一種制備人凝血酶原復(fù)合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種人凝血酶原復(fù)合物的制備方法，它包括如下步驟：(1)預(yù)純化；(2)S/D病毒滅活；(3)精制純化；(4)配制，除菌，分裝，凍干，干熱處理，即可。本發(fā)明方法FIX回收率高達(dá)約58?67萬IU/噸血漿，且對人血白蛋白和免疫球蛋白的非特異性吸附少，不會導(dǎo)致寶貴的血漿資源浪費(fèi)，且無需采用柱層析等高成本的方法，成本低廉，應(yīng)用前景良好。
【專利說明】
一種制備人凝血酶原復(fù)合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于血液制品領(lǐng)域，具體涉及一種制備人凝血酶原復(fù)合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人凝血酶原復(fù)合物，主要用于治療先天性和獲得性凝血因子n、W、K、X缺乏癥 (單獨(dú)或聯(lián)合缺乏)包括：1.凝血因子IX缺乏癥（乙型血友?。?，以及n、w、x凝血因子缺乏 癥;2.抗凝劑過量、維生素K缺乏癥;3.肝病導(dǎo)致的出血患者需要糾正凝血功能障礙時;4.各 種原因所致的凝血酶原時間延長而擬作外科手術(shù)患者，但對凝血因子V缺乏者可能無效;5. 治療已產(chǎn)生因子珊抑制物的甲型血友病患者的出血癥狀;6.逆轉(zhuǎn)香豆素類抗凝劑誘導(dǎo)的出 血。
[0003] 人凝血酶原復(fù)合物是從健康人血漿中分離的血漿制品，合適的反應(yīng)條件和保護(hù)劑 的使用對工藝中FIX收率有顯著性影響，但是目前制備人凝血酶原復(fù)合物的方法存在FIX回 收率低，對血漿中其他有效成分影響大的問題。
[0004] 如，魏舒等，"凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)工藝研究"，中國輸血雜志，2008，21
[4] :282~284公開了一種人凝血酶原復(fù)合物生產(chǎn)工藝，制品經(jīng)過S/D病毒滅活時未采取合 適的保護(hù)劑，凝血因子II、VII、IX和X活性回收率分別損失20 %左右。
[0005] 公告號10 2151289B的專利申請公開了 一種制備人凝血酶原復(fù)合物的方法，其FIX 回收率僅為45~49萬IU/噸血漿，且未采取降低人血白蛋白和免疫球蛋白的非特異性吸附 的步驟，導(dǎo)致寶貴的血漿資源浪費(fèi)。
[0006] 公開號為104109202A的專利申請也公開了一種制備人凝血酶原復(fù)合物的方法，其 FIX回收率較高，但是其工藝中多步澄清過濾增加操作難度和生產(chǎn)成本，并且按照柱床體積 與上樣的血漿量的比例為1:10~1:50來計算，要實現(xiàn)1噸血漿/批的處理，使用凝膠量為20 ~100L，按Capto DEAE市場價格計算，凝膠成本為300~1500萬元，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于每噸血衆(zhòng)實現(xiàn) 人凝血酶原復(fù)合物價值，因此，成本太高，實際應(yīng)用價值不大。
[0007] 因此，需要提供一種成本低廉的、FIX回收率高的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了一種人凝血酶原復(fù)合物的制備方法。
[0009] 去冷沉淀上清血漿:即去冷沉淀血漿。
[0010] 本發(fā)明人凝血酶原復(fù)合物的制備方法，它包括如下步驟：
[0011] (1)預(yù)純化
[0012] 取去冷沉淀上清血漿，調(diào)節(jié)溫度和pH分別為10~15°C和7.0~7.4，按照每1L上清 血漿使用1.4~1.6g A50凝膠干粉的比例加入溶脹后的凝膠，吸附；收集凝膠，依次采用平 衡緩沖液、洗滌緩沖液和洗脫緩沖液處理凝膠，收集洗脫液，超濾透析；
[0013] (2)S/D 病毒滅活；
[0014] (3)精制純化
[0015] 將制品溫度和pH分別調(diào)節(jié)至10~15°C和7.0~7.4，按照每1L上清血漿使用1.2~ 1.5g A50凝膠干粉的比例加入溶脹后的凝膠，吸附；收集凝膠，依次采用平衡緩沖液、洗滌 緩沖液和洗脫緩沖液處理凝膠，收集洗脫液，超濾透析；
[0016] (4)干熱處理，即可。
[0017] 步驟（1)和步驟(3)中，平衡緩沖液、洗滌緩沖液和洗脫緩沖液均是含有NaCl和枸 櫞酸鈉的溶液。
[0018] 優(yōu)選地，
[0019] 平衡緩沖液中，NaCl、枸櫞酸鈉的濃度分別為0 ? 08mol/L、0 ? Olmol/L;
[0020] 洗滌緩沖液中，NaCl、枸櫞酸鈉的濃度分別為0.17~0.23mol/L、0.0 lmol/L;
[0021] 洗脫緩沖液中，NaCl、枸櫞酸鈉的濃度分別為2.0mol/L、0.015mol/L。
[0022] 步驟（1)中，吸附的時間為45~60min。
[0023] 步驟（1)中，透析采用的透析液是溫度為15~25°C、pH為7.0~7.4的濃度為 0.015mol/L的枸櫞酸鈉溶液。
[0024] 步驟(2)中，所述S/D病毒滅活的方法是:取步驟（1)制得的制品，加入肝素鈉，再加 入Tween-80和TNBP使Tween-80和TNBP的最終濃度分別為1 % (w/v)和0.3% (v/v)，待制品溫 度達(dá)到24°C開始計時，控制溫度24~26°C，時間6小時。其中，肝素鈉的加入量為1~3IU/ml 制品。
[0025] 步驟(3)中，吸附的時間為30~60min。
[0026] 步驟(3)中，透析采用的透析液是含0. lmo 1/L NaCl、0.015mo 1/L枸櫞酸鈉、20g/L 甘氨酸和5g/L鹽酸賴氨酸的溶液，其溫度為15~25°C、pH為6.9~7.1。
[0027]步驟(4)中，配置時加入肝素鈉，肝素鈉加入量是制品中FIX含量的0.1~0.3倍。 [0028] 步驟(4)中，干熱處理的條件是80°C干熱處理72小時。
[0029] 本發(fā)明方法FIX回收率高達(dá)約58-67萬IU/噸血漿，且對人血白蛋白和免疫球蛋白 的非特異性吸附少，不會導(dǎo)致寶貴的血漿資源浪費(fèi)，且無需采用柱層析等高成本的方法，成 本低廉，應(yīng)用前景良好。
[0030]顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0031]以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0032] 圖1為人凝血酶原復(fù)合物的制備流程圖。
【具體實施方式】
[0033] 下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照試劑盒 說明書選擇。
[0034]實驗試劑：枸櫞酸鈉，氯化鈉，甘氨酸，鹽酸賴氨酸，DEAE Sephadex A50凝膠均為 市售品。
[0035]實施例1本發(fā)明人凝血酶原復(fù)合物的制備方法 [0036] 一、制備方法
[0037] ⑴預(yù)純化
[0038]將原料血漿融化，離心去除冷沉淀，將冷上清血漿升溫至10°C，用醋酸緩沖液將pH 調(diào)整到7.0。按1.4g A50凝膠干粉/L冷上清血漿比例添加溶脹后的凝膠，吸附時間為45min。 收集凝膠，依次采用平衡、洗滌和洗脫緩沖液處理凝膠。收集的洗脫液經(jīng)澄清過濾后，再進(jìn) 行超濾透析，完成后計量制品的體積。
[0039] (2)S/D病毒滅活
[0040]按1 IU/ml制品比例加入肝素鈉后，再根據(jù)制品的體積加入S/D儲備液，使最終 Tween~80和TNBP的濃度分別為1 %和0.3%。待制品溫度達(dá)到24°C開始計時，控制溫度24~ 26°C，時間6小時，每半個小時記錄制品溫度一次。
[0041 ] (3)精制純化
[0042] 將制品溫度和pH分別調(diào)整到10°C和7.0,按1.2g A50凝膠干粉/L冷上清血漿比例 添加溶脹后的凝膠，吸附時間為30min。收集凝膠，依次采用平衡液、洗滌液和洗脫緩沖液液 處理凝膠。收集的洗脫液經(jīng)澄清過濾后，再進(jìn)行超濾透析，透析結(jié)束后，對制品進(jìn)行計量，并 抽樣檢測原液pH、蛋白濃度和FIX活性。按照分裝規(guī)格添加透析緩沖液，按0.1IU/IU FIX加 入肝素鈉，混勻。除菌分裝后的制品應(yīng)立即凍干。
[0043] (4)干熱處理
[0044] 凍干后的制品經(jīng)80°C、72小時干熱處理，以滅活可能殘留的污染病毒。干熱處理完 成后即得人凝血酶原復(fù)合物成品，檢定結(jié)果如表1所示。
[0045] 其中，平衡液含0 ? 08mol/L NaCl和0 ? 01mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為10 °C，pH值為 7.0；
[0046] 洗滌液含0 ? 17mol/L NaCl和0 ? 01mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為10°C，pH值為7 ? 0;
[0047] 洗脫液含2.0mol/L NaCl和0.015mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為10°C，pH值為7.0;
[0048] 首次透析液含0.015mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為15°C，pH值為7.0;
[0049] 二次透析液含0 . lmol/L NaCl，0.015mol/L枸櫞酸鈉，20g/L甘氨酸和5g/L鹽酸賴 氨酸，溫度值為15°C，pH值為6.9;
[0050] S/D儲備液含200g吐溫80和60ml磷酸三丁酯加注射用水至1L的方法制備。
[0051] 二、檢測
[0052] 1、檢測方法
[0053] (1 )FIX收率的檢測方法:按《中國藥典》2015年版三部"人凝血因子IX效價測定法 (通則3519)"檢定。
[0054] (2)人血白蛋白和免疫球蛋白的檢測方法:按貝克曼庫爾特IMMAGE800特定蛋白分 析系統(tǒng)及其配套試劑檢測白蛋白和免疫球蛋白含量。
[0055] 2、檢測結(jié)果
[0056] (l)FIX 回收率
[0057] 經(jīng)檢測，本發(fā)明工藝的FIX回收率為58萬(FIX IU/噸血漿）。
[0058] (2)人血白蛋白和免疫球蛋白的收率
[0059] 結(jié)果如下表：
[0061 ]可以看出，采用本發(fā)明方法制備人凝血酶原復(fù)合物，白蛋白和免疫球蛋白的回收 率高達(dá)100%和98%。
[0062]實施例2本發(fā)明人凝血酶原復(fù)合物的制備方法 [0063] 一、制備方法
[0064] ⑴預(yù)純化
[0065]將原料血漿融化，離心去除冷沉淀，將冷上清血漿升溫至13°C，用醋酸緩沖液將pH 調(diào)整到7.2。按1.5g A50凝膠干粉/L冷上清血漿比例添加溶脹凝膠，吸附時間為50min。收集 凝膠，依次采用平衡、洗滌和洗脫緩沖液處理凝膠。收集的洗脫液經(jīng)澄清過濾后，再進(jìn)行超 濾透析，完成后計量制品的體積。
[0066] ⑵S/D病毒滅活
[0067] 按2IU/ml制品比例加入肝素鈉后，再加入S/D儲備液使最終Tween~80和TNBP的濃 度分別為1 %和〇. 3 %。待制品溫度達(dá)到24°C開始計時，控制溫度24~26°C，時間6小時，每半 個小時記錄制品溫度一次。
[0068]⑶精制純化
[0069] 將制品溫度和pH分別調(diào)整到13°C和7.2,按1.3g A50凝膠干粉/L冷上清血漿比例 添加溶脹凝膠，吸附時間為45min。收集凝膠，依次采用平衡液、洗滌液和洗脫緩沖液液處理 凝膠。收集的洗脫液經(jīng)澄清過濾后，再進(jìn)行超濾透析，透析結(jié)束后，對制品進(jìn)行計量，并抽樣 檢測原液pH、蛋白濃度和FIX活性。按照分裝規(guī)格添加透析緩沖液，按0.2IU/IU FIX加入肝 素鈉，混勻。除菌分裝后的制品應(yīng)立即凍干。
[0070] ⑷干熱處理
[0071] 凍干后的制品經(jīng)80°C、72小時干熱處理，以滅活可能殘留的污染病毒。
[0072]干熱處理完成后即得人凝血酶原復(fù)合物成品，檢定結(jié)果如表1所示。
[0073] 其中，平衡液含0 ? 08mol/L NaCl和0 ? 01mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為13 °C，pH值為 7.2；
[0074] 洗滌液含0.20111〇1/1恥(：1和0.01111〇1/1枸櫞酸鈉，溫度值為13°(：411值為7.2 ;
[0075] 洗脫液含2.0111〇1/1恥(：1和0.015111〇1/1枸櫞酸鈉，溫度值為13。(：411值為7.2 ;
[0076]首次透析液含0.015mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為20°C，pH值為7.2;
[0077] 二次透析液含0 ? lmol/L NaCl，0.015mol/L枸櫞酸鈉，20g/L甘氨酸和5g/L鹽酸賴 氨酸，溫度值為20 °C，pH值為7.0;
[0078] S/D儲備液含200g吐溫80和60ml磷酸三丁酯加注射用水至1L的方法制備。
[0079] 二、檢測
[0080] 1、檢測方法
[0081 ] (1 )FIX收率的檢測方法:按《中國藥典》2015年版三部"人凝血因子IX效價測定法 (通則3519)"檢定。
[0082] (2)人血白蛋白和免疫球蛋白的檢測方法:按貝克曼庫爾特IMMAGE800特定蛋白分 析系統(tǒng)及其配套試劑檢測白蛋白和免疫球蛋白含量。
[0083] 2、檢測結(jié)果
[0084] (l)FIX 回收率
[0085] 經(jīng)檢測，本發(fā)明工藝的FIX回收率為67萬(FIX IU/噸血漿）。
[0086] (2)人血白蛋白和免疫球蛋白的收率
[0087] 結(jié)果如下表：
[0089] 可以看出，采用本發(fā)明方法制備人凝血酶原復(fù)合物，白蛋白和免疫球蛋白的回收 率高達(dá)101%和102%。
[0090] 實施例3本發(fā)明人凝血酶原復(fù)合物的制備方法
[0091] 一、制備方法
[0092] ⑴預(yù)純化
[0093]將原料血漿融化，離心去除冷沉淀，將冷上清血漿升溫至15°C，用醋酸緩沖液將pH 調(diào)整到7.4。按1.6g A50凝膠干粉/L冷上清血漿比例添加溶脹凝膠，吸附時間為60min。收集 凝膠，依次采用平衡、洗滌和洗脫緩沖液處理凝膠。收集的洗脫液經(jīng)澄清過濾后，再進(jìn)行超 濾透析，完成后計量制品的體積。
[0094] ⑵S/D病毒滅活
[0095] 按3IU/ml制品比例加入肝素鈉后，再加入S/D儲備液使最終Tween~80和TNBP的濃 度分別為1 %和〇. 3 %。待制品溫度達(dá)到24°C開始計時，控制溫度24~26°C，時間6小時，每半 個小時記錄制品溫度一次。
[0096]⑶精制純化
[0097] 將制品溫度和pH分別調(diào)整到15°C和7.4,按1.5g A50凝膠干粉/L冷上清血漿比例 添加溶脹凝膠，吸附時間為60min。收集凝膠，依次采用平衡液、洗滌液和洗脫緩沖液液處理 凝膠。收集的洗脫液經(jīng)澄清過濾后，再進(jìn)行超濾透析，透析結(jié)束后，對制品進(jìn)行計量，并抽樣 檢測原液pH、蛋白濃度和FIX活性。按照分裝規(guī)格添加透析緩沖液，按0.3IU/IU FIX加入肝 素鈉，混勻。除菌分裝后的制品應(yīng)立即凍干。
[0098] ⑷干熱處理
[0099]凍干后的制品經(jīng)80°C、72小時干熱處理，以滅活可能殘留的污染病毒。
[0100]干熱處理完成后即得人凝血酶原復(fù)合物成品，檢定結(jié)果如表1所示。
[0101] 其中，平衡液含0.08mol/L NaCl和0.01mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為15°C，pH值為 7.4；
[0102] 洗滌液含0.23111〇1/1恥(：1和0.01111〇1/1枸櫞酸鈉，溫度值為15°(：411值為7.4 ;
[0103] 洗脫液含2. Omol/L NaCl和0.015mol/L枸櫞酸鈉，溫度值為15°C，pH值為7.4;
[0104]首次透析液含0.015111〇1/1枸櫞酸鈉，溫度值為25°(：411值為7.4;
[0105] 二次透析液含0.1mol/L NaCl，0.015mol/L枸櫞酸鈉，20g/L甘氨酸和5g/L鹽酸賴 氨酸，溫度值為25°C，pH值為7.1;
[0106] S/D儲備液含200g吐溫80和60ml磷酸三丁酯加注射用水至1L的方法制備。
[0107] 二、檢測
[0108] 1、檢測方法
[0109] (1 )FIX收率的檢測方法:按《中國藥典》2015年版三部"人凝血因子IX效價測定法 (通則3519)"檢定。
[011 0] (2)人血白蛋白和免疫球蛋白的檢測方法:按貝克曼庫爾特IMMAGE800特定蛋白分 析系統(tǒng)及其配套試劑檢測白蛋白和免疫球蛋白含量。
[0111] 2、檢測結(jié)果
[0112] (l)FIX 回收率
[0113] 經(jīng)檢測，本發(fā)明工藝的FIX回收率為63萬(FIX IU/噸血漿）。
[0114] (2)人血白蛋白和免疫球蛋白的收率
[0115] 結(jié)果如下表：
[0117] 可以看出，采用本發(fā)明方法制備人凝血酶原復(fù)合物，白蛋白和免疫球蛋白的回收 率高達(dá)103%和103%。
[0118] 將本發(fā)明方法制備得到的產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量檢測，檢測結(jié)果如下：
[0119] 表1成品檢定結(jié)果
[0121] 實驗結(jié)果說明，本發(fā)明方法制備的人凝血酶原復(fù)合物凝血因子含量均衡，安全、有 效。
[0122] 本發(fā)明所建立的人凝血酶原復(fù)合物制備方法，反應(yīng)條件溫和，對S/D處理、凍干及 干熱處理過程中合理使用保護(hù)劑，有效的實現(xiàn)了凝血因子的分離純化，降低了凝血因子激 活的風(fēng)險;并且工藝穩(wěn)定性高，批件差異小，凝血因子含量均衡，能很好的發(fā)揮臨床使用效 果;再者采用S/D病毒滅活和80°C、72小時干熱處理的兩步病毒滅活方法，制品病毒安全性 得到極大提尚。本發(fā)明能穩(wěn)定且可靠的制備出安全、有效的制品。
[0123] 為了進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果，下面從技術(shù)提高帶來的商業(yè)價值來闡述：
[0124] 現(xiàn)有技術(shù)中，采用吸附法制備人凝血酶原復(fù)合物的方法，F(xiàn)IX回收率僅為45~49萬 IU/噸血漿，而本發(fā)明吸附法的回收率高達(dá)58~67萬IU/噸血漿，也就是說，采用本發(fā)明方法 制備人凝血酶原復(fù)合物，每噸血漿比現(xiàn)有方法可以多收9~22萬IU/噸血漿。
[0125] 按照每年投漿600噸來計算，采用本發(fā)明方法，可多回收5400~12000萬IU FIX，以 市場價格約0.8元/IU計算，可增加4320~15000萬元收入。
[0126] 綜上，本發(fā)明方法FIX回收率高，且對人血白蛋白和免疫球蛋白的非特異性吸附 少，不會導(dǎo)致寶貴的血漿資源浪費(fèi)，且未采用柱層析等高成本的方法，成本低廉，應(yīng)用前景 良好。
【主權(quán)項】
1. 一種人凝血酶原復(fù)合物的制備方法，其特征在于:它包括如下步驟： (1) 預(yù)純化 取去冷沉淀上清血漿，調(diào)節(jié)溫度和pH分別為10~15°C和7.0~7.4，按照每1L上清血漿 使用1.4~1.6g A50凝膠干粉的比例加入溶脹后的凝膠，吸附；收集凝膠，依次采用平衡緩 沖液、洗滌緩沖液和洗脫緩沖液處理凝膠，收集洗脫液，超濾透析； (2) S/D病毒滅活； (3) 精制純化 將制品溫度和pH分別調(diào)節(jié)至10~15 °C和7.0~7.4，按照每1L上清血漿使用1.2~1.5g A50凝膠干粉的比例加入溶脹后的凝膠，吸附;收集凝膠，依次采用平衡緩沖液、洗滌緩沖液 和洗脫緩沖液處理凝膠，收集洗脫液，超濾透析； (4) 配制，除菌，分裝，凍干，干熱處理，即可。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟（1)和步驟(3)中，平衡緩沖液、洗 滌緩沖液和洗脫緩沖液均是含有NaCl和枸櫞酸鈉的溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于： 平衡緩沖液中，NaCl、枸櫞酸鈉的濃度分別為0.08mo 1/L、0.0 lmo 1/L; 洗滌緩沖液中，NaCl、枸櫞酸鈉的濃度分別為0 · 17~0 · 23mol/L、0 .Olmol/L; 洗脫緩沖液中，NaCl、枸櫞酸鈉的濃度分別為2. Omo 1/L、0.015mo 1/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(1)中，吸附的時間為45~60min。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(1)中，透析采用的透析液是溫度 為15~25°C、pH為7.0~7.4的濃度為0.015mol/L的枸櫞酸鈉溶液。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述S/D病毒滅活的方法 是：取步驟（1)制得的制品，加入肝素鈉，再加入Tween-80和TNBP使Tween-80和TNBP的最終 濃度分別為1 % (w/v)和0.3 % (v/v)，待制品溫度達(dá)到24 °C開始計時，控制溫度24~26 °C，時 間6小時。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于:肝素鈉的加入量為1~3IU/ml制品。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(3)中，吸附的時間為30~60min。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（3)中，透析采用的透析液是含 0. lmol/L NaCl、0.015m〇VL枸櫞酸鈉、20g/L甘氨酸和5g/L鹽酸賴氨酸的溶液，其溫度為15 ~25°C、pH為6.9~7.1。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(4)中，配置時加入肝素鈉，肝素 鈉加入量是制品中FIX含量的0.1~0.3倍。11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(4)中，干熱處理的條件是80°C 干熱處理72小時。
【文檔編號】C12N9/64GK105821024SQ201610379619
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年5月30日
【發(fā)明人】余偉, 魯濤, 牟蕾, 李偉, 王黔川
【申請人】成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司