抗ilt7抗體的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】抗丨LT7抗體
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2006年12月20日、中國(guó)申請(qǐng)?zhí)枮?01310270779. 4、發(fā)明名稱(chēng) 為"抗ILT7抗體"的發(fā)明申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人ILT7的抗體。
【背景技術(shù)】
[0003] 干擾素a(IFNa:在下文中"干擾素"以縮寫(xiě)IFN代表）以及干擾素0 (IFNP)作 為1型IFN為人們所知，該類(lèi)型IFN具有抗病毒活性或者抗腫瘤活性。另一方面，已經(jīng)有研 究表明IFNa涉及自身免疫病。例如，已經(jīng)報(bào)道過(guò)在以下的自身免疫病的病人體內(nèi)有IFNa 的異常產(chǎn)生。已經(jīng)有研究提示可以通過(guò)中和IFNa來(lái)減輕自身免疫病的癥狀。
[0004] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Shiozawaetal.，Arthr. &Rheum. 35,412,1992)
[0005] 慢性風(fēng)濕（Hopkinsetal.，Clin.Exp.Immunol. 73,88,1988)
[0006] 已經(jīng)有報(bào)道在給藥重組的IFNa2或IFN之后自身免疫病的癥狀出現(xiàn)或者惡化的 例子（Wadaetal.，Am.J.Gastroenterol. 90,136,1995;Perezetal.，Am.J.Hematol. 49， 365,1995；ffilsonLEetal,SeminArthritis.Rheum. 32,163-173,2002.).
[0007] 進(jìn)一步地，還有研究提示IFNa能夠誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞（dendriticcell)的分化。樹(shù) 突細(xì)胞也是一種抗原呈遞細(xì)胞。因此，認(rèn)為樹(shù)突細(xì)胞的分化誘導(dǎo)包括自身免疫病的重要的 機(jī)制。已經(jīng)有研究表明在IFNa誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞分化和系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)作之間有很深的 聯(lián)系（Blancoetal.，Science，16:294,1540-1543, 2001)。因此，已經(jīng)有研究指出IFNa與 抗腫瘤活性以及自身免疫病密切相關(guān)。而且，IFNa與銀肩病的發(fā)作有密切的關(guān)系（Nestle F0etal.，J.Exp.Med. 202,135-143, 2005)。
[0008] 將當(dāng)病毒感染時(shí)能夠產(chǎn)生大量1型IFN的細(xì)胞鑒定為干擾素生成細(xì)胞 (InterferonProducingcell，IPC)。很少有IPC在血液中出現(xiàn)。研究者認(rèn)為在外周血淋 巴細(xì)胞中僅有1%或者更少的IPC。然而，IPC具有很高的產(chǎn)生IFN的能力。IPC產(chǎn)生IFN 的能力能夠達(dá)到，例如，3000pg/毫升/104細(xì)胞。也就是說(shuō)，可以說(shuō)雖然只有很少的細(xì)胞，但 是在病毒感染時(shí)血液中產(chǎn)生的大部分的IFNa或IFNP是由IPC產(chǎn)生的。
[0009] 另一方面，IPC是未分化的淋巴樣樹(shù)突細(xì)胞，該細(xì)胞被認(rèn)為是樹(shù)突細(xì)胞的前體細(xì) 胞。IPC可能指的是類(lèi)衆(zhòng)樹(shù)突細(xì)胞（Plasmacytoiddendriticcell)。在病毒的刺激下IPC 會(huì)分化成樹(shù)突細(xì)胞并且誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IFNy或IL-10。IPC也可以在IL-3的刺激下分化 成樹(shù)突細(xì)胞。在IL-3的刺激下所分化的樹(shù)突細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生Th2細(xì)胞因子（IL-4， IL-5和IL-10)。因此，IPC具有在不同的刺激下分化成不同樹(shù)突細(xì)胞的性質(zhì)。
[0010] 相應(yīng)地，IPC具有兩種類(lèi)型：IFN產(chǎn)生細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞的前體細(xì)胞。在免疫系統(tǒng)中 兩種細(xì)胞都起重要的作用。換言之，IPC是在多個(gè)方面支持免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞。
[0011] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 1:Shiozawaetal.，Arthr. &Rheum. 35,412，1992
[0012] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 2:Hopkinsetal.，Clin.Exp.Immunol. 73,88,1988
[0013] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 3:Wadaetal.，Am.J.Gastroenterol. 90,136,1995
[0014] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 4:Parezetal.，Am.J.Hematol. 49,365,1"5
[0015] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 5:Biancoetal.，Science，16 :294,1540-1543, 2001
[0016] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 6:Juetal.，Gene. 2004Apr28 ;331 :159-64.
[0017] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 7:ColonnaMetal.，SeminarsinImmunology12 :121-127, 2000.
[0018] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 8:NakajimaH.etal.，J.Immunology162 :5_8. 1999
[0019] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 9:WilsonLEetal，SeminArthritis.Rheum. 32,163-173, 2002
[0020] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 10:NestleF0etal.，J.Exp.Med. 202,135-143, 2005
[0021] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 1 :TO03/12061(U.S.PatentPublishedApplicationNo. 2003-148316)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0022] [本發(fā)明所要解決的問(wèn)題]
[0023] 本發(fā)明的目的是提供能結(jié)合免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄物7(Immunoglobulin-Like transcript-7，ILT7)的抗體，并且檢測(cè)，鑒定或者分離IPC。本發(fā)明的另一個(gè)目的是調(diào)節(jié) IPC的活性。
[0024] 為了調(diào)節(jié)諸如IFN這樣的體液因子的活性，給藥能夠識(shí)別該因子的抗體是有效 的。例如，已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了通過(guò)針對(duì)白介素（IL)-l或者IL-4的抗體來(lái)治療自身免疫病的嘗試 (Guleretal.，ArthritisRheum.，44.S307, 2001)。進(jìn)一步地，設(shè)想中和抗體可以和干 擾素一樣作為種自身免疫病的治療制劑來(lái)起作用（Stewart，TA.CytokineGrowthFactor Rev. 14 ;139-154,2003)?？梢灶A(yù)言與上述相同的方法對(duì)于由IPC所產(chǎn)生的IFN同樣有效。 然而，這樣的方法是基于在產(chǎn)生體液因子之后抑制該因子的效力。如果可以直接地控制所 需體液因子的產(chǎn)生，就可以得到更明顯的療效。
[0025] 已經(jīng)報(bào)道過(guò)能夠識(shí)別人IPC的抗體。例如，抗BDCA-2單克隆抗體是人IPC-特異的 單克隆抗體（DzionekA.etal.J.Immunol. 165 :6037-6046, 2000)。研究者發(fā)現(xiàn)抗BDCA-2 單克隆抗體能夠有效地抑制人IPC產(chǎn)生IFN(J.Exp.Med. 194 :1823-1834,2001.)。而且， 還報(bào)道過(guò)能夠識(shí)別小鼠中干擾素生成細(xì)胞的單克隆抗體能夠抑制干擾素的產(chǎn)生（Blood 2004Junl;103/ll:4201-4206.Epub2003Dec)。已經(jīng)有報(bào)道稱(chēng)針對(duì)小鼠類(lèi)漿樹(shù)突細(xì)胞的 單克隆抗體會(huì)造成樹(shù)突細(xì)胞數(shù)目的減少（J.Immunol. 2003,171 :6466-6477)。
[0026] 相似地，如果能夠提供識(shí)別人IPC、并且調(diào)節(jié)其活性的抗體，那么會(huì)非常有用。例 如，本發(fā)明的發(fā)明者已經(jīng)顯示了能夠識(shí)別Ly49Q的抗體會(huì)特異地結(jié)合小鼠的IPC。然而， 針對(duì)Ly49Q的抗體不會(huì)干擾小鼠IPC的活性（Blood，lApril2005,Vol. 105,No. 7,和 pp. 2787-2792. ;W02004/13325)。另一方面，已知ILT7是一種特異表達(dá)在類(lèi)漿樹(shù)突細(xì)胞中 的分子（JuXSetal.andGene. 2004Apr28 ;331 :159-64. ;TO03/12061)。然而，還沒(méi)有獲 得過(guò)任何針對(duì)ILT7的抗體。因此，抗體對(duì)于IPC的作用仍然未知。
[0027] ILT7是一種含有免疫球蛋白樣基序的膜蛋白。已經(jīng)有報(bào)道稱(chēng)該分子是在骨髓系統(tǒng) 或者淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞中表達(dá)的分子之一（ColonnaMetal.，SeminarsinImmunology12 : 121-127, 2000.)。一類(lèi)具有類(lèi)似于ILT7結(jié)構(gòu)的分子被指定為ILT家族。ILT家族也與殺傷 細(xì)胞抑制受體（killercellinhibitoryreceptor，KIR)的結(jié)構(gòu)、功能相近。ILT7 與ILT 家族其它分子一樣具有4個(gè)C-型免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。研究者認(rèn)為ILT7像ILTUILT1樣 蛋白、ILT8和LIR6a等一樣將活化的信號(hào)送入到細(xì)胞內(nèi)。已經(jīng)確認(rèn)了，在血系統(tǒng)細(xì)胞中有 屬于ILT家族的分子的表達(dá)（Youngetal.，Immunogenetics53:270_278,2001;"TheKIR GeneCluster. "Carrington，MaryandNorman,Paul.Bethesda(MD)：NationalLibrary ofMedicine(US),NCBI；2003)〇
[0028] 于是，通過(guò)減除雜交法檢測(cè)到了ILT7在類(lèi)衆(zhòng)樹(shù)突細(xì)胞（Plasmacytoiddendritic cell，roC)中的高表達(dá)以及在單核細(xì)胞衍生的樹(shù)突細(xì)胞（monocyte-deriveddendritic cell，MDDC)中的低表達(dá)。ILT2和ILT3不僅在H)C中有表達(dá)，而且在從MDDC或CD34陽(yáng)性 細(xì)胞中獲得的DC中也有表達(dá)。然而，由于ILT7的mRNA在H)C中特異地表達(dá)，所以發(fā)現(xiàn)了 可以使用該mRNA作為T(mén)OC的標(biāo)記。另外，當(dāng)時(shí)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了，通過(guò)CpG的刺激可以降低ILT7 的表達(dá)（JuXSetal.Gene. 2004Apr28 ;331 :159-64. ;W003/12061)〇
[0029] 本發(fā)明的發(fā)明者通過(guò)研究人IPC確認(rèn)了：在IPC中ILT7的表達(dá)特異性地亢進(jìn)。于 是，本發(fā)明的發(fā)明者嘗試了制備ILT7抗體，并且闡述其作用。例如，諸如ILT2和ILT3這樣 的構(gòu)成ILT家族的分子，特別是在其胞外域的氨基酸序列上具有高保守性（圖9)。這些ILT 家族分子分別在不同的血細(xì)胞中展示特有的表達(dá)譜。因此，獲得能夠從免疫學(xué)上區(qū)分ILT7 與其他的ILT家族分子的抗體是非常重要的。然而，實(shí)際上，由于下述的障礙，制備以ILT7 為免疫原特異性結(jié)合人IPC的抗體是困難的。
[0030] 通常，將通過(guò)基因重組技術(shù)制備的蛋白用作免疫原，以便獲得能夠識(shí)別從活體組 織中得到的微量蛋白的抗體。本發(fā)明的發(fā)明者以人ILT7的cDNA序列、以及根據(jù)該堿基序 列翻譯而成的氨基酸序列的信息（GenBankAccessionNo.NM_012276)為基礎(chǔ)設(shè)法表達(dá)了 人ILT7。然而，在常規(guī)條件，不能作為重組體表達(dá)人ILT7。
[0031] 為了獲得蛋白的抗體，也經(jīng)常嘗試使用天然蛋白的部分氨基酸序列作為免疫原。 然而，由于在ILT家族中其氨基酸序列同源性極高，所以對(duì)于人ILT7幾乎沒(méi)有氨基酸序列 是特異的。而且，為了使抗體能夠識(shí)別細(xì)胞表面的分子，選擇位于細(xì)胞表面的區(qū)域是必要 的，其中該區(qū)域是由能夠作為抗原表位被抗體識(shí)別的部分組成的。因此，研究者已經(jīng)認(rèn)識(shí)到 利用氨基酸序列片段作為免疫原來(lái)制備特異針對(duì)ILT7的抗體是不現(xiàn)實(shí)的。
[0032] 本發(fā)明的發(fā)明者明確了在這種條件下可以通過(guò)利用特異的免疫原獲得能夠結(jié)合 IPC的抗體。更進(jìn)一步地，本發(fā)明的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)：以這種方法獲得的抗體能夠特異地識(shí)別人 IPC并且進(jìn)一步地具有調(diào)節(jié)其活性的作用，因此成功的完成了本發(fā)明。就是說(shuō)，本發(fā)明涉及 下述的抗ILT-7抗體、其制備方法及其應(yīng)用。
[0033][本發(fā)明的效果]
[0034] 本發(fā)明提供了可以用于制備能夠識(shí)別人ILT7的抗體的免疫原以及利用該免疫原 制備抗人ILT-7抗體的方法。ILT7是屬于ILT家族的一種膜蛋白。具體地，ILT家族的胞 外區(qū)的氨基酸序列是高度保守的。因此，想要通過(guò)常規(guī)的免疫方法來(lái)制備能夠區(qū)分ILT家 族成員的抗體是非常困難的。本發(fā)明的發(fā)明者顯示了可以很方便地利用動(dòng)物細(xì)胞來(lái)獲得能 夠識(shí)別人ILT7的抗體，其中該動(dòng)物細(xì)胞共表達(dá)了ILT7與細(xì)胞膜蛋白。通過(guò)本發(fā)明的方法 獲得的抗ILT-7抗體具有高特異性，該抗體能夠區(qū)分人IPC與其他表達(dá)ILT家族成員的細(xì) 胞。
[0035] 在優(yōu)選應(yīng)用實(shí)例中，本發(fā)明所提供的抗人ILT-7抗體能夠結(jié)合人IPC。另外，本發(fā) 明的抗體特異地識(shí)別人IPC。因此，該抗體可用于檢測(cè)和分離IPC。IPC是產(chǎn)生大部分1型 干擾素的細(xì)胞。因此，在診斷和研究諸如自身免疫病這樣的與IPC相關(guān)的疾病時(shí)，檢測(cè)和分 離IPC是很重要的。具體地，按照本發(fā)明的發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)，IPC中ILT7的表達(dá)不因IFNa的 存在而降低。在患有自身免疫病的病人體內(nèi)，IFNa的表達(dá)經(jīng)常被促進(jìn)。這意味著可以使用 本發(fā)明的抗ILT-7的抗體來(lái)檢測(cè)和分離患有自身免疫病的病人的IPC，在該病人體內(nèi)IFNa 的表達(dá)受到了促進(jìn)。
[0036] 在優(yōu)選應(yīng)用實(shí)例中，本發(fā)明提供的抗ILT-7抗體具有調(diào)節(jié)人IPC的活性的作用。 因此，可以使用本發(fā)明的抗ILT-7抗體來(lái)抑制IPC的活性。如前所述，在IFNa存在的情況 下，IPC中ILT7的表達(dá)不會(huì)減少。因此，如果利用本發(fā)明的抗體對(duì)IPC的活性的抑制，那么 可以預(yù)期該抗體對(duì)于患有自身免疫病的病人具有治療效果，其中在該病人體內(nèi)IFNa的表 達(dá)被促進(jìn)了。
[0037] 少量的IPC就可以產(chǎn)生大量的IFN。需要與IFN分子一樣多的抗體來(lái)中和IFN。然 而，在本發(fā)明中直接抑制了生成細(xì)胞的活化。因此，可以預(yù)期與利用抗IFN抗體中和IFN相 比，即使使用少量的抗體也能獲得強(qiáng)效的IFN抑制作用。此外，在持續(xù)產(chǎn)生IFN的情況中， 可以預(yù)言通過(guò)IFN抗體來(lái)進(jìn)行中和是暫時(shí)的抑制。在本發(fā)明中，由于抑制了IPC的活性，可 以預(yù)期對(duì)IFN的產(chǎn)生的抑制作用可以在很長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)有效。
[0038] 本發(fā)明涉及下述各項(xiàng)。
[0039] 1.能夠結(jié)合人ILT7的胞外域的單克隆抗體，或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合 區(qū)的片段。
[0040] 2.根據(jù)項(xiàng)1的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中，所 述單克隆抗體能夠結(jié)合人干擾素生成細(xì)胞。
[0041] 3.保藏號(hào)為FERMBP-10704的雜交瘤ILT7#11或保藏號(hào)為FERMBP-10705的雜交 瘤ILT7#17產(chǎn)生的單克隆抗體，或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。
[0042] 4.根據(jù)項(xiàng)1的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中，所 述單克隆抗體在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)中含有如下i)至iii)任意一項(xiàng)的氨基酸序列作 為CDRUCDR2 和CDR3 :
[0043] i)重鏈可變區(qū)的CDR1 :SDYAWN(SEQIDN0 :58);
[0044] 重鏈可變區(qū)的CDR2 :YISYSGSTSYNPSLKSR(SEQIDNO:59);和
[0045] 重鏈可變區(qū)的CDR3 :SPPYYAMDY(SEQIDNO:60);
[0046] 輕鏈可變區(qū)的CDR1 :KASQDVGTAVA(SEQIDNO:61);
[0047] 輕鏈可變區(qū)的CDR2 :WASTRHT(SEQIDNO:62);和
[0048] 輕鏈可變區(qū)的：CDR3QQYSSYPLT(SEQIDNO:63);
[0049] ii)重鏈可變區(qū)的CDR1 :SYWIH(SEQIDNO:64);
[0050] 重鏈可變區(qū)的CDR2 :RIYPGTGSTYYNEKFKG(SEQIDNO:65);和
[0051] 重鏈可變區(qū)的CDR3 :YPTYDWYFDV(SEQIDNO:66);
[0052] 輕鏈可變區(qū)的CDR1 :RASQSISNYLH(SEQIDNO:67);
[0053] 輕鏈可變區(qū)的CDR2 :YASQSIS(SEQIDNO:68);
[0054] 輕鏈可變區(qū)的CDR3 :QQSNSWPLT(SEQIDNO:69);
[0055] iii)重鏈可變區(qū)的CDR1 :SDYAWN(SEQIDNO:70);
[0056] 重鏈可變區(qū)的CDR2 :YISYSGSTSYNPSLKSR(SEQIDNO:71);
[0057]重鏈可變區(qū)的CDR3 :ALPLPWFAY(SEQIDNO:72);
[0058]輕鏈可變區(qū)的CDR1 :KASQDVGTAVA(SEQIDNO:73);
[0059]輕鏈可變區(qū)的CDR2 :WASTRHT(SEQIDNO:74);和
[0060]輕鏈可變區(qū)的CDR3 :QQYSSYPYT(SEQIDNO:75).
[0061] 5.根據(jù)項(xiàng)1的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中，所 述單克隆抗體含有選自如下（a)至（c)的組合中的任意一項(xiàng)的氨基酸序列的成熟序列作為 重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)：
[0062]a)SEQID N0 :39的重鏈可變區(qū)和SEQID N0 :41的輕鏈可變區(qū)；
[0063]b)SEQID N0 :43的重鏈可變區(qū)和SEQID N0 :45的輕鏈可變區(qū)；以及
[0064]c)SEQID N0 :47的重鏈可變區(qū)和SEQID N0 :49的輕鏈可變區(qū)。
[0065] 6.編碼項(xiàng)4或5的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段的多核 苷酸。
[0066] 7.含有編碼項(xiàng)4或5的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段的 多核苷酸的載體。
[0067] 8.以可表達(dá)的方式攜帶項(xiàng)7的載體的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
[0068] 9.制備項(xiàng)4或5的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段的方 法，該方法包括如下步驟：培養(yǎng)項(xiàng)8的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，從培養(yǎng)物中回收單克隆抗體或者含有該單 克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。
[0069] 10.產(chǎn)生項(xiàng)1或2的單克隆抗體的雜交瘤。
[0070] 11.保藏號(hào)為FERMBP-10704的雜交瘤ILT7#11或者保藏號(hào)為FERMBP-10705的 雜交瘤ILT7#17。
[0071] 12.制備單克隆抗體的方法，該方法包括以下步驟：培養(yǎng)項(xiàng)11的雜交瘤，從培養(yǎng)物 中收集單克隆抗體。
[0072] 13.制備單克隆抗體產(chǎn)生細(xì)胞的方法，其中，所述單克隆抗體能夠結(jié)合人ILT7的 胞外域，該方法包括以下步驟：
[0073] (1)給免疫動(dòng)物施用細(xì)胞，所述細(xì)胞表達(dá)含有人ILT7胞外域的外源蛋白和與人 ILT7結(jié)合的外源分子；以及
[0074] (2)從所述免疫動(dòng)物的抗體生成細(xì)胞中選擇下述抗體生成細(xì)胞，所述抗體生成細(xì) 胞產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體。
[0075] 14.根據(jù)項(xiàng)13的方法，其中與人ILT7結(jié)合的分子是細(xì)胞膜蛋白。
[0076] 15.根據(jù)項(xiàng)14的方法，其中所述細(xì)胞膜蛋白是Fc受體y鏈。
[0077] 16.根據(jù)項(xiàng)15的方法，其中表達(dá)人ILT7和與人ILT7結(jié)合的分子的細(xì)胞是以可表 達(dá)的方式攜帶以下的（a)和（b)的細(xì)胞：
[0078] (a)編碼含有人ILT7胞外域的氨基酸序列的外源多核苷酸；以及
[0079] (b)編碼Fc受體y鏈的外源多核苷酸。
[0080] 17.根據(jù)項(xiàng)16的方法，其中所述細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞。
[0081] 18.根據(jù)項(xiàng)17的方法，其中所述細(xì)胞是人源細(xì)胞。
[0082] 19.根據(jù)項(xiàng)18的方法，其中所述人源細(xì)胞是293T細(xì)胞。
[0083] 20.根據(jù)項(xiàng)13的方法，該方法還包括克隆化按照項(xiàng)13的方法所獲得的抗體生成細(xì) 胞的步驟。
[0084] 21.制備能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體的方法，該方法包括如下步驟：培 養(yǎng)按照項(xiàng)8的方法獲得的抗體生成細(xì)胞，從培養(yǎng)物中收集單克隆抗體。
[0085] 22.能夠識(shí)別人ILT7的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段， 所述單克隆抗體或片段能夠通過(guò)以下的步驟獲得：
[0086] (1)給免疫動(dòng)物施用細(xì)胞，所述細(xì)胞外源性表達(dá)含有人ILT7胞外域的蛋白和與人 ILT7結(jié)合的分子；
[0087] (2)從所述免疫動(dòng)物的抗體生成細(xì)胞中選擇下述抗體生成細(xì)胞，所述抗體生成細(xì) 胞產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體；以及
[0088] (3)培養(yǎng)從步驟⑵中選擇出來(lái)的抗體生成細(xì)胞，從培養(yǎng)物中回收能夠識(shí)別人 ILT7的抗體。
[0089] 23.用于制備能夠結(jié)合人ILT7胞外域的抗體的免疫原，該免疫原包括下述動(dòng)物細(xì) 胞或者其細(xì)胞膜成分，所述細(xì)胞以可外源性表達(dá)的方式攜帶（a)編碼含有人ILT7胞外域的 氨基酸序列的多核苷酸和（b)編碼Fc受體y鏈的多核苷酸。
[0090] 24.根據(jù)項(xiàng)23的免疫原，其中，所述動(dòng)物細(xì)胞是人源細(xì)胞。
[0091] 25.檢測(cè)干擾素生成細(xì)胞的方法，該方法包括以下步驟：
[0092] 使能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的 片段與受試細(xì)胞接觸；以及
[0093] 檢測(cè)與細(xì)胞結(jié)合了的單克隆抗體或含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。
[0094] 26.用于檢測(cè)干擾素生成細(xì)胞的檢測(cè)試劑，該檢測(cè)試劑包含能夠結(jié)合人ILT7胞外 域的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。
[0095]27.抑制干擾素生成細(xì)胞的活性的方法，該方法包括使以下任意成分與干擾素生 成細(xì)胞接觸的步驟：
[0096] (a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細(xì)胞活性的單克隆抗體或者含有該單 克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段；以及
[0097] (b)免疫球蛋白或含有該免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)的片段，在所述免疫球蛋白中 導(dǎo)入了（a)的單克隆抗體的互補(bǔ)決定區(qū)。
[0098] 28.抑制活體中干擾素生成細(xì)胞的活性的方法，該方法包括給活體施用以下任意 成分的步驟：
[0099] (a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細(xì)胞活性的單克隆抗體或者含有該單 克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段；
[0100] (b)免疫球蛋白或含有該免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)的片段，在所述免疫球蛋白中 導(dǎo)入了（a)的單克隆抗體的互補(bǔ)決定區(qū)；以及
[0101] (C)編碼（a)或（b)所述成分的多核苷酸。
[0102] 29.根據(jù)項(xiàng)27或28的方法，其中，所述干擾素生成細(xì)胞的活性是干擾素生成活性， 或者干擾素生成細(xì)胞的存活，或者二者皆有。
[0103] 30.干擾素生成細(xì)胞活性抑制劑，其包含下述的任意成分作為活性成分：
[0104] (a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細(xì)胞活性的單克隆抗體或者含有該單 克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段；
[0105] (b)免疫球蛋白或含有該免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)的片段，在所述免疫球蛋白中 導(dǎo)入了（a)的單克隆抗體的互補(bǔ)決定區(qū)；以及
[0106] (c)編碼（a)或（b)所述成分的多核苷酸。
[0107] 31.根據(jù)項(xiàng)30的干擾素生成細(xì)胞活性抑制劑，其中，所述干擾素生成細(xì)胞的活性 是干擾素生成活性，或者干擾素生成細(xì)胞的存活，或者二者皆有。
【附圖說(shuō)明】
[0108] 圖la是通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)ILT7基因的mRNA的表達(dá)的照片。該圖是對(duì)人免疫 細(xì)胞中ILT7基因的mRNA的表達(dá)的分析結(jié)果。
[0109] 圖lb是利用定量PCR方法檢測(cè)和比較多種人組織和細(xì)胞中ILT7基因的mRNA的表 達(dá)的圖表。橫軸顯示的是所檢測(cè)的組織和細(xì)胞，縱軸顯示的是ILT7的表達(dá)水平，其中ILT7 的表達(dá)水平按照GAPDH的表達(dá)水平進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化。
[0110] 圖2是顯示ILT7蛋白結(jié)構(gòu)的圖表。其中圖2的（a)顯示的是ILT7蛋白的氨基酸 序列，并且進(jìn)一步在圖中顯示了推定的分泌信號(hào)序列以及跨膜區(qū)；圖2的（b)顯示了由構(gòu)建 的表達(dá)載體所編碼的ILT7蛋白的簡(jiǎn)圖。
[0111] 圖3是一張圖片，該圖片顯示了將ILT7表達(dá)載體和FcRy表達(dá)載體導(dǎo)入到細(xì)胞 內(nèi)、并且利用FCM檢測(cè)ILT7分子在細(xì)胞表面的表達(dá)的結(jié)果。橫軸表示利用抗FLAG抗體檢 測(cè)的熒光強(qiáng)度，即帶有FLAG標(biāo)簽ILT7分子在細(xì)胞表面的表達(dá)強(qiáng)度，同時(shí)縱軸表示細(xì)胞數(shù) 目。
[0112] 圖4是一張照片，該照片顯示的是利用免疫沉淀和Western印跡方法分析的、在導(dǎo) 入了ILT7表達(dá)載體和FcRy表達(dá)載體的細(xì)胞中的分子結(jié)合。左邊的圖表顯示了在利用抗 myc抗體對(duì)FcRy分子進(jìn)行了免疫沉淀之后，利用抗FLAG抗體對(duì)ILT7分子進(jìn)行印跡的結(jié)果 的圖片（上方的圖片）、以及利用抗myc抗體對(duì)FcRy分子進(jìn)行印跡的結(jié)果的圖片（下方 的圖片）。相似地，右邊的圖片顯示的是在