專利名稱：一種陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物分離與醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠分離介質(zhì)及其制備方法。
背景技術(shù)：
超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)層析分離方法是近幾年出現(xiàn)的一種新型生物層析分離技術(shù)，可在高流速下實(shí)現(xiàn)從復(fù)雜料液系統(tǒng)(如發(fā)酵液、培養(yǎng)液等)中直接提取和分離目標(biāo)物。目標(biāo)物吸附過(guò)程中主要利用了對(duì)流傳遞，傳質(zhì)阻力小，吸附分離迅速。該方法集成了擴(kuò)張床和固定床的優(yōu)點(diǎn)，既具有擴(kuò)張床集成化的優(yōu)點(diǎn)，集離心、過(guò)濾、濃縮和層析分離等幾個(gè)步驟為一體，同時(shí)又具有固定床理論塔板數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)。與傳統(tǒng)的固定床和常規(guī)連續(xù)床不同，超大孔連續(xù)床的介質(zhì)即晶膠介質(zhì)是在結(jié)晶致孔條件下制備的，其骨架和孔隙結(jié)構(gòu)與常規(guī)聚合反應(yīng)所得的凝膠結(jié)構(gòu)不同，該晶膠介質(zhì)在水溶液中具有良好的連通性、彈性和復(fù)原能力，在較大的流速變動(dòng)范圍內(nèi)晶膠床柱的理論塔板數(shù)基本不變，床層也不變形，床內(nèi)有許多尺寸達(dá)數(shù)十至數(shù)百微米的超大孔隙，可使原料液中的微生物細(xì)胞、細(xì)胞碎片等固相順利通過(guò)，并可實(shí)現(xiàn)與擴(kuò)張床可比擬的高速處理，其成本較低，在發(fā)酵物、重組蛋白、酶、基因治療用質(zhì)粒DNA、抗體、微生物細(xì)胞、特殊目標(biāo)細(xì)胞等重要生物物質(zhì)的分離提取和純化方面有廣闊應(yīng)用前景。
晶膠介質(zhì)的制備和功能基團(tuán)的固載方法是超大孔連續(xù)床技術(shù)的關(guān)鍵和核心。國(guó)外對(duì)超大孔連續(xù)床技術(shù)的研究始于2002年，主要?dú)W洲的研究小組，已經(jīng)開發(fā)成功了帶羧基的陽(yáng)離子交換型、帶胺基的陰離子交換型、Cu2+親和型等晶膠介質(zhì)，并用于質(zhì)粒DNA、重組蛋白包涵體、尿激酶、細(xì)菌內(nèi)毒素、目的細(xì)胞、病毒顆粒等的分離和純化，但大多數(shù)晶膠的吸附容量很低。將吸附量大的納米粒嵌于晶膠中，以納米粒為吸附位點(diǎn)，得到內(nèi)嵌納米顆粒的超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)，可提高吸附容量(200510060269.X)。通過(guò)接枝聚合反應(yīng)，在介質(zhì)孔隙內(nèi)表面固載功能基團(tuán)，也可提高介質(zhì)吸附容量。
磺酸基(-SO3-)是陽(yáng)離子交換生物分離介質(zhì)中常用的功能基團(tuán)，常見的如甲基磺酸基(-CH2-SO3-)、乙基磺酸基(-CH2-CH2-SO3-)、丙基磺酸基(-CH2-CH2-CH2-SO3-)等等。這些功能基團(tuán)已被證明在生物大分子的吸附和層析分離方面十分有效，對(duì)目標(biāo)生物大分子的吸附容量較大，洗脫方便。因此，在生物大分子和藥物分子的分離純化領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。但是，目前尚沒(méi)有帶磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型晶膠介質(zhì)。因此，開發(fā)該介質(zhì)及其相關(guān)的功能基團(tuán)的固載技術(shù)，具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種帶有磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠分離介質(zhì)。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)，所述的晶膠介質(zhì)內(nèi)有磺酸基-SO3-功能基團(tuán)，所述的晶膠介質(zhì)孔徑為5～300μm。孔隙率55～98％。
其中所述的磺酸基-SO3-功能基團(tuán)是由晶膠介質(zhì)基質(zhì)與可與晶膠介質(zhì)基質(zhì)發(fā)生接枝反應(yīng)的帶有磺酸基的單體反應(yīng)形成聚合物中帶有的基團(tuán)。
進(jìn)一步，所述的帶有磺酸基的單體為下列之一或其任意組合烯丙氧基-2-羥基丙磺酸鹽、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸、甲基丙烯磺酸鈉或苯乙烯磺酸鈉。
所述的晶膠介質(zhì)有較小的理論塔板高度和較大的吸附容量，當(dāng)流速在0.1～10cm/min時(shí)，晶膠床柱等板高度小于0.2cm，吸附容量大于18mg溶菌酶/g晶膠介質(zhì)。
本發(fā)明還提供了一種如上所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，包括如下步驟(1)將床層骨架聚合物單體和交聯(lián)劑制備成總質(zhì)量體積濃度2～15％的水溶液，加入A催化劑后將反應(yīng)液置于冷卻系統(tǒng)中結(jié)晶并進(jìn)行聚合反應(yīng)，后升溫使晶體形成超大孔隙，得到所述的超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)；(2)將可與晶膠介質(zhì)基質(zhì)發(fā)生接枝反應(yīng)的帶有磺酸基的單體在0～100℃，B催化劑的作用下通過(guò)接枝反應(yīng)固載在晶膠介質(zhì)基質(zhì)內(nèi)，即固載在晶膠孔隙內(nèi)表面，即得到所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)。
步驟(1)中所述的床層骨架聚合物單體為含有氨基或酰胺基的可聚合單體，優(yōu)選為下列之一或一種以上混合物丙烯酰胺(AAm)、N，N-二甲基丙烯酰胺(DMAAm)、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(DMAEMA)，更優(yōu)選丙烯酰胺(AAm)或N，N-二甲基丙烯酰胺(DMAAm)。
所述的交聯(lián)劑優(yōu)選為下列之一N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺(MBAAm)、N，N′-雙烯丙?；叶罚瑑?yōu)選為MBAAm。
所述的A催化劑要針對(duì)不同的聚合物單體進(jìn)行選擇，常為相應(yīng)聚合反應(yīng)的引發(fā)劑或是加速劑，針對(duì)本發(fā)明所具體使用的床層骨架聚合物單體和交聯(lián)劑，A催化劑可選用如下物質(zhì)，如過(guò)硫酸銨(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)的任意比例混合物、三乙醇胺，優(yōu)選為過(guò)硫酸銨(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)的混合物。
上述制備方法中，所述的聚合物單體交聯(lián)劑A催化劑的質(zhì)量比為1∶0.01～0.5∶0.01～0.2，聚合物單體占反應(yīng)液的質(zhì)量體積百分比為2～10％；在步驟(1)反應(yīng)結(jié)束后，可進(jìn)行如下處理用水或甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮等有機(jī)溶劑的水溶液清洗，以除去未反應(yīng)的聚合物單體和交聯(lián)劑，得到晶膠介質(zhì)基質(zhì)。
再進(jìn)一步，制備方法的步驟(2)中所述的帶有磺酸基的單體使用時(shí)先配成濃度為0.01～5M的溶液，所述的帶有磺酸基的單體溶液的用量為所述的晶膠介質(zhì)基質(zhì)體積的0.05～10倍。
更進(jìn)一步，所述的帶有磺酸基的單體可與基質(zhì)發(fā)生接枝反應(yīng)，可選含有碳碳雙鍵帶有磺酸基的單體，優(yōu)選下列之一或任意組合3-烯丙氧基-2-羥基丙磺酸鹽、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸(AMPS)、甲基丙烯磺酸鈉、苯乙烯磺酸鈉，更優(yōu)選3-烯丙氧基-2-羥基丙磺酸鈉(AHPSS)和2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸(AMPS)。所述的碳碳雙鍵可與晶膠介質(zhì)基質(zhì)中的酰胺鍵(-CONH2-)在B催化劑的作用下進(jìn)行接枝反應(yīng)，從而將磺酸基團(tuán)固載于晶膠介質(zhì)基質(zhì)內(nèi)。
針對(duì)不同的帶有磺酸基的單體，接枝反應(yīng)所需的B催化劑也有所不同，針對(duì)本反應(yīng)優(yōu)選的上述帶有磺酸基的單體，B催化劑可選自下列之一或其任意比例的混合物Zn、Cu、Ni、Ag金屬的高價(jià)離子的溶液，所述的離子的溶液濃度為0.005～2M，用量為晶膠介質(zhì)基質(zhì)體積的0.2～5倍。
所述的步驟(1)中，反應(yīng)液在-60～0℃范圍內(nèi)冷卻結(jié)晶，優(yōu)選程序控溫冷卻系統(tǒng)的溫度變化歷程為(A)降溫由0℃下降到-30～-10℃；(B)恒溫恒溫5～24小時(shí)；(C)升溫升溫至室溫。
用本發(fā)明提供的方法制備的晶膠介質(zhì)，具有如下特性1)晶膠介質(zhì)的物理性能孔隙率55～98％，孔徑范圍5～300μm，連通性好。以水為例，當(dāng)水流速1cm/min時(shí)，柱壓降梯度小于0.05atm/cm；流速在0.2～10cm/min范圍內(nèi)，介質(zhì)的結(jié)構(gòu)基本不變。
2)晶膠介質(zhì)的吸附分離性能流速在0.1～10cm/min范圍內(nèi)，晶膠床柱等板高度小于0.2cm，分離性能良好，以溶菌酶為例，吸附容量大于18mg溶菌酶/g介質(zhì)。
3)晶膠介質(zhì)的壽命可方便地再生，重復(fù)使用次數(shù)達(dá)15次以上。
本發(fā)明所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)及其制備具有如下優(yōu)點(diǎn)1)晶膠介質(zhì)超大孔隙尺寸較均勻，傳質(zhì)阻力小，連通性好，可在高流速范圍內(nèi)操作；2)對(duì)生物大分子的吸附容量大，分離效率高，洗脫很容易，再生方便；3)應(yīng)用領(lǐng)域廣闊允許微生物細(xì)胞或細(xì)胞碎片順利通過(guò)，可在高流速下從含有微生物細(xì)胞、細(xì)胞碎片等的發(fā)酵液、培養(yǎng)液、裂解液等復(fù)雜料液系統(tǒng)中直接分離目標(biāo)物，適于基因工程下游目標(biāo)物、常規(guī)發(fā)酵物、生化藥物等的大規(guī)模分離提取和純化。
4)單體材料易得，工藝簡(jiǎn)單迅速，成本低，規(guī)模化生產(chǎn)十分容易；具體實(shí)施例方式以下以具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此實(shí)施例1將1.4g AAm單體，0.07g交聯(lián)劑MBAAm溶于15ml去離子水中，攪拌均勻后，迅速加入10mg TEMED和21mg APS，將所得混合液裝入內(nèi)徑16mm、長(zhǎng)200mm的玻璃層析柱內(nèi)，密封后，在可程序控溫的恒溫冷卻系統(tǒng)中，進(jìn)行冷卻結(jié)晶致孔。溫度變化歷程為(A)降溫由0℃下降到-30℃；(B)恒溫恒溫23小時(shí)；(C)升溫升溫至室溫。
然后，在室溫下融化晶體，得到超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)。將基質(zhì)與150ml濃度0.01M的AHPSS單體溶液在0.01M 3價(jià)Zn、Cu離子的溶液催化作用下進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)10h，得到固載磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型晶膠介質(zhì)。其孔隙率56％，SEM顯示其孔徑范圍5～50μm；水流速1cm/min時(shí)，柱壓降梯度0.049atm/cm；流速在0.1～15cm/min范圍內(nèi)，介質(zhì)的結(jié)構(gòu)不變，晶膠床柱內(nèi)等板高度0.09cm；吸附容量18mg溶菌酶/g介質(zhì)，以1～2M NaCl和0.2～0.5M NaOH再生，可重復(fù)使用25次以上。
實(shí)施例2將1.8g DMAAm單體，0.42g交聯(lián)劑N，N′-雙烯丙酰基乙二胺溶于60ml去離子水中，攪拌均勻后，迅速加入33mg TEMED和59mg APS，將所得混合液裝入內(nèi)徑26mm、長(zhǎng)200mm的玻璃層析柱內(nèi)，密封后，在可程序控溫的恒溫冷卻系統(tǒng)中，進(jìn)行冷卻結(jié)晶致孔。溫度變化歷程為(A)降溫由0℃下降到-55℃；(B)升溫升溫至-5℃；(C)恒溫恒溫3小時(shí)；(D)降溫由-5℃重新降溫至-11℃；(E)恒溫恒溫10小時(shí)；(F)升溫升溫至室溫。
然后，在室溫下融化晶體，形成超大孔隙，得到超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)。將基質(zhì)與60ml 2.6M的AHPSS和1.9M AMPS的單體溶液(2∶1)單體溶液在1.8M 2價(jià)Ag離子的溶液催化作用下進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)時(shí)間5h，得到固載磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型晶膠介質(zhì)。其孔隙率88％，孔徑范圍50～230μm；水流速1cm/min時(shí)，柱壓降梯度0.01atm/cm；流速在0.2～10cm/min范圍內(nèi)，介質(zhì)的結(jié)構(gòu)不變，晶膠床柱內(nèi)等板高度0.1cm；吸附容量43mg溶菌酶/g介質(zhì)，以1～2MNaCl和0.2～0.5M NaOH再生，重復(fù)使用18次以上。
實(shí)施例3將0.7g DMAEMA單體，0.35g交聯(lián)劑MBAAm溶于10ml去離子水中，攪拌均勻后，迅速加入58mg TEMED和43mg APS，將所得混合液裝入內(nèi)徑10mm、長(zhǎng)200mm的玻璃層析柱內(nèi)，密封后，在可程序控溫的恒溫冷卻系統(tǒng)中，進(jìn)行冷卻結(jié)晶致孔。溫度變化歷程為(A)降溫由0℃下降到-19℃；
(B)恒溫恒溫6小時(shí)；(C)升溫升溫至室溫。
然后，在室溫下融化晶體，得到超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)。將基質(zhì)與3ml 0.8M的AMPS和0.8M的AHPSS單體溶液(按體積比1∶1)在0.5M 2價(jià)Ag、Ni離子的溶液催化作用下進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)時(shí)間24h，得到固載磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型晶膠介質(zhì)。其孔隙率77％，孔徑范圍5～120μm；水流速1cm/min時(shí)，柱壓降梯度0.036atm/cm；流速在0.1～14cm/min范圍內(nèi)，介質(zhì)的結(jié)構(gòu)不變，晶膠床柱內(nèi)等板高度0.07cm；吸附容量28mg溶菌酶/g介質(zhì)，以1～2M NaCl和0.2～0.5M NaOH再生，重復(fù)使用20次以上。
實(shí)施例4將3g AAm單體，0.3g交聯(lián)劑MBAAm溶于50ml去離子水中，攪拌均勻后，迅速加入28mg TEMED和17mg APS，將所得混合液裝入內(nèi)徑26mm、長(zhǎng)200mm的玻璃層析柱內(nèi)，密封后，在可程序控溫的恒溫冷卻系統(tǒng)中，進(jìn)行冷卻結(jié)晶致孔。溫度變化歷程為(A)降溫由0℃下降到-28℃；(B)恒溫恒溫19小時(shí)；(C)升溫升溫至室溫。
然后，在室溫下融化晶體，得到超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)。將基質(zhì)與0.25ml濃度5M的AMPS單體溶液在1M的3價(jià)Cu、Zn離子的溶液催化作用下進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)時(shí)間18h，得到固載磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型晶膠介質(zhì)。其孔隙率93％，孔徑范圍15～150μm；水流速1cm/min時(shí)，柱壓降梯度0.021atm/cm；流速在0.1～10cm/min范圍內(nèi)，介質(zhì)的結(jié)構(gòu)不變，晶膠床柱內(nèi)等板高度0.18cm；吸附容量33mg溶菌酶/g介質(zhì)，以1～2M NaCl和0.2～0.5M NaOH再生，可重復(fù)使用27次以上。
實(shí)施例5將0.4g DMAEMA單體，0.08g交聯(lián)劑MBAAm溶于23ml去離子水中，攪拌均勻后，迅速加入20mg TEMED和29mg APS，將所得混合液裝入內(nèi)徑16mm、長(zhǎng)200mm的玻璃層析柱內(nèi)，密封后，在可程序控溫的恒溫冷卻系統(tǒng)中，進(jìn)行冷卻結(jié)晶致孔。溫度變化歷程為(A)降溫由0℃下降到-17℃；(B)恒溫恒溫38小時(shí)；(C)升溫升溫至室溫。
然后，在室溫下融化晶體，得到超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)。將基質(zhì)與120ml濃度0.5M的AHPSS單體溶液在1.2M 3價(jià)Cu離子的溶液催化作用下進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)時(shí)間6h，得到固載磺酸基功能基團(tuán)的陽(yáng)離子交換型晶膠介質(zhì)。其孔隙率97％，孔徑范圍60～280μm；水流速1cm/min時(shí)，柱壓降梯度0.01atm/cm；流速在0.1～10cm/min范圍內(nèi)，介質(zhì)的結(jié)構(gòu)基本不變，晶膠床柱內(nèi)等板高度0.13cm；吸附容量21mg溶菌酶/g介質(zhì)，以1～2M NaCl和0.2～0.5M NaOH再生，可重復(fù)使用15次以上。
權(quán)利要求
1.一種陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)，其特征在于所述的晶膠介質(zhì)內(nèi)有磺酸基-SO3-功能基團(tuán)，所述的晶膠介質(zhì)孔徑為5～300μm，孔隙率55～98％。
2.如權(quán)利要求1所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)，其特征在于所述的磺酸基-SO3-功能基團(tuán)是由晶膠介質(zhì)基質(zhì)與可與晶膠介質(zhì)基質(zhì)發(fā)生接枝反應(yīng)的帶有磺酸基的單體反應(yīng)形成聚合物中帶有的基團(tuán)。
3.如權(quán)利要求2所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)，其特征在于所述的帶有磺酸基的單體為下列之一或其任意組合烯丙氧基-2-羥基丙磺酸鹽、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸、甲基丙烯磺酸鈉或苯乙烯磺酸鈉。
4.一種如權(quán)利要求1所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，包括如下步驟(1)將床層骨架聚合物單體和交聯(lián)劑制備成總質(zhì)量體積濃度2～15％的水溶液，加入A催化劑后將反應(yīng)液置于冷卻系統(tǒng)中結(jié)晶并進(jìn)行聚合反應(yīng)，后升溫使晶體形成超大孔隙，得到所述的超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)基質(zhì)；(2)將可與晶膠介質(zhì)基質(zhì)發(fā)生接枝反應(yīng)的帶有磺酸基的單體在0～100℃，B催化劑的作用下，通過(guò)接枝反應(yīng)固載在晶膠介質(zhì)基質(zhì)內(nèi)，即得到所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的帶有磺酸基的單體先配成溶液，濃度為0.01～5M，所述的帶有磺酸基的單體溶液的用量為所述的晶膠介質(zhì)基質(zhì)體積的0.05～10倍。
6.如權(quán)利要求4～5之一所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的帶有磺酸基的單體為下列之一或其任意組合3-烯丙氧基-2-羥基丙磺酸鹽、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸、甲基丙烯磺酸鈉、苯乙烯磺酸鈉。
7.如權(quán)利要求6所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的B催化劑為下列之一或一種以上的金屬的高價(jià)離子的溶液Zn、Cu、Ni、Ag，所述的離子的溶液濃度為0.005～2M，離子的溶液的用量為晶膠介質(zhì)基質(zhì)體積的0.2～5倍。
8.如權(quán)利要求4或5所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的床層骨架聚合物單體為含有氨基或酰胺基的可聚合單體。
9.如權(quán)利要求8所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的床層骨架聚合物單體為下列之一或一種以上混合物丙烯酰胺、N，N-二甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯；所述的交聯(lián)劑為下列之一N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺、N，N′-雙烯丙?；叶?。
10.如權(quán)利要求9所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的A催化劑為下列之一過(guò)硫酸銨和四甲基乙二胺、三乙醇胺；所述的聚合物單體∶交聯(lián)劑∶A催化劑的質(zhì)量比為1∶0.01～0.5∶0.01～0.2。
11.如權(quán)利要求4所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)反應(yīng)液在-60～0℃范圍內(nèi)冷卻結(jié)晶。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠分離介質(zhì)及其制備方法。所述的陽(yáng)離子交換型超大孔連續(xù)床晶膠介質(zhì)內(nèi)有磺酸基－SO
文檔編號(hào)B01J39/00GK1903438SQ20061005243
公開日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2006年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月12日
發(fā)明者姚克儉, 贠軍賢, 沈紹傳 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué), 浙江工大東暉科技發(fā)展有限公司