品I ; d.堿性氧化鋁柱層析將石杉堿甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿甲醇(96 : 4，體 積比)洗脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品II ; e.腈基鍵合硅膠制備色譜將石杉堿甲粗品II用40%甲醇溶解；用40%甲醇洗 脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲精品。 本發(fā)明一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法采用2%醋酸作為提取溶劑， 代替?zhèn)鹘y(tǒng)工藝中所用的1%硫酸或鹽酸對環(huán)境污染相對降低；與傳統(tǒng)方法相比，本工藝采 用新的大孔吸附樹脂材料(SP825型)、正反相色譜組合(堿性氧化鋁柱層析與腈基鍵合硅 膠加壓制備色譜組合)的方法，產(chǎn)品純度能達到98.0%以上，產(chǎn)品的回收率達到75%以上，
且提高了生產(chǎn)效率。 本發(fā)明的有益效果是由于采用新的提取工藝，通過簡化操作、減少損失、提高產(chǎn) 率，降低成本，增強產(chǎn)品的市場競爭能力。


附圖1為石杉堿甲腈基鍵合硅膠制備色譜圖。
附圖2為98 %石杉堿甲HPLC色譜圖
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明進一步說明。
實施例1 取50g粉碎目數(shù)為20目的蛇足石杉，在室溫條件下，用375mL2X醋酸溶液攪拌提 取2小時，提取4次。三四次提取液作為循環(huán)提取溶劑，用氨水調(diào)提取液pH為9，過濾。
SP825大孔吸附樹脂柱濕法裝于玻璃柱中，按廠家提供個方法進行預處理后，將 pH為9. 0提取液按6BV/h速度上柱，TLC監(jiān)測上樣終點。飽和后用90%甲醇為洗脫劑，流速6BV/h。收集含石杉堿甲部分的洗脫液，真空快速濃縮，干燥，得石杉堿甲粗品I。
200 300目堿性氧化鋁用流動相濕法裝于40*300不銹鋼層析柱中，石杉堿甲粗 品I 3390毫克溶于溶于氯仿中進料，上樣量為9mg粗品/ml柱床，上柱液流速6BV/h。氯 仿甲醇(96 : 4，體積比)洗脫，洗脫流速6BV/h， TLC監(jiān)測，收集含石杉堿甲部分的洗脫 液，真空快速濃縮，干燥，得石杉堿甲粗品II。 稱取100克25 45 ii m的腈基鍵合硅膠，甲醇濕法裝于10*150不銹鋼靜態(tài)軸向 壓縮柱中，手動液壓并固定色譜床，相成約為50*280的制備色譜床。石杉堿甲粗品115. 10 毫克溶于40%的甲醇水溶液中進樣，40%的甲醇水溶液為流動相，檢測波長220nm。收集石 杉堿甲峰對應洗脫液，合并濃縮，干燥。得石杉堿甲精品。
實施例2 稱取原料粉末8Kg裝入100升多功能提取器中，加入60升2%醋酸，常溫攪拌提 取2h，過濾，提取4次，合并4次提取液，得提取液總體積為231升。用氨水調(diào)提取液pH為 9. O，過濾。 SP825大孔吸附樹脂柱濕法裝于玻璃柱中，按廠家提供的方法進行預處理后，將 pH為9. 0提取液按6BV/h速度上柱，TLC監(jiān)測上樣終點。飽和后用90%甲醇為洗脫劑，流 速6BV/h。收集含石杉堿甲部分的洗脫液，真空快速濃縮，干燥，得石杉堿甲粗品I。
200 300目堿性氧化鋁用流動相濕法裝于110*1200不銹鋼層析柱中，石杉堿甲 粗品I103克溶于溶于氯仿中進料，氯仿甲醇(96 : 4，體積比)洗脫，TLC監(jiān)測，收集含石 杉堿甲部分的洗脫液，真空快速濃縮，干燥，得石杉堿甲粗品II。 稱取360克25 45 ii m的腈基鍵合硅膠，甲醇濕法裝于50*500不銹鋼靜態(tài)軸向 壓縮柱中，手動液壓并固定色譜床，相成約為50*280的制備色譜床。石杉堿甲粗品112. 8 克溶于40%的甲醇水溶液中進樣，40%的甲醇水溶液為流動相，檢測波長220nm。收集石杉 堿甲峰對應洗脫液，合并濃縮，干燥，得石杉堿甲精品。
實施例3 稱取原料粉末200Kg裝入2000升提取罐中，加入1500升2%醋酸，常溫攪拌提取 2h，過濾，提取4次，合并4次提取液。用氨水調(diào)提取液pH為9. 0。 SP825大孔吸附樹脂柱濕法裝于不銹鋼樹脂柱中，按廠家提供的方法進行預處理 后，將pH9. 0提取液按6BV/h速度上柱，TLC監(jiān)測上樣終點。飽和后用90%甲醇為洗脫劑， 流速6BV/h。收集含石杉堿甲部分的洗脫液，真空快速濃縮，干燥，得石杉堿甲粗品I。
200 300目堿性氧化鋁用流動相濕法裝于110*1200不銹鋼層析柱中，石杉堿甲 粗品I分多次進行堿性氧化鋁柱層析分離，每次約115克溶于溶于氯仿中進料，氯仿甲醇 (96 : 4)洗脫，TLC監(jiān)測，收集含石杉堿甲部分的洗脫液，真空快速濃縮，干燥。得石杉堿甲 粗品II。 稱取1800克25 45 ii m的腈基鍵合硅膠，甲醇濕法裝于100*500不銹鋼靜態(tài)軸 向壓縮柱中，手動液壓并固定色譜床，相成約為100*350的制備色譜床。石杉堿甲粗品II 分多次進行制備色譜純化，每次約18. 5克溶于40%的甲醇水溶液中進樣，40%的甲醇水溶 液為流動相，檢測波長220nm。收集石杉堿甲峰對應洗脫液，合并濃縮，干燥，得石杉堿甲精
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權利要求
一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特征在于包括以下步驟a.提取取蛇足石杉用2％醋酸溶液攪拌提取；b.調(diào)堿用氨水調(diào)提取液pH為9，過濾；c.大孔吸附樹脂(SP825型)分離將濾液用大孔吸附樹脂分離；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品I；d.堿性氧化鋁柱層析將石杉堿甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿∶甲醇洗脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品II；e.腈基鍵合硅膠制備色譜將石杉堿甲粗品II用40％甲醇溶解；用40％甲醇洗脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲精品。
2. 按照權利要l所述的一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特征在于所述 的步驟a.提取取粉碎目數(shù)為20的蛇足石杉，在室溫條件下，用2%醋酸溶液攪拌提取2小 時，提取4次；三四次提取液作為循環(huán)提取溶劑。
3. 按照權利要1所述的一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特征在于所述的步驟b.調(diào)堿用氨水調(diào)提取液pH為9，過濾。
4. 按照權利要l所述的一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特征在于所述 的步驟c.大孔吸附樹脂(SP825型)分離將濾液用大孔吸附樹脂分離；用90%甲醇洗脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品I。
5. 按照權利要l所述的一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法，其特征在于所述的步驟d.堿性氧化鋁柱層析將石杉堿甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿甲醇(96 : 4，體積 比)洗脫；收集目標物濃縮，干燥，得到石杉堿甲粗品II。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從蛇足石杉中提取分離石杉堿甲的方法。本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)行的收率較低，成本較高，市場競爭力弱進行改進，建立一條具有工業(yè)化可操作性的從蛇足石杉粉中提取分離石杉堿甲的方法。包括以下步驟原料粉碎→2％醋酸提取→SP825大孔吸附樹脂分離→堿性氧化鋁柱層析分離→腈基鍵合硅膠制備色譜純化→濃縮干燥→成品。本發(fā)明的有益效果是由于采用新的提取工藝，通過簡化操作、減少損失、提高產(chǎn)率，降低成本，增強產(chǎn)品的市場競爭能力。
文檔編號B01J20/22GK101759641SQ201010028988
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月12日 優(yōu)先權日2010年1月12日
發(fā)明者向極釬, 李紅英, 楊永康, 王發(fā)松, 龍瀾 申請人:恩施清江生物工程有限公司