两个人的电影免费视频_国产精品久久久久久久久成人_97视频在线观看播放_久久这里只有精品777_亚洲熟女少妇二三区_4438x8成人网亚洲av_内谢国产内射夫妻免费视频_人妻精品久久久久中国字幕

人類胰脂肪酶活性的測定方法

文檔序號:8947082閱讀:1462來源:國知局
人類胰脂肪酶活性的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域中的試樣中的人類膜脂肪酶活性的測定方法和試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 人類膜脂肪酶作為急性膜腺炎等膜臟疾病的診斷標(biāo)志物是重要的,對血清中的酶 活性進(jìn)行測定的試劑W臨床檢驗(yàn)藥的形式市售。該酶活性測定時的最佳氨離子指數(shù)(pH) 根據(jù)所使用的底物或反應(yīng)條件的不同而不同,但據(jù)報告大致為7. 5至10的范圍(例如參見 非專利文獻(xiàn)1)。作為人類膜脂肪酶的酶學(xué)特征,可W舉出:在包含底物的乳液或膠束的界 面產(chǎn)生反應(yīng);酶的活化需要膽汁酸和被稱為輔脂酶的分子量為約IlkDa的蛋白質(zhì)。在不存 在膽汁酸和輔脂酶時,膜脂肪酶的活性中屯、被稱作蓋子(Iid)的結(jié)構(gòu)域覆蓋,無法與底物 接觸。膽汁酸對于乳液或膠束的形成有影響,進(jìn)而,由于輔脂酶的存在,人類膜脂肪酶的立 體結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,從而使底物能夠結(jié)合在人類膜脂肪酶的活性中屯、,進(jìn)而使人類膜脂肪酶 顯示出活性。如此,已知人類膜脂肪酶在包含疏水性的底物、膽汁酸鹽、W及輔脂酶的復(fù)合 體的界面處發(fā)揮作用。
[0003] W往,在試樣中的人類膜脂肪酶的活性測定中,作為其底物,使用甘油=脂。甘油 =脂W所謂乳液的形態(tài)進(jìn)行使用,該乳液是通過與阿拉伯膠或聚乙締醇等進(jìn)行強(qiáng)制攬拌而 在緩沖液中乳化分散來形成的。在使用甘油=脂底物測定脂肪酶活性時,例如利用堿滴定 法對于通過脂肪酶反應(yīng)生成的脂肪酸進(jìn)行定量。此外還嘗試通過酶法對于經(jīng)脂肪酶反應(yīng)從 甘油=脂底物中游離出的脂肪酸進(jìn)行測定,但由于甘油=脂底物具有乳液所致的強(qiáng)濁度, 因而難W使用酶共輛體系進(jìn)行脂肪酶活性的分光學(xué)測定。此外還具有乳液底物由于保存而 容易產(chǎn)生相分離的缺點(diǎn),難W再現(xiàn)性良好地對脂肪酶活性進(jìn)行測定。為了解決運(yùn)種使用甘 油=脂底物的方法中的課題,開發(fā)出了在底物中使用甘油二醋的方法(例如參見專利文獻(xiàn) 1、2)、使用合成底物的方法(例如參見非專利文獻(xiàn)2),運(yùn)些方法目前在日常檢査法中使用。
[0004] 作為在底物中使用甘油二醋的優(yōu)點(diǎn),可W舉出:由于其親水性高于甘油S脂,因而 通過與表面活性劑組合,使得底物變得澄清,具有能夠適應(yīng)于通用的自動分析裝置的便利 性。
[0005] 作為甘油二醋底物,主要使用1,2-甘油二醋。已知1,2-甘油二醋通過分子內(nèi)醋鍵 的轉(zhuǎn)移反應(yīng)而轉(zhuǎn)變成1,3-甘油二醋,在使用時要盡量不出現(xiàn)該變化。還有人提出將1,2-甘 油二醋的一部分轉(zhuǎn)換為1,3-甘油二醋,將該混合物W液態(tài)進(jìn)行穩(wěn)定化,將其作為人類膜脂 肪酶測定的底物使用(例如參見專利文獻(xiàn)3)。此處,有報告指出,使用甘油二醋底物的測定 方法會受到脂蛋白脂肪酶W及肝脂肪酶等非膜脂肪酶的影響。此外有報告指出,在使用甘 油二醋底物的測定方法中,由于受到血液中的脂蛋白脂肪酶等非膜脂肪酶或醋酶的影響, 因而具有針對膜脂肪酶的特異性容易降低等弊病(例如參見專利文獻(xiàn)4)。人類的脂蛋白脂 肪酶、肝脂肪酶等非膜脂肪酶在肝素的作用下釋放到血中。因此,在施與肝素的待測物中, 無法準(zhǔn)確測定血中的膜脂肪酶活性。另一方面,在使用了合成底物的人類膜脂肪酶活性測 定用日常檢査試劑中,據(jù)信不會受到脂蛋白酶、肝脂肪酶等非膜脂肪酶的影響(例如參見 非專利文獻(xiàn)2),但在作為脂肪酶的最佳pH的弱堿性區(qū)域合成底物難W具有穩(wěn)定性。
[0006] 作為避免非膜脂肪酶的影響的方法,有報告指出,在底物中使用作為甘油二醋的 1,2-二亞油酷甘油的脂肪酶活性測定用市售試劑盒中,通過將作為膽汁酸鹽使用的脫氧膽 酸鋼置換為甘氨膽酸鋼而降低了非膜脂肪酶的影響(例如參見非專利文獻(xiàn)3),但其詳細(xì)內(nèi) 容不明確。此外,不僅在底物中使用甘油二醋的脂肪酶活性的測定方法中會受到非膜脂肪 酶的影響,而且在底物中使用甘油=脂的脂肪酶活性的測定方法中也會受到非膜脂肪酶的 影響,在運(yùn)種情況下,也有人報告可通過將脫氧膽酸變換為甘氨膽酸來避免非膜脂肪酶的 影響(例如參見非專利文獻(xiàn)4)。但是,如上所述,甘油=脂底物具有無法進(jìn)行分光學(xué)測定和 由于保存而容易產(chǎn)生相分離的缺點(diǎn),因而難W再現(xiàn)性良好地測定脂肪酶活性。
[0007] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) [000引專利文獻(xiàn)
[0009] 專利文獻(xiàn)1 :日本特開昭59-91898號公報(日本專利第1607890號公報)
[0010] 專利文獻(xiàn)2 :日本特開昭63-245672號公報
[0011] 專利文獻(xiàn)3 :日本專利第4836196號公報
[0012] 專利文獻(xiàn)4 :日本特開2008-307048號公報
[0013] 非專利文獻(xiàn)
[0014] 非專利文獻(xiàn) 1:ClinicalQiemistry, 39 :p746_756, 1993
[0015] 非專利文獻(xiàn)2 :醫(yī)學(xué)薬學(xué)(醫(yī)學(xué)與藥學(xué)),41卷3號,P489-496,1999
[0016] 非專利文獻(xiàn) 3:ClinicalChemistry, 38 :288-292, 1992
[0017] 非專利文獻(xiàn) 4:ClinicalChemistry, 35 :pl688-1693, 1989
[0018] 非專利文獻(xiàn) 5 :Ag;ri州huralBiologyandQiemistry, 44 (2), 399-406, 1980

【發(fā)明內(nèi)容】

[0019] 發(fā)明所要解決的課題
[0020] 對于在底物中使用甘油二醋來測定試樣中的人類膜脂肪酶活性的測定方法來說, 盡管與使用甘油=脂的測定方法相比在再現(xiàn)性方面優(yōu)異,然而相對來說其容易受到脂蛋白 脂肪酶或肝脂肪酶的影響。從而,需要有在底物中使用甘油二醋、但避免了運(yùn)些的影響且針 對膜脂肪酶的特異性更高的人類膜脂肪酶活性的測定方法。
[0021] 解決課題的手段
[0022] 如上所述,人類膜脂肪酶活性在測定時的最佳抑通常根據(jù)所用的底物或反應(yīng)條 件的不同而不同,但據(jù)報告大致為7. 5至10的范圍。本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn), 在底物中使用甘油二醋對試樣中的人類膜脂肪酶的活性進(jìn)行測定時,通過將人類膜脂肪酶 的活性呈最大值的pH向酸性側(cè)移動,在比W往報告更低的抑條件下使膽汁酸和輔脂酶共 存,進(jìn)行人類膜脂肪酶反應(yīng),從而能夠令人意外地降低由于施與肝素等而混合存在于試樣 中的脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶等非膜脂肪酶的影響。
[0023] 目P,本發(fā)明設(shè)及一種可降低非膜脂肪酶的影響的人類膜脂肪酶活性的測定方法, 其特征在于,通過將特定的結(jié)合型膽汁酸單獨(dú)使用、或與其他膽汁酸組合使用,從而能將人 類膜脂肪酶的活性呈最大值的抑設(shè)定為小于7. 7,進(jìn)而能在pH7. 4W下對試樣中的人類膜 脂肪酶活性進(jìn)行測定。
[0024] 需要說明的是,"結(jié)合型膽汁酸"是指在膽汁酸上結(jié)合有例如甘氨酸或者牛橫酸等 氨基酸的物質(zhì),"非結(jié)合型膽汁酸"是指結(jié)合型膽汁酸W外的膽汁酸。此外,"最佳抑"是指 膜脂肪酶活性最大時的測定抑。
[0025] 本發(fā)明的方式為試樣中的人類膜脂肪酶活性的測定方法,其包括下述工序:1)接 觸工序,使膽汁酸、甘油二醋化及輔脂酶與試樣在抑7.4W下進(jìn)行接觸,所述膽汁酸使得 人類膜脂肪酶的活性呈最大值的抑小于7. 7 ;W及2)檢測工序,對于根據(jù)試樣中的人類膜 脂肪酶活性而變化的信號量進(jìn)行檢測;使得人類膜脂肪酶的活性呈最大值的抑小于7. 7的 膽汁酸為含有下述a)和/或b)的膽汁酸:a)選自由甘氨脫氧膽酸(GDCA)、甘氨碟脫氧膽 酸(GCDCA)、牛橫脫氧膽酸仰CA)、牛橫碟脫氧膽酸(TCDCA)和它們的鹽組成的組中的1種 或2種W上的a型膽汁酸;b)選自由甘氨膽酸(GCA)、甘氨熊脫氧膽酸(GUDCA)、牛橫膽酸 (TCA)、牛橫熊脫氧膽酸(TUDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的b-1型膽汁酸 與選自由脫氧膽酸值CA)、碟脫氧膽酸(CDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的 b-2型膽汁酸的組合。
[0026] 例如,在對人類膜脂肪酶的活性相對于抑進(jìn)行作圖的情況下,在向上方繪制凸 曲線的情況下,活性的最大值意味著活性的峰值。此外,在通常的條件下,相對于"最佳 pH"(其指的是人類膜脂肪酶活性為最大時的測定pH),有時也將存在上述膽汁酸時人類膜 脂肪酶活性為最大時的測定抑稱為"表觀最佳抑"。
[0027] 例如,在接觸工序中,在使用a型膽汁酸的情況下,a型膽汁酸的添加比例相對于 全部的膽汁酸和/或其鹽的總量為40%W上。
[0028] 非離子表面活性劑可W與甘油二醋一起存在。非離子表面活性劑例如為選自由聚 氧乙締烷基酸、聚氧乙締烷基苯基酸W及聚氧乙締仲醇酸組成的組中的至少1種。
[0029] 例如,在檢測工序中使用比色法。此外,例如在接觸工序中,全部膽汁酸的濃度W 摩爾比計相對于甘油二醋為10倍W上。進(jìn)而,例如在接觸工序中抑為7. 2W下。
[0030] 本發(fā)明的構(gòu)成的一例如下。
[0031] (1)
[0032] -種試樣中的人類膜脂肪酶活性的測定方法,該測定方法包括下述工序:
[0033] 1)接觸工序,使膽汁酸、甘油二醋W及輔脂酶與上述試樣在抑7.4W下進(jìn)行接 觸,所述膽汁酸使得上述人類膜脂肪酶的活性呈最大值的抑小于7. 7 ;W及
[0034] 2)檢測工序,對于根據(jù)上述試樣中的上述人類膜脂肪酶活性而變化的信號量進(jìn)行 檢測;
[0035] 其中,上述膽汁酸為含有下述a)和/或b)的膽汁酸:
[0036] a)選自由甘氨脫氧膽酸(GDCA)、甘氨碟脫氧膽酸(GCDCA)、牛橫脫氧膽酸(TDCA)、 牛橫碟脫氧膽酸(TCDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的a型膽汁酸;
[0037] b)選自由甘氨膽酸(GCA)、甘氨熊脫氧膽酸(GUDCA)、牛橫膽酸(TCA)、牛橫熊脫氧 膽酸(TUDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的b-1型膽汁酸與選自由脫氧膽酸 值CA)、碟脫氧膽酸(CDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的b-2型膽汁酸的組 合。
[0038] 似
[0039] 如(1)所述的測定方法,其中,上述試樣為可能混合存在有人類非膜脂肪酶的試 樣、或者為可W包含人類非膜脂肪酶的試樣。
[0040] (3)
[0041] 如(1)或(2)所述的測定方法,其中,在上述接觸工序中,使用上述a)的膽汁酸。
[0042] (4)
[004引如(1)至做的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,在使用上述a)的膽汁酸的情況下, 上述a型膽汁酸相對于全部膽汁酸和/或其鹽的總量的添加比例為40%W上。
[0044] (5)
[004引如(1)或似所述的測定方法,其中,在上述接觸工序中,使用上述b)的膽汁酸。
[0046] (6)
[0047] 如(1)至(4)的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,上述a型膽汁酸為選自甘氨脫氧膽 酸(GDCA)及其鹽中的1種或2種。
[004引(7)
[0049] 如(1)至(4)的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,上述a型膽汁酸為選自由甘氨脫氧 膽酸(GDCA)、牛橫脫氧膽酸(TDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上。
[0050] 做
[005。 如(1)至(4)的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,上述a型膽汁酸為選自牛橫脫氧膽 酸燈DCA)及其鹽中的1種或2種。
[0052] (9)
[0053] 如(1)至(8)的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,與上述甘油二醋一起存在有非離子 表面活性劑。
[0054] (10)
[005引如(9)所述的測定方法,其中,上述非離子表面活性劑為選自由聚氧乙締烷基酸、 聚氧乙締烷基苯基酸W及聚氧乙締仲醇酸組成的組中的至少1種。
[0056] (11)
[0057] 如(1)至(10)的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,在上述檢測工序中使用比色法。
[0058] (12)
[005引如(1)至(11)的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,在上述接觸工序中,全部膽汁酸的 濃度W摩爾比計相對于上述甘油二醋為10倍W上。
[0060] (13)
[006。 如(1)至的任一項(xiàng)所述的測定方法,其中,在上述接觸工序中,抑為7. 2W 下。
[0062] (14)
[0063] 一種試樣中的人類膜脂肪酶活性的測定用試劑盒,其至少包含膽汁酸、甘油二醋 W及輔脂酶,所述膽汁酸使得人類膜脂肪酶的活性呈最大值的抑小于7. 7;其中,
[0064] 該試劑盒是按照上述人類膜脂肪酶活性測定時的抑為7. 4W下的方式來制備 的;
[0065] 上述膽汁酸為含有下述a)和/或b)的膽汁酸:
[0066]a)選自由甘氨脫氧膽酸(GDCA)、甘氨碟脫氧膽酸(GCDCA)、牛橫脫氧膽酸(TDCA)、 牛橫碟脫氧膽酸(TCDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的a型膽汁酸;
[0067] b)選自由甘氨膽酸(GCA)、甘氨熊脫氧膽酸(GUDCA)、牛橫膽酸(TCA)、牛橫熊脫氧 膽酸(TUDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的b-1型膽汁酸與選自由脫氧膽酸 值CA)、碟脫氧膽酸(CDCA)和它們的鹽組成的組中的1種或2種W上的b-2型膽汁酸的組 厶 1=1O
[0068] (15)
[0069] 如(14)所述的試劑盒,其中,上述試樣為可能混合存在有人類非膜脂肪酶的試 樣、或者為可W包含人類非膜脂肪酶的試樣。
[0070] (16)
[007。 如(14)或(巧)所述的試劑盒,其中,該試劑盒進(jìn)一步包含色原體。
[0072] (17)
[007引如(14)至(16)所述的試劑盒,其中,該試劑盒被制備成活性測定時的抑為7. 2W下。
[0074] (18)
[007引如(14)至(17)的任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中,內(nèi)容物被分到2個W上的容器中進(jìn) 行保存。
[0076] (19)
[0077] -種試樣中的人類膜脂肪酶活性的測定方法,該測定方法包括下述工序:
[0078] 1)接觸工序,使膽汁酸、甘油二醋W及輔脂酶與上述試樣在抑7.4W下進(jìn)行接 觸;W及
[0079] 2)檢測工序,對于根據(jù)上述試樣中的上述人類膜脂肪酶活性而變化的信號量進(jìn)行 檢測;
[0080] 其中,上述甘油二醋的濃度為0. 35~2. 5mmol/l、上述膽汁酸的濃度W摩爾比計 為上述甘油二醋的濃度的10~20倍;
[0081] 上述膽汁酸為下述a)和/或b)的膽汁酸:
[0082]a)含有a型膽汁酸的膽汁酸,該a型膽汁酸選自由甘氨脫氧膽酸(GDCA)、甘氨碟 脫氧膽酸(GCDCA)、牛橫脫氧膽酸(TDCA)、牛橫碟脫氧膽酸(TCDCA)和它們的鹽組成的組 中的1種或2種W上,上述a型膽汁酸相對于全部的膽汁酸和/或其鹽的總量的摩爾比為 40%W上;
[008引 b)含有b-1型膽汁酸與b-2型膽汁酸的組合的膽汁酸,該b-1型膽汁酸選自由甘 氨膽酸(GCA)、甘氨熊脫氧膽酸(GUDCA)、牛橫膽酸(TCA)、牛橫熊脫氧膽酸(T
當(dāng)前第1頁1 2 3 4 5 6 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點(diǎn)贊!
1
云浮市| 静乐县| 新兴县| 商洛市| 邯郸县| 曲阜市| 阿坝县| 黄浦区| 邯郸市| 英吉沙县| 汶川县| 法库县| 江华| 北宁市| 崇州市| 辽阳市| 兴业县| 大理市| 响水县| 稷山县| 陇南市| 建湖县| 文水县| 博兴县| 虞城县| 姚安县| 衡阳县| 石柱| 英吉沙县| 苍山县| 巩留县| 万荣县| 马山县| 西吉县| 山东省| 漳浦县| 辽阳县| 丰城市| 松滋市| 无为县| 龙江县|