一種比率硫化氫化學劑量計及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于檢測技術領域，具體設及一種比率硫化氨化學劑量計及其制備方法W 及在生理條件下檢測硫化氨的應用。
【背景技術】
[0002] 硫化氨化2S)是一種無色、具有典型的臭雞蛋氣味的氣體，幾個世紀W來，一直被 認為是一種毒性的化學污染物。近些年來，大量的實驗研究表明，也S是繼MKCO之后被發(fā)現(xiàn) 的第=種生物體內(nèi)源性產(chǎn)生的氣體信號化合物，它在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外氧化還原電位及其他與 人類健康和疾病相關的信號過程方面發(fā)揮著重要作用。如調(diào)制血壓，調(diào)解神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)炎 癥反應，抑制氧化應激反應等。此外，細胞內(nèi)也S水平的改變還被認為與一些疾病有關聯(lián)，如 唐氏綜合癥，阿爾茨海默氏癥疾病，糖尿病和肝硬化。因此，發(fā)展生理條件下對也S檢測的有 效方法對學術研究與臨床應用是有重要意義的。
[0003] 目前已發(fā)展的比率硫化氨化學劑量計大多數(shù)都是W信號強度的增大或減小作為 響應信號。運種基于單一波長下光信號絕對強度變化的化學劑量計有著自身不可克服的缺 點，即在定量分析時易受到多種因素的影響，如絕對濃度和分布，待測試體系的抑值、溫度 和極性，檢測儀器的穩(wěn)定性等，而使分析結(jié)果的準確度下降。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種比率硫化氨化學劑量計及其制備方 法和應用，該化學劑量計結(jié)構(gòu)新穎，抗其他離子干擾能力強，檢測快速、準確。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案如下：
[0006] -種比率硫化氨化學劑量計艦化1-甲基-2-(4-硝基）苯乙締基化晚鹽艦化1-甲 基-2-(4-硝基)苯乙締基化晚鹽，其化學結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0007]
[000引所述比率硫化氨化學劑量計艦化1-甲基-2-(4-硝基）苯乙締基化晚鹽的制備方 法，包括W下步驟：
[0009] (1)將艦化1,2-二甲基化晚鹽和4-硝基苯甲醒按一定比例加入到正下醇溶液中；
[0010] (2)加贓嗦，在回流條件下反應，得艦化1-甲基-2-(4-硝基)苯乙締基化晚鹽。
[0011] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中艦化1，2-二甲基化晚鹽和4-硝基苯甲醒按摩爾比1:2-1: 2.5;
[0012] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中的4-硝基苯甲醒與正下醇溶液的質(zhì)量體積比為0.302:20-0.378:25；
[0013] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中的4-硝基苯甲醒與所述步驟（2)中的贓嗦的質(zhì)量比為 0.378:0.025-0.302:0.01；
[0014] 優(yōu)選的，所述步驟(2)中回流反應時間為30-50分鐘。
[0015] 本發(fā)明的比率硫化氨化學劑量計的合成方程式，如下所示：
[0016]
[0017] 進一步的，本發(fā)明公開了上述比率硫化氨化學劑量計在生理條件下檢測細胞內(nèi)硫 化氨中的應用。
[0018] -種檢測細胞內(nèi)硫化氨的方法，步驟為：
[0019] (1)將上述比率硫化氨化學劑量計溶解于二甲基甲酯胺(DMF)溶劑中，配成儲備液 儲存待用；
[0020] (2)將步驟(1)中的儲備液加入含有細胞組織的PBS緩沖液進行測試。
[002。 優(yōu)選的，步驟(2)中所述PBS緩沖液的抑為7.4。
[0022] 本發(fā)明的有益效果為：
[0023] (1)本發(fā)明的比率硫化氨化學劑量計與硫化氨發(fā)生親核加成反應，其339nm處吸光 度降低，244nm處出現(xiàn)新的吸收峰且吸光度增強，A244nm/A339nm與硫化氨濃度呈良好的線性關 系，具有良好的比率化學劑量計特性，實現(xiàn)在生理條件下對細胞內(nèi)硫化氨的快速、準確檢 測。
[0024] (2)本發(fā)明的比率硫化氨化學劑量計對硫化氨選擇性高，對其他生物活性小分子 的抗干擾能力強。
[0025] (3)本發(fā)明的比率硫化氨化學劑量計合成方法簡單，產(chǎn)率較高，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0026] 圖1是在含IOiiM比率硫化氨化學劑量計的PBS緩沖溶液(pH7.4)中進行的出S紫外 滴定實驗圖，圖中橫坐標為波長，縱坐標為吸光度；
[0027] 圖2是A244nm/A339r?與出S濃度的線性關系圖，圖中橫坐標為出S濃度，縱坐標為A244nm/ A339皿的比值；
[0028] 圖3是比率硫化氨化學劑量計相對于生物體內(nèi)常見活性小分子的選擇性實驗。
【具體實施方式】
[0029] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步說明。
[0030] 實施例1
[0031] 稱取0.235g艦化1，2-二甲基化晚鹽和0.3IOg 4-硝基苯甲醒于50ml圓底燒瓶中， 加入20ml正下醇，加0.0 lg贓嗦，混合溶液加熱至回流，反應40min。化C檢測反應完成后，冷 卻至室溫，有大量固體析出，減壓抽濾，正下醇重結(jié)晶，得0.230g橘紅色固體。產(chǎn)率為 62.5%。
[0032] 烙點測定:mp:239-242°C
[0033] 紅外光譜測定：TR 化 Br，cm-i )3346，2997，1635，1616，1567，1516，1457，1：M9
[0034] 核磁共振氨譜測定：Ih NMR(400M監(jiān)，DMSO): S (卵m): 9.02(d，J = 6. OHz，IH)，8.60 (m，2H)，8.36(d，J = 8.細z，2H)，8.16(d，J = 8.細z，2H)，8.08(d，J=16Hz，lH)，8.03(m，lH)， 7.86(d，J = 16Hz，lH)，4.45(s，3H)。
[0035] 實施例2
[0036] 稱取0.2350g艦化1，2-二甲基化晚鹽和0.3875g 4-硝基苯甲醒于50ml圓底燒瓶 中，加入25ml正下醇，加0.025g贓嗦，混合溶液加熱至回流，反應30min。化C檢測反應完成 后，冷卻至室溫，有大量固體析出，減壓抽濾，正下醇重結(jié)晶，得〇.242g橘紅色固體。產(chǎn)率為 65.8%。
[0037] 烙點測定:mp:239-242°C
[0038] 紅外光譜測定：TR 化 Br，cm_i )3346，2997，1635，1616，1567，1516，1457，1：349
[0039] 核磁共振氨譜測定：Ih NMR(400M監(jiān)，DMSO): S (卵m): 9.02(d，J = 6. OHz，1H)，8.60 (m，2H)，8.36(d，J = 8.細z，2H)，8.16(d，J = 8.細z，2H)，8.08(d，J=16Hz，lH)，8.03(m，lH)， 7.86(d，J = 16Hz，lH)，4.45(s，3H)。
[0040] 實施例3
[0041 ] 稱取0.2350g艦化1,2-二甲基化晚鹽和0.355g 4-硝基苯甲醒于50ml圓底燒瓶中， 加入22ml正下醇，加0.01?贓嗦，混合溶液加熱至回流，反應30min?；疌檢測反應完成后，冷 卻至室溫，有大量固體析出，減壓抽濾，正下醇重結(jié)晶，得〇.235g橘紅色固體。產(chǎn)率為 63.9%。
[0042] 烙點測定:mp:239-242°C
[0043] 紅外光譜測定：TR 化 Br，cm-i )3346，2997，1635，1616，1567，1516，1457，1：349
[0044] 核磁共振氨譜測定：Ih NMR(400M監(jiān)，DMSO): S (卵m): 9.02(d，J = 6. OHz，1H)，8.60 (m，2H)，8.36(d，J = 8.細z，2H)，8.16(d，J = 8.細z，2H)，8.08(d，J=16Hz，lH)，8.03(m，lH)， 7.86(d，J = 16Hz，lH)，4.45(s，3H)。
[0045] 效果實驗1
[0046] 取實施例1中得到的比率硫化氨化學劑量計溶解于DMF溶劑中配成儲備液，吸取一 定量儲備液添加到PBS緩沖溶液(pH7.4)中，使比率硫化氨化學劑量計在PBS緩沖溶液中的 濃度為1 OyM。加入不同體積的化2S(0.01M)水溶液，化2S體積分別為0，50化，100化，150化， 200化，300化，400化，450化，500化，550化，600化，700化，進行NasS紫外滴定測試，測試效果 如圖1所示，在NasS體積0~70化L(濃度為0~700iiM)的范圍內(nèi)紫外吸收強度變化非常明顯， 其33化m處吸光度逐漸降低，244皿處出現(xiàn)新的吸收峰且吸光度逐漸增強，且A244nm/A339nm與 出S濃度(0-700山〇呈良好的線性關系，如圖2所示。線性回歸方程為:A244nm/A339nm=0.0012c 化2S，iiM)+0.1784，R2 = 0.987。可說明本比率硫化氨化學劑量計具有良好的比率特征，可用 于對出S的檢測，且檢測準確、快速。
[0047] 效果實驗2
[0048] 取實施例1中得到的比率硫化氨化學劑量計溶解于DMF溶劑中配成儲備液，吸取一 定量儲備液添加到PBS緩沖溶液(pH7.4)中，使比率硫化氨化學劑量計在PBS緩沖溶液中的 濃度為1〇測。分別加入無機分子片、化 2+、1護、5〇42-、胸-、(：1-，^及氨基酸及多膚小分子6111、 Pro、Leu、切S、GSH，測定波長244nm和339nm吸光度的比值變化，測試結(jié)果如圖3所示，比率硫 化氨化學劑量計對出S選擇性高，而對其他生物活性分子有較強的抗干擾能力。
[0049]上述雖然結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】進行了描述，但并非對發(fā)明保護范圍 的限制，所屬領域技術人員應該明白，在本發(fā)明的技術方案的基礎上，本領域技術人員不需 要付出創(chuàng)造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種比率硫化氫化學劑量計碘化1-甲基-2-(4-硝基）苯乙烯基吡啶鹽碘化l-甲基-2-(4-硝基)苯乙烯基吡啶鹽，其化學結(jié)構(gòu)式如下所示：2. 權(quán)利要求1所述化學劑量計的制備方法，其特征是，包括以下步驟： (1) 將碘化1，2-二甲基吡啶鹽和4-硝基苯甲醛按一定比例加入到正丁醇溶液中； (2) 加哌嗪，在回流條件下反應，得所述化學劑量計。3. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，所述步驟（1)中碘化1，2_二甲基吡啶鹽和 4-硝基苯甲醛按摩爾比1:2-1:2.5。4. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，所述步驟（1)中的4-硝基苯甲醛與正丁醇 溶液的質(zhì)量體積比為〇. 302:20-0.378:25。5. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，所述步驟（1)中4-硝基苯甲醛與所述步驟 (2)中哌嗪的質(zhì)量比為 0 · 378:0 · 025-0 · 302:0 · 01。6. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，所述步驟（2)中回流反應時間為30-50分 鐘。7. 權(quán)利要求1所述比率硫化氫化學劑量計在生理條件下檢測細胞內(nèi)硫化氫中的應用。8. 權(quán)利要求1所述比率硫化氫化學劑量計檢測細胞內(nèi)硫化氫的方法，其特征是，步驟 為： (1) 將上述比率硫化氫化學劑量計溶解于二甲基甲酰胺緩沖溶液中，配成儲備液儲存 待用； (2) 將步驟(1)中的儲備液加入含有細胞組織的PBS緩沖液進行測試。9. 如權(quán)利要求8所述檢測細胞內(nèi)硫化氫的方法，其特征是，所述步驟(2)中PBS緩沖液的 pH為7.4。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種比率硫化氫化學劑量計及其制備方法和應用，比率硫化氫化學劑量計1-甲基-2-(4-硝基)苯乙烯基吡啶鹽碘化1-甲基-2-(4-硝基)苯乙烯基吡啶鹽，其結(jié)構(gòu)式如下：本發(fā)明比率硫化氫化學劑量計的制備方法為將碘化1,2-二甲基吡啶鹽和4-硝基苯甲醛按一定比例加入到正丁醇溶液中，再加入哌嗪，在回流條件下反應，得所述化學劑量計。本比率硫化氫化學劑量計具有良好的比率化學劑量計特性，能夠?qū)崿F(xiàn)在生理條件下對硫化氫的快速、準確檢測，同時對硫化氫選擇性高，對其他生物活性小分子的抗干擾能力強。本比率硫化氫化學劑量計合成方法簡單，產(chǎn)率較高，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】C07D213/26, G01N31/16, G01N21/33
【公開號】CN105669533
【申請?zhí)枴緾N201610099281
【發(fā)明人】丁靜, 葛海燕, 葛燕青
【申請人】泰山醫(yī)學院
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年2月23日