基于食材的冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)法及所用固體培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物材料培育方法領(lǐng)域，特別設(shè)及一種用于冬蟲夏草菌絲體的固體培 養(yǎng)基與培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲夏草(0地iocordyceps sinensis)是鱗翅目騙幅蛾科幅蛾屬幼蟲被中國被毛 抱化irsutella sinensis)寄生所形成的蟲菌復合體，在我國民間流傳應用已有兩千多年 的歷史，有關(guān)文獻記載可追溯到千年之前。據(jù)歷版《中華人民共和國藥典》記載，其主要功效 是補腎益肺，止血化疲;用于治療腎虛精虧，陽瘦遺精，腰膝酸痛，久咳虛喘，勞嗽咯血?，F(xiàn)代 醫(yī)學和藥理學研究證明，冬蟲夏草具有多種治療和滋補保健功能:對呼吸系統(tǒng)具有擴張支 氣管、止咳平喘、桂疲抗炎作用;對屯、血管系統(tǒng)具有抗屯、律失常、抗屯、肌缺血缺氧等作用;對 免疫功能呈雙向調(diào)節(jié)作用，還具有抗癌活性和鎮(zhèn)靜催眠作用和抗疲勞作用。冬蟲夏草又因 其性平力緩，能平補陰陽，許多人即使一年四季長期服用，也不會出現(xiàn)不良反應，因而也是 年老體衰者、術(shù)后體虛者和亞健康人群的滋補食療佳品。冬蟲夏草菌寄生性苛刻，其寄主幅 蛾屬昆蟲的生境獨特，主要分布在我國青藏高原海拔3500m~5000m的高寒草甸生態(tài)系統(tǒng)， 幅蛾完成一個生命周期通常需要3~4年，所W冬蟲夏草的天然資源十分稀少。在巨大的市 場需求和經(jīng)濟利益的驅(qū)使下，掠奪式的采挖已對冬蟲夏草資源的再生帶來嚴重威脅，也給 當?shù)卮嗳醯纳鷳B(tài)環(huán)境帶來沉重壓力。開發(fā)冬蟲夏草的人工替代品是解決野生資源匿乏與巨 大的藥用和保健需求矛盾，保護我國Ξ江源生態(tài)安全的有效途徑。冬蟲夏草的人工培育雖 已獲得成功但尚未實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，目前應用最普遍的冬蟲夏草人工替代品，來自利用冬 蟲夏草無性型即麥角科真菌中國被毛抱化irsutella sinensis)或伴生菌騙幅蛾擬青霉 (Paecilomyces h邱iali)等通過深層液體發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體。冬蟲夏草菌絲體的液體發(fā)酵 生產(chǎn)，已有多篇專利報道，如申請?zhí)?3135623.0,85107991，2011101568723， 200410025517.2,200410101728.X，200710142960.1等，它們的共同特點（1)需發(fā)酵罐，設(shè)備 投資大；（2)生產(chǎn)過程需不斷壓送無菌空氣，能耗大；（3)工藝復雜，需通過固液分離制取菌 絲體，由此產(chǎn)生大量有機廢液，須治理達標排放，既浪費資源又加大環(huán)保壓力。所W液體深 層發(fā)酵冬蟲夏草菌絲體產(chǎn)品，價格依然昂貴，未能作為普通民眾的日常滋補品食用。
[0003] 申請?zhí)枮?3135622.2的發(fā)明專利，公開了一種冬蟲夏草菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)法，該 專利用固體發(fā)酵罐來取代液體發(fā)酵罐，讓中國被毛抱在含有薦糖、酵母和蠶蛹粉等固體基 質(zhì)上生長，其終產(chǎn)品為固體培養(yǎng)物，生產(chǎn)中亦無廢液排放，但該法仍需用發(fā)酵罐，并需要向 罐內(nèi)壓送無菌空氣，其能耗大。申請?zhí)枮?00510014467.2的發(fā)明專利，公開了一種冬蟲夏草 菌體麥片的制備方法，該法W麥?；螓溒瑸槎x夏草菌的固體培養(yǎng)基，接種后2周左右菌絲 體包裹麥粒，終止培養(yǎng)。由于麥子的主要成分為淀粉，其營養(yǎng)組分的構(gòu)成與冬蟲夏草菌的宿 主騙幅蛾蟲體相差甚遠，難W充分滿足冬蟲夏草菌生長的營養(yǎng)需求。有多篇發(fā)明專利，如申 請?zhí)枮?200910197957.9,201110228542.0,2104164.4,200810147785. X，99117265.5， 201310398242.6,201210509164.8等所報道的冬蟲夏草菌的固體發(fā)酵法中的固體培養(yǎng)基在 主料谷物的基礎(chǔ)上，添加蠶蛹粉、麥教、蛋白腺、酵母浸膏、牛肉膏、憐酸二氨鐘，硫酸儀等的 一種或幾種為輔料，W補充谷物所缺乏的營養(yǎng)。然而，運些輔料并非正常食材，其中的蠶蛹 具有特殊氣味會影響產(chǎn)品的適口性，有的會導致化學品殘留。此外，由于冬蟲夏草菌為好氧 菌，其菌絲體在固體培養(yǎng)基的間隙附著谷物顆粒等的表面生長，一般固體培養(yǎng)時間相對較 長，如申請?zhí)枮?00910197957.9的發(fā)明專利公開的固體培養(yǎng)時間長達8~12周。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種基于食材的冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)法及 所用固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基完全W食材作為主料與輔料，并使得培養(yǎng)基具有較大的比表面 積和良好的疏松透氣性，可為冬蟲夏草菌絲體生長提供良好營養(yǎng)條件和物理空間。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)基，其由W下 重量含量的成分組成： 粒徑<2mm的主料30~50% (較佳為45~46%), 畜禽樂 0.1~15% (較佳為3.5~4.5%)，
[0006] 蔬菜類 0.1~15% (敎佳為4~6.5%) 糖類 0 1~15〇/〇 (較佳為1.6~2.8%)，
[0007] 余量為水；
[0008] 所述主料為非懦性谷物或豆類，所述畜禽類和蔬菜類組成了輔料，所述糖類為單 糖或雙糖。
[0009] 作為本發(fā)明的冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)基的改進：
[0010] 所述非懦性谷物為小米、玉米、釉米、梗米、慧米、小麥；
[0011] 所述豆類為大豆、蕓豆、魏豆、紅豆、黑豆、綠豆、蠶豆.
[0012] 所述畜禽類為畜肉、禽肉或魚肉，所述蔬菜類為馨類、塊莖、塊根、葉菜、瓜果或茹 (即，均為其可食用部分）；
[0013] 所述單糖為葡萄糖、果糖；
[0014] 所述雙糖為薦糖、麥芽糖。
[0015] 備注說明：當非懦性谷物為小米時，可直接作為主料;當非懦性谷物為玉米、釉米、 梗米、慧米、小麥時，需事先粉碎至粒徑含2mm;同理，上述所有的豆類需事先粉碎至粒徑< 2mm 〇
[0016] 上述蔬菜類均為其可食用部分，因此，馨類、瓜果等均需要進行去皮處理。
[0017] 本發(fā)明還同時提供了上述冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步 驟：
[001引①、將主料清洗干凈；
[0019] ②、將輔料清洗后粉碎、勻漿，得漿料；
[0020] ③、將洗凈后主料、漿料、糖類和水混合，經(jīng)蒸或煮成熟飯；
[0021] ④、將熟飯經(jīng)高溫滅菌處理，冷卻至室溫后得冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)基(簡稱固 體培養(yǎng)基）；待接種。
[0022] 備注說明：
[0023] 蒸或煮成熟飯是指用電飯優(yōu)、高壓鍋等煮熟或蒸飯機蒸熟。如何判斷米飯是否熟， 此為常規(guī)技術(shù)。
[0024] 高溫滅菌處理是指于121°C下滅菌20min，此也為常規(guī)技術(shù)。
[0025] 本發(fā)明還同時提供了利用上述固體培養(yǎng)基進行的基于食材的冬蟲夏草菌絲體固 體培養(yǎng)法，選用冬蟲夏草菌無性型中國被毛抱(Cordyceps SinensiS)，包括如下步驟： [00%] 1)、冬蟲夏草菌無性型中國被毛抱(Cordyceps sinensis)制備成二級菌種；
[0027] 所述二級菌種中，中國被毛抱(Cordyc邱S sinensis)的含量為> 108cfu/ml;
[00%] 2)、先對培養(yǎng)箱進行滅菌消毒處理；
[0029] 然后按3~20% (V/W)接種量(例如為5%)將二級菌種接種到固體培養(yǎng)基，然后置 于滅菌后培養(yǎng)箱中于18~25°C培養(yǎng)6~8天(此時菌絲充滿培養(yǎng)基間隙與表面），得菌絲體鮮 餅；
[0030] 上述3~20% (V/W)接種量，即是指每lOOg的固體培養(yǎng)基上接種3~20ml的二級菌 種。
[0031] 作為本發(fā)明的冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)法的改進，該培養(yǎng)法還包括W下步驟：
[0032] 3)、菌絲體鮮餅干燥：
[0033] 將菌絲體鮮餅先于85~90°C(例如為85°C)烘30min，再于55°C烘干至含水率低于 8%;
[0034] 備注說明：上述85°C烘30min目的是殺滅烘箱內(nèi)的微生物;55°C烘干至含水率低于 8%是防止高溫下其中的功能物質(zhì)如蟲草素的揮發(fā)損失，在烘干過程中可聞到其香味；
[0035] 4)、粉碎：
[0036] 將步驟3)所得的烘干菌絲餅粉碎過80目，得冬蟲夏草菌絲體干粉。真空包裝。
[0037] 作為本發(fā)明的冬蟲夏草菌絲體固體培養(yǎng)法的進一步改進：
[0038] 所述步驟1)為：
[0039] 將中國被毛抱(Cordyc邱S sinensis)斜面菌種接種到PDA平板，得活化菌種;具體 為:無菌操作條件下，挑取冬蟲夏草菌斜面菌苔，接種于PDA平板，于15~25°C下培養(yǎng)5d，得 冬蟲夏草菌活化菌苔；
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