專利名稱：作為抗氧化劑的(-)-橄欖脂素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由新的植物來(lái)源，羽葉楸屬(Stereospermum)的Stereospermum Personatum，以令人滿意的收率分離出化合物(-)-橄欖脂素。它被證明是有效的且優(yōu)于目前使用的重要的醫(yī)用親脂性抗氧化劑普羅布考和α-生育酚的抗氧化劑分子。它在炎性疾病癥狀、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病并發(fā)癥、癌癥、肝臟毒性和各種通過(guò)由自由基生成增加或在自由基的清除下所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激和/或明顯的氧化負(fù)載所介導(dǎo)或促進(jìn)的疾病癥狀中可能具有更好的治療效果。
背景技術(shù)：
大量流行病學(xué)證據(jù)表明，在食用豐富的水果和蔬菜與降低心血管疾病和某些癌癥形成的危險(xiǎn)之間存在聯(lián)系。人們通常假定促進(jìn)這些保護(hù)效應(yīng)的有效成分主要為植物化學(xué)抗氧化劑。
過(guò)去幾十年的研究積累了足夠的證據(jù)，顯示出自由基清除劑/抗氧化劑作為抗誘變、抗炎藥、抗amerosclerotic、抗糖尿病、抗肝毒性、抗老化劑和在各種神經(jīng)系統(tǒng)紊亂中的有益效果。因此，尋找新的抗氧化劑要素變得很重要，以改善由于自由基/氧化性損傷或由于抗氧化劑/氧化劑動(dòng)態(tài)平衡之間的不平衡導(dǎo)致的有關(guān)的病理學(xué)癥狀比如白內(nèi)障、風(fēng)濕性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病及其它神經(jīng)退行性癥狀的藥理學(xué)治療。
因此，藥理學(xué)研究集中在尋找富含抗氧化劑要素的潛在的資源。為此，富含抗氧化劑要素部分的重要的醫(yī)學(xué)植物變成了熱門貨。
Stereospermum personatum是一種用于傳統(tǒng)印度醫(yī)藥學(xué)派的藥用植物，廣泛地用于制備利尿劑，溶石藥，祛痰劑，強(qiáng)心劑，春藥，開(kāi)胃食品，抗炎藥，抗菌劑，消化不良，腹瀉，腎和膀胱結(jié)石，咳嗽，哮喘，劇渴，痔和胃酸過(guò)多癥的疾病癥狀(Indian Medicinal Plants，第5卷，192頁(yè))。進(jìn)一步報(bào)道了其具有抗菌、抗真菌、低血糖的活性，和抗p388淋巴細(xì)胞白血病的細(xì)胞活性(Ind.Jour，of Exp.Biol.，1971，9，100)。因此，尋找具有這樣重要的生物學(xué)特性的分子成為相關(guān)的內(nèi)容。在這一點(diǎn)上，已經(jīng)進(jìn)行了Stereospermum personatum的植物化學(xué)研究。申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)努力以令人滿意的收率分離出(-)-橄欖脂素。
已知(-)-橄欖脂素具有某些活性，如表1所示。
表1

發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的是提供一種用作抗氧化劑的新的含有(-)-橄欖脂素和添加劑的組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種以良好的收率獲得(-)-橄欖脂素的新來(lái)源。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種由植物來(lái)源即Stereospermumpersonatum制備(-)-橄欖脂素的方法。
本發(fā)明的另一目的涉及(-)-橄欖脂素作為抗氧化劑的應(yīng)用。
發(fā)明概述相應(yīng)地，本發(fā)明提供一種含有(-)-橄欖脂素的新組合物，和其作為抗氧化劑的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種由新的植物來(lái)源即Stereospermum Personatum分離(-)-橄欖脂素的方法。
根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)(-)-橄欖脂素可由一種新的來(lái)源，Stereospermum Personatum以高收率分離出來(lái)，且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)(-)-橄欖脂素顯示出抗氧化劑性質(zhì)。
發(fā)明的詳細(xì)描述近來(lái)抗氧化劑化合物由于它們?cè)诙嘀仄鹨虻恼系K即冠心病、癌癥、糖尿病、風(fēng)濕病和炎癥性癥狀(其中自由基起重要的作用)中的廣譜性活性而吸引了人們的注意?，F(xiàn)在許多注意力都集中在來(lái)自自然資源的抗氧化劑化合物的利用和獲得。
化合物(-)-橄欖脂素是以純的形式使用的。因此，比目前所用的具有類似性質(zhì)的化合物混合物的利用更為有利。值得注意的是分離(-)-橄欖脂素的方法相當(dāng)經(jīng)濟(jì)也是重要的。
本發(fā)明提供一種含有抗氧化劑要素的有用來(lái)源，StereospermumPersonatum，其中(-)-橄欖脂素是以純的和有效的抗氧化劑分子被分離。將(-)-橄欖脂素與現(xiàn)有的藥理學(xué)/治療上可接受的抗氧化劑普羅布考和α-生育酚進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)(-)-橄欖脂素優(yōu)于上述的參考藥物，因此可與藥學(xué)/治療學(xué)可接受的添加劑一起使用。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用比上述參考藥物更少量的(-)-橄欖脂素而起效。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種用作抗氧化劑的組合物，所述組合物包含與藥學(xué)可接受的添加劑結(jié)合或聯(lián)用的有效量的(-)-橄欖脂素。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，藥學(xué)可接受的添加劑以不影響或干擾(-)-橄欖脂素效果的方式進(jìn)行選擇。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，添加劑選自營(yíng)養(yǎng)素比如碳水化合物，糖，蛋白質(zhì)，脂肪和藥學(xué)可接受的載體。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，(-)-橄欖脂素與添加劑的比例在0.1∶10到3∶10的范圍，優(yōu)選為0.4∶10到2∶10的范圍。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，(-)-橄欖脂素的給藥量在每劑量300毫克到400毫克的范圍，至少每天給藥兩次。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，該組合物是通過(guò)口服途徑以片劑、膠囊、糖漿或粉末的形式給藥。
在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案中涉及由植物Stereospermumpersonatum分離(-)-橄欖脂素的方法，所述方法包含以下步驟a)用己烷提取Stereospermum Personatum的干木粉末；b)用氯仿進(jìn)一步提取步驟(a)的殘余物；c)將步驟(b)得到的氯仿溶液真空濃縮；d)用硅膠(60-120目)吸附暗褐色提取物并加載在硅膠(60-120目)柱(直徑4厘米，高100厘米)上；
e)將上述柱用氯仿/甲醇梯度洗脫，和f)收集用4％甲醇/氯仿洗脫的餾份并將所述餾份濃縮，獲得純的(-)-橄欖脂素。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，所用的溶劑選自己烷、氯仿和甲醇。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，所獲得的(-)-橄欖脂素的收率為植物干材的大約0.073％。
還有一個(gè)實(shí)施方案涉及(-)-橄欖脂素作為用于動(dòng)物和人的抗氧化劑或自由基清除劑的應(yīng)用。
在另一實(shí)施方案中涉及(-)-橄欖脂素在制造有效用作抗氧化劑的組合物中的應(yīng)用。
在本發(fā)明另一實(shí)施方案中，(-)-橄欖脂素是經(jīng)口服給藥。
本發(fā)明又一實(shí)施方案涉及自由基清除治療的方法，該方法包括給需要治療的患者以有效量的(-)-橄欖脂素的步驟，優(yōu)選(-)-橄欖脂素是以300毫克-400毫克/劑，每天兩次給藥。
因此，Stereospermum persorzatum是(-)-橄欖脂素的一種新來(lái)源，且因其以高收率存在于此植物中，使得本發(fā)明更為重要。在表2中給出了由不同植物得到(-)-橄欖脂素收率的比較。
表2

本發(fā)明具體表現(xiàn)為作為來(lái)源于新的植物來(lái)源的抗氧化劑要素的(-)-橄欖脂素的分離，以及與藥用重要的抗氧化劑藥物分子相比較其自由基清除性質(zhì)的鑒定。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1表示來(lái)源于Stereospermum personatum的(-)-橄欖脂素和參考化合物的抗氧化劑(抗自由基，DPPH)活性。
圖2表示(-)-橄欖脂素的結(jié)構(gòu)。
在下面的實(shí)施例中進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，這些實(shí)施例是以舉例說(shuō)明的方式給出的，因此將不會(huì)被視為以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)規(guī)程分離上述木酚素的方法。在索格利特抽提器上加載Stereospermum personatum(3千克)干木粉末。首先用己烷提取粉末。用氯仿進(jìn)一步提取由己烷萃取得到的殘余物；將氯仿溶液真空濃縮。用硅膠(60-120目)吸附暗褐色提取物(22克)并加載在硅膠(60-120目)柱(直徑4厘米，高100厘米)上。
將上述柱用氯仿/甲醇梯度洗脫。氯仿/甲醇的梯度根據(jù)要獲得的特定餾份并由此獲得所需的化合物加以選擇。在此情況下，用4％甲醇/氯仿分別收集洗脫的餾份并濃縮。
將上述餾份進(jìn)一步地使用硅膠柱(＞200目，直徑2.5厘米，長(zhǎng)度50厘米)用氯仿/甲醇梯度純化。用4％甲醇/氯仿洗脫，獲得純的(-)-橄欖脂素(2.2克)。(-)-橄欖脂素的光譜化學(xué)數(shù)據(jù)如下(-)-橄欖脂素1.分子式C20H24O72. ‘ HNMRδ2.45(1H，m)，2.9(1H，d)，3.05(1H，d)，3.65(1H，d)，3.95-3.80(3H，m)，3.85(6H，s)，4.7(1H，d)，5.6(Ar-OH，s)，5.65(Ar-OH，s)，6.75-6.90(5H，m)，7.1(1H，s).
3.13CNMRδ39.19(C-7’)，55.80(2xOCH3)，59.42(C-8’)，59.91(C-9)，77.79(C-9′)，81.18(C-8’)，83.64(C-7)，109.60(C-2’)，113.50(C-2)，114.46(C-5，)，lI4.60(C-5)，119(C-6，)，I22.83(C-6)，128.56(C-1)，133.64(C-1’)，144.56(C-4，)，145.47{C-4)，146.82(c-3’)，147.18(C-3).
4.MS376(M+)5.IR3401cm-1自由基清除抗氧化劑效力的體外評(píng)價(jià)由清除廣泛使用的自由基，1，1-二苯基-2-苦基肼基自由基(DPPH)的能力/效力進(jìn)行化合物的抗氧化劑活性測(cè)定。以廣泛可接受和試驗(yàn)的抗氧化劑即普羅布考和α-生育酚作為參考化合物。制備化合物的1毫克/毫升DMSO濃縮物，隨后用DMSO稀釋到較低的濃度。將200μ1試驗(yàn)化合物在Tris-HCl緩沖液(pH值7.4)中復(fù)原到1毫升。取等體積的500μM DPPH自由基溶于乙醇與其進(jìn)行反應(yīng)。在黑暗中孵化45分鐘后，記錄在517nm處的吸光率。相應(yīng)地計(jì)算自由基清除活性百分?jǐn)?shù)。所有的讀數(shù)都重復(fù)三次。結(jié)果(圖1和表3)表明所測(cè)定的化合物具有有效的抗氧化劑/自由基清除性質(zhì)。
表3化合物的50％自由基清除濃度

權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)1.用作抗氧化劑的藥物組合物，其中包括有效量的(-)-橄欖脂素和藥學(xué)可接受的添加劑。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的添加劑以不影響或干擾(-)-橄欖脂素效果的方式選擇。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的添加劑選自營(yíng)養(yǎng)素。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所用的營(yíng)養(yǎng)素可以是碳水化合物。
5.權(quán)利要求3的組合物，其中所用的營(yíng)養(yǎng)素可以是糖。
6.權(quán)利要求3的組合物，其中所用的營(yíng)養(yǎng)素可以是蛋白質(zhì)。
7.權(quán)利要求3的組合物，其中所用的營(yíng)養(yǎng)素可以是脂肪。
8.權(quán)利要求3的組合物，其中所用的營(yíng)養(yǎng)素可以是適宜的藥學(xué)可接受的載體。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中(-)-橄欖脂素與已知的抗氧化劑相比以較低的劑量起效。
10.權(quán)利要求1的組合物，其中(-)-橄欖脂素的給藥量在每劑量300毫克到400毫克的范圍，至少每天給藥兩次。
11.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的組合物是以片劑、膠囊、糖漿或和粉末的形式給藥。
12.一種由植物Stereospermum personatum分離(-)-橄欖脂素的方法，其中所述的(-)-橄欖脂素是構(gòu)成權(quán)利要求1組合物的活性組分，所述方法包括以下步驟a)用己烷提取Stereospermum Personatum的干木粉末；b)用氯仿進(jìn)一步提取步驟(a)的殘余物；c)將步驟(b)得到的氯仿溶液減壓濃縮，獲得暗褐色提取物；d)用硅膠(60-120目)吸附步驟(c)的暗褐色提取物并加載在硅膠(60-120目)柱(直徑4厘米，高100厘米)上；e)用氯仿-甲醇的混合物梯度洗脫步驟(d)的產(chǎn)物，和f)收集用4％甲醇/氯仿洗脫的餾份，并將所收集的餾份濃縮，獲得純的(-)-橄欖脂素。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所用的溶劑是己烷、氯仿和/或甲醇。
14.權(quán)利要求12的方法，其中(-)-橄欖脂素的收率大約為植物干材的0.073％。
15.權(quán)利要求12的方法，其中(-)-橄欖脂素是從一種新的來(lái)源Stereospermum personatum獲得的。
16.(-)-橄欖脂素作為動(dòng)物和人哺乳動(dòng)物的抗氧化劑或自由基清除劑的應(yīng)用。
17.(-)-橄欖脂素在制備用作抗氧化劑的組合物中的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述含有有效量的(-)-橄欖脂素的組合物經(jīng)口服給藥。
19.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述的組合物含有選自營(yíng)養(yǎng)素的添加劑。
20.權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中所述的營(yíng)養(yǎng)素可以是碳水化合物。
21.權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中所述的營(yíng)養(yǎng)素可以是糖。
22.權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中所述的營(yíng)養(yǎng)素可以是蛋白質(zhì)。
23.權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中所述的營(yíng)養(yǎng)素可以是脂肪。
24.權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中所述的營(yíng)養(yǎng)素可以是藥學(xué)可接受的載體。
25.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中含有有效量(-)-橄欖脂素的組合物以每劑量300毫克到400毫克的范圍給藥，至少每天給藥兩次。
關(guān)于條約19(1)的聲明本發(fā)明涉及用作抗氧化劑活性的(-)-橄欖脂素從新的來(lái)源Stereospermum personatum的分離，以及含有橄欖脂素和任選添加劑的組合物。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，該組合物含有有效量的用作抗氧化劑的(-)-橄欖脂素和添加劑或與添加劑聯(lián)用。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述藥學(xué)可接受的添加劑以不影響或干擾(-)-橄欖脂素效果的方式選擇。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的添加劑選自營(yíng)養(yǎng)素如碳水化合物、糖、蛋白質(zhì)、脂肪和藥學(xué)可接受的載體。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中(-)-橄欖脂素以較低的量起效。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述(-)-橄欖脂素的給藥量在每劑量300毫克到400毫克的范圍，至少每天給藥兩次。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中該組合物是以片劑、膠囊、糖漿和粉末的形式給藥。
7.一種由植物Stereospermum personatum分離(-)-橄欖脂素的方法，所述方法包括以下步驟a)用己烷提取Stereospermum Personatum的干木粉末；b)用氯仿提取步驟(a)的殘余物；c)將步驟(b)得到的氯仿溶液真空濃縮；d)用硅膠(60-120目)吸附暗褐色提取物并加載在硅膠(60-120目)柱(直徑4厘米，高100厘米)上；e)用氯仿/甲醇對(duì)上述柱梯度洗脫，和f)收集用4％甲醇/氯仿洗脫的餾份并將該餾份濃縮，獲得純的(-)-橄欖脂素。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述的溶劑是己烷、氯仿和甲醇。
9.權(quán)利要求7的方法，其中(-)-橄欖脂素的收率大約為植物干材的0.073％。
10.(-)-橄欖脂素作為用于動(dòng)物和人的抗氧化劑或自由基清除劑的應(yīng)用。
11.(-)-橄欖脂素在制備用作抗氧化劑的組合物中的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中(-)-橄欖脂素經(jīng)口服給藥。
13.權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中所述的組合物包括選自營(yíng)養(yǎng)素如碳水化合物、糖、蛋白質(zhì)、脂肪和藥學(xué)可接受的載體的添加劑。
14.一種用于自由基清除治療的方法，該方法包括給需要治療的患者施用有效量的(-)-橄欖脂素的步驟。
15.權(quán)利要求14的方法，其中的(-)-橄欖脂素以每劑量300毫克到400毫克的范圍，至少每天兩次進(jìn)行給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用作抗氧化劑的藥物組合物，其中含有有效量的(－)－橄欖脂素和添加劑；由植物Stereospermum personatum分離(－)－橄欖脂素的方法；以及涉及活性餾份(－)－橄欖脂素作為抗氧化劑和自由基清除劑的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C09K15/08GK1536996SQ01823499
公開(kāi)日2004年10月13日 申請(qǐng)日期2001年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月27日
發(fā)明者亞納斯瓦米·馬德胡蘇達(dá)納·拉奧, 阿肖克·庫(kù)馬爾·蒂瓦里, 厄帕拉帕利·薩姆帕斯·庫(kù)馬爾, 杰希盧·辛格·亞達(dá)夫, 孔達(dá)普拉姆·維賈雅·拉加萬(wàn), 庫(kù)馬爾 蒂瓦里, 辛格 亞達(dá)夫, 亞納斯瓦米 馬德胡蘇達(dá)納 拉奧, 帕利 薩姆帕斯 庫(kù)馬爾, 拉姆 維賈雅 拉加萬(wàn) 申請(qǐng)人:科學(xué)和工業(yè)研究委員會(huì)