L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素)酯三氟乙酸鹽的i型結(jié)晶及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的I型結(jié)晶及其制備方 法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 式⑴化合物為L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽，它是
[0003]
[0004]以冬凌草甲素為母核，經(jīng)過改造修飾后，所得到的冬凌草甲素酯衍生物；冬凌草甲 素（Oridonin)，是從冬凌草中提取出來的一種貝殼杉烯二萜類天然有機(jī)化合物，占冬凌草 有效成分的90%以上，是抗腫瘤的主要活性成分。
[0005]但是冬凌草甲素口服生物利用度不足5%，不能達(dá)到有效的血藥濃度；同時(shí)，冬凌 草甲素幾乎不溶于水，采用靜脈給藥較為困難。因此對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾改造，改善其水溶性 和活性，將其開發(fā)成為新的抗腫瘤藥物，是目前冬凌草甲素研究的重要方向。經(jīng)過資料調(diào)研 及實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素的14-位羥基與L-丙氨酸酯化后，產(chǎn)物不僅水溶性良好，而且 在大鼠和犬體內(nèi)的轉(zhuǎn)化率分別可達(dá)94. 1 %和128%。經(jīng)藥理毒理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該化合物不僅 具有與冬凌草甲素相似的活性，而且在體外血漿及體內(nèi)都能迅速轉(zhuǎn)化為冬凌草甲素，發(fā)揮 出冬凌草甲素的藥效活性；毒性研究結(jié)果顯示本品毒性較小，無遺傳毒性的擔(dān)憂；此外，本 品克服了因使用非水刺激性溶媒造成靜脈炎和特殊制劑引起過敏的副作用，家兔血管刺激 性試驗(yàn)顯示本品對血管無刺激性，豚鼠全身過敏試驗(yàn)也未見過敏現(xiàn)象，有效解決了冬凌草 甲素成藥的上述問題。
[0006]
[0007]考慮到冬凌草甲素衍生物的高活性及不穩(wěn)定性的問題，我們進(jìn)一步的研究了 L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的晶型以及制備方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道， 藥用的活性成分的晶型結(jié)構(gòu)往往影響到該藥物的化學(xué)穩(wěn)定性，結(jié)晶條件及儲(chǔ)存條件的不同 有可能導(dǎo)致化合物的晶型結(jié)構(gòu)的變化，有時(shí)還會(huì)伴隨著產(chǎn)生其他形態(tài)的晶型。一般來說， 無定型的藥物產(chǎn)品沒有規(guī)則的晶型結(jié)構(gòu)，往往具有其它缺陷，比如產(chǎn)物穩(wěn)定性較差，析晶較 細(xì)，過濾較難，易結(jié)塊，流動(dòng)性差等。因此，改善上述產(chǎn)物的各方面性質(zhì)是很有必要的，我們 需要深入研究找到晶型純度較高并且具備良好化學(xué)穩(wěn)定的新晶型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的穩(wěn)定晶 型以及制備該晶型的方法。
[0009] 我們考察了L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽在不同結(jié)晶條件下得到 的一系列結(jié)晶產(chǎn)物，對所得結(jié)晶產(chǎn)物進(jìn)行了X-衍射及DSC檢測，發(fā)現(xiàn)L-丙氨酸-(14-冬凌 草甲素）酯三氟乙酸鹽在常規(guī)的結(jié)晶條件下，可以得到一種穩(wěn)定性良好的晶型，我們稱其 為I型結(jié)晶。本申請中的I型結(jié)晶的DSC圖譜顯示在234°C附近有熔融吸熱峰，X-射線粉 末衍射圖譜如圖1所示，使用Cu-Ka輻射，以2 0角度和晶面間距（d值）表示的X-射線粉 末衍射圖譜，其中在 6. 85 (12. 89)，8. 09 (10. 92)，11. 30 (7. 82)，13. 71 (6. 45)，14. 08 (6. 29)， 14. 35(6. 17), 16. 40(5. 40) , 17. 41 (5. 09) , 18. 19(4. 87) , 18. 44(4. 81) ,20. 12(4. 41), 21. 17 (4. 19) , 23. 38 (3. 80) , 23. 88 (3. 72) , 24. 42 (3. 64) , 24. 84 (3. 58) , 25. 72 (3. 46), 26. 46 (3. 37)，27. 22 (3. 27)，28. 40 (3. 14)，29. 38 (3. 04)，31. 26 (2. 86)和 31. 79 (2. 81)有特 征峰。
[0010] 本發(fā)明制備I型結(jié)晶的方法中，可作為原料使用的存在形態(tài)沒有特別限定，可以 使用任意晶型或無定型固體，本發(fā)明的L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽I型結(jié) 晶的制備方法為：
[0011] 在用某些低級有機(jī)溶劑，優(yōu)選含碳原子數(shù)小、同時(shí)能夠揮發(fā)并可用作結(jié)晶溶劑的 醇類、酮類、酯類、鹵代烴等極性有機(jī)溶劑，或它們的混合溶液；更優(yōu)選為丙酮、乙酸乙酯、甲 醇、乙醇、異丙醇、異丙醚或它們的混合物作為L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯與三氟乙酸 鹽的重結(jié)晶溶劑。析晶時(shí)可以用單一溶劑，也可以用選自以上有機(jī)溶劑的混合溶劑。
[0012] 具體的，本發(fā)明提供的制備L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽I型結(jié)晶 的方法包括以下步驟：
[0013] (1)將N-Boc-L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯與三氟乙酸，或者將L-丙氨 酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽固體溶解于適量的有機(jī)溶劑中，攪拌析晶；或者加入反 溶劑，攪拌析晶；
[0014] ⑵過濾、洗滌、干燥；
[0015] 其中，所述的有機(jī)溶劑選自碳原子數(shù)小于等于3的醇類、鹵代烴、酮類、酯類中的 一種或幾種，或者為選自碳原子數(shù)小于等于3的醇類、鹵代烴、酮類、酯類中的任意一種或 幾種與碳原子數(shù)小于等于3的醚類的混合溶劑。
[0016] 在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的有機(jī)溶劑選自碳原子數(shù)小于等于3的酮類、 醇類、酯類的一種或幾種，或者為選自酮類、醇類、酯類中的任意一種或幾種與醚類的混合 溶劑。
[0017] 進(jìn)一步地，最優(yōu)選的單一溶劑為乙酸乙酯。
[0018] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選的混合有機(jī)溶劑為丙酮/異丙醚，二者比例沒 有特別限制，在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，二者體積比為1 :2。
[0019] 重結(jié)晶的方法沒有特別限定，可以用通常的重結(jié)晶操作方法進(jìn)行。例如，可以將原 料L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽在有機(jī)溶劑中攪拌溶解后，常溫?cái)嚢栉鼍В?結(jié)晶完成后，經(jīng)過濾干燥，即可得到所需要的結(jié)晶。所濾取的結(jié)晶體通常在減壓下，常溫條 件下進(jìn)行真空干燥，就能達(dá)到去除重結(jié)晶溶劑的效果。
[0020] 通過差示掃描熱分析（DSC)、X-衍射圖譜測定，對得到的L-丙氨酸-(14-冬凌草 甲素）酯三氟乙酸鹽結(jié)晶體進(jìn)行了晶型研究，同時(shí)對所得結(jié)晶的溶劑殘留進(jìn)行了檢測。
[0021] 按照本發(fā)明的方法制備的L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽結(jié)晶不含 有或僅含有較低含量的殘留溶劑，符合國家藥典規(guī)定的有關(guān)醫(yī)藥產(chǎn)品殘留溶劑的限量要 求，因而本發(fā)明的結(jié)晶可以較好地作為醫(yī)藥活性成分使用。
[0022] 經(jīng)研究表明，本發(fā)明制備L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽I型結(jié)晶在 研磨、壓力和受熱等條件下，晶型穩(wěn)定性良好，能夠滿足生產(chǎn)運(yùn)輸儲(chǔ)存的藥用要求，生產(chǎn)工 藝穩(wěn)定可重復(fù)可控，能夠適應(yīng)于工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0023] 圖1為L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的I型結(jié)晶的X-射線粉末衍 射圖譜。
[0024] 圖2為L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的I型結(jié)晶的DSC圖譜。
[0025] 圖3為L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的無定型固體的X-射線粉末 衍射圖譜。
[0026] 圖4為L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的無定型固體的DSC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 以下將結(jié)合實(shí)施例更詳細(xì)地解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技 術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0028] 實(shí)驗(yàn)所用的測試儀器
[0029] 1、DSC譜
[0030]儀器型號(hào)：MettlerToledoDSCIStareSystem
[0031] 吹掃氣：氮?dú)?br>[0032]升溫速率：10.0°C/min
[0033]溫度范圍：40-25(TC
[0034] 2、X-射線衍射譜
[0035] 儀器型號(hào)：BrukerD8FocusX-射線粉末衍射儀
[0036] 射線：單色Cu-Ka射線（又=丨.5406A)
[0037] 掃描方式：0 /2 0，掃描范圍：2-40°
[0038]電壓：40KV，電流：40mA。
[0039] 實(shí)施例1 :L_丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯三氟乙酸鹽的制備
[0040] 步驟1 :N-B〇C-L-丙氨酸-(14-冬凌草甲素）酯的制備
[0041] 150g(0. 41mol)冬凌草甲素（II)，195g(l. 04mol)Boc-L_Ala懸浮于 1. 35kg二氣甲 烷中，冰浴冷卻至0~5°C，加入213g(l. 04mol)DCC，攪拌0. 5h后撤去冰浴，室溫?cái)嚢?h， TLC確認(rèn)原料反應(yīng)完全（二氯甲烷：甲醇=10:1，原料Rf = 0.4,產(chǎn)物Rf = 0.6)。反應(yīng)液冷卻 至0°C靜置2h，過濾，濾餅用二氯甲烷洗（300gX3)，合并有機(jī)層，濃縮得白色固體?？焖俟?膠柱層析（二氯甲烷：甲醇=100:1~60 :1 ;v/v)，收集產(chǎn)物組分，減壓濃縮至干得白色固 體粉末約140~165g。將上述白色粉末加600g異丙醚，攪拌打漿洗滌2h，過濾，濾餅用異丙 醚洗滌（60g)，于25°C下鼓風(fēng)干燥4h，得白色粉末110~137g，收率50~62 %。（HPLC>98 % )^-NMR(400MHz，CDC13) : 6. 12 (m，2H)，5. 90 (s，1H)，5. 49 (s，1H)，5. 10-5. 08 (d，1H)，4. 30-4. 19 (m，3H)，4. 06-4. 04 (q，1H)，3. 74-3. 70 (m，1H)，3. 49-3. 44 (m，1H)，3. 12-3. 10 (d，1H)，2. 60 -2. 57 (m，1H)，2. 25-2. 20 (m，1H)，1. 95-1. 91 (dd，1H)，1. 78-1. 73 (m，1H)，1. 69-1. 53 (m，4H)， 1. 47-1. 38(m，10H), 1. 31-1. 29(d，3H)，1. 25-1. 23(m，2H)，1. 09-1. 08(m，6H). 13C-NMR(100MH z,CDC13) : 206. 2, 171. 7, 155. 0, 149. 9, 120. 1, 96. 1, 79. 9, 76. 2, 74. 5, 73. 4, 68. 3, 63. 4, 62. 0, 59. 5, 54. 7, 49. 6, 41. 3, 41. 3, 38. 7, 33. 7, 32. 6, 30. 5, 29. 9, 28. 2, 22. 8, 21. 7, 19