一種以曼地亞紅豆杉枝葉為原料制備高純度10-脫乙?；涂ㄍあ蟮姆椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種以曼地亞紅豆杉枝葉為原料制備高純度10-脫乙?；涂ㄍII 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 10-脫乙酰基巴卡亭III是從紅豆杉中分離出的一種天然化合物，用于人工半合成 紫杉醇、多西紫杉醇及卡巴他賽等抗癌藥物的前體產(chǎn)品。該化合物主要存在于歐洲等國(guó)外 紅豆杉品種中，其枝葉中10-脫乙酰基巴卡亭III的含量高達(dá)0. 1~0. 18%，而國(guó)內(nèi)原產(chǎn)紅豆 杉品種中10-脫乙酰基巴卡亭III的含量均低于國(guó)外紅豆杉中的含量，造成我國(guó)需大量依賴 進(jìn)口國(guó)外紅豆杉枝葉用于制備高純度的10-脫乙?；涂ㄍII的不利現(xiàn)狀。
[0003] 1996年我國(guó)引進(jìn)了曼地亞紅豆杉（Taxus media)，該紅豆杉為一種天然雜交品種， 其父本為歐洲紅豆杉（Taxus baccata)、母本為東北紅豆杉（Taxus cuspidata)。經(jīng)十余年 的試種測(cè)定、馴化、選擇和培育，現(xiàn)已經(jīng)篩選出了 10-脫乙?；涂ㄍII等有效成分與國(guó)外 紅豆杉含量相當(dāng)?shù)穆貋喖t豆杉品系，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)制備高純度10-脫乙?；涂ㄍII需要 進(jìn)口國(guó)外紅豆杉作為原材料的空白。
[0004] CN102827106A公開(kāi)了一種10-脫乙酰基巴卡亭III的提取純化方法，該方法以紅豆 杉枝葉為原料，使用有機(jī)溶劑提取，并經(jīng)二氯甲烷或乙酸乙脂萃取，活性炭脫色、減壓濃縮 得到粗品，該粗品經(jīng)兩次結(jié)晶與硅膠色譜層析，再經(jīng)重結(jié)晶獲得10-脫乙?；涂ㄍII純 品。該方法工藝步驟雖然能有效提取制備高純度的10-脫乙?；涂ㄍII，但活性炭脫色 會(huì)吸附一定的10-脫乙?；涂ㄍII，造成產(chǎn)品的丟失，硅膠層析時(shí)需要大量的有機(jī)溶劑 進(jìn)行洗滌與洗脫，在洗滌與洗脫過(guò)程中不僅會(huì)使部分產(chǎn)品流失或未徹底洗脫，同時(shí)會(huì)造成 有機(jī)溶劑蒸發(fā)損耗。此外，工藝繁鎖，工人不易準(zhǔn)確掌握，工藝時(shí)間長(zhǎng)，生產(chǎn)成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種改進(jìn)的以曼地亞紅豆杉枝葉為 原材料制備高純度10-脫乙酰基巴卡亭III的方法，以降低生產(chǎn)成本、簡(jiǎn)化工藝、易于操控， 并減少環(huán)境污染。
[0006] 本發(fā)明所述10-脫乙?；涂ㄍII的結(jié)構(gòu)式如下：
[0007]
[0008] 本發(fā)明所述以曼地亞紅豆杉枝葉為原料制備高純度10-脫乙?；涂ㄍII的方 法，工藝步驟如下：
[0009] (1)粗提
[0010] 將曼地亞紅豆杉枝葉粉碎物裝入提取罐中，用質(zhì)量濃度40~60%的醇溶液浸泡 8~12小時(shí)得浸泡混合料，然后將該浸泡混合料滲漉提取10~20小時(shí)并收集浸出液，滲 漉提取過(guò)程中，應(yīng)向提取罐中添加質(zhì)量濃度40~60%的醇溶液，保證提取罐中的曼地亞紅 豆杉枝葉粉碎物被醇溶液淹沒(méi)；浸泡時(shí)，所述曼地亞紅豆杉枝葉粉碎物的重量與醇溶液的 體積之比為1: (3~4)，曼地亞紅豆杉枝葉粉碎物的重量單位為公斤，醇溶液的體積單位為 升；
[0011] 滲漉提取完成后，用自來(lái)水對(duì)浸泡混合料再次滲漉置換出殘存在渣中的醇溶液， 該醇溶液可用于配制浸泡和滲漉提取所用的乙醇溶液，再次滲漉時(shí)，自來(lái)水的體積與曼地 亞紅豆杉枝葉粉碎物的重量之比為（3~4) : 1 ;
[0012] (2)沉降
[0013] 將步驟（1)收集到的浸出液在真空度為-0? 06Mpa~-0? 08Mpa、溫度為60°C~ 70°C下減壓濃縮回收盡醇后靜置12~20小時(shí)，然后取出上清液并將沉淀用溫度為70°C~ 80°C的自來(lái)水?dāng)嚢柘礈?~3次，將每次洗滌所得洗液與所述上清液合并得藥液；
[0014] ⑶吸附
[0015] 將步驟（2)得到的藥液上樣到大孔樹(shù)脂柱上，上樣過(guò)程中，包括10-脫乙?；?巴卡亭III在內(nèi)的物質(zhì)被大孔樹(shù)脂吸附，不被吸附的物質(zhì)隨水從大孔樹(shù)脂柱流出，當(dāng)所述 藥液上樣完畢后，用自來(lái)水洗滌大孔樹(shù)脂柱上的雜質(zhì)，洗滌至大孔樹(shù)脂柱的流出液呈 清亮透明態(tài)即可，然后用質(zhì)量濃度40~70 %的醇溶液進(jìn)行洗脫并收集洗脫液，再將洗 脫液在真空度為-〇. 〇6Mpa~-0. 08Mpa、溫度為60 °C~70 °C下減壓濃縮回收盡醇后， 于-0. 06Mpa~-0.0 SMpa真空度、溫度為60°C~70°C下濃縮至干得粗品I ;該步驟中的廢 水用于曼地亞紅豆杉基地的施水與施肥；
[0016] ⑷溶解
[0017] 將步驟⑶得到的粗品I加入到丙酮中攪拌溶解，然后過(guò)濾得丙酮液和濾渣，將 濾渣再用丙酮攪拌溶解1~3次并過(guò)濾，合并所有丙酮液，并將丙酮液在70°C~80°C下濃 縮回收丙酮后得干品；
[0018] 將所述干品加入到二氯甲烷中攪拌溶解，然后過(guò)濾得二氯甲烷液和濾渣，將濾渣 再用二氯甲烷攪拌溶解1~3次并過(guò)濾，合并所有二氯甲烷液，并將二氯甲烷液在70°C~ 80°C下濃縮回收二氯甲烷后得粗品II ;
[0019] (5)結(jié)晶
[0020] 將步驟（4)得到的粗品II加入乙腈中，在攪拌下加熱至50°C~60°C并保持該溫 度，當(dāng)粗品II基本溶解后停止加熱和攪拌，自然冷卻12~24小時(shí)，再通過(guò)離心、真空干燥得 初次結(jié)晶品；
[0021] (6)重結(jié)晶
[0022] 將步驟（5)所得初次結(jié)晶品用乙醇結(jié)晶一次、再用丙酮結(jié)晶一次，或用丙酮結(jié)晶 一次、再用乙醇結(jié)晶一次，然后用液相色譜法對(duì)經(jīng)上述兩次結(jié)晶后所得晶體進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù) 檢測(cè)結(jié)果用乙醇或丙酮再重復(fù)結(jié)晶2~3次，即得純度高于98%的10-脫乙?；涂ㄍII。
[0023] 用乙醇重結(jié)晶的作用主要是去除液相色譜圖中10-脫乙?；涂ㄍII峰左側(cè)的 雜質(zhì)，用丙酮重結(jié)晶的作用主要是去除液相色譜圖中10-脫乙?；涂ㄍII峰右側(cè)的雜 質(zhì)。
[0024] 上述方法，步驟（1)和步驟（3)中所述醇溶液為甲醇溶液或乙醇溶液。
[0025] 上述方法，步驟（1)中滲漉提取時(shí)浸出液的流速控制在60~1000L/h。
[0026] 上述方法，步驟（3)中所述大孔樹(shù)脂為非極性樹(shù)脂或弱極性樹(shù)脂，非極性樹(shù)脂為 HP-20型樹(shù)脂、HPD-100型樹(shù)脂、HPD-300型樹(shù)脂或D-101型樹(shù)脂，弱極性樹(shù)脂為AB-8型樹(shù) 月旨、DA-201型樹(shù)脂或HPD-400型樹(shù)脂，它們均為市售商品；大孔樹(shù)脂用量為曼地亞紅豆杉枝 葉粉碎物重量的〇. 5~1倍，醇溶液用量為大孔樹(shù)脂柱體積的5~10倍，藥液通過(guò)大孔樹(shù) 脂柱的流速為lBV/h~2BV/h。
[0027]上述方法，步驟（4)中粗品I的重量與丙酮的體積之比為1: (6~10)，各次濾渣的 重量與丙酮的體積之比為1: (6~10)，粗品I的重量單位為公斤，濾渣的重量單位為公斤， 丙酮的體積單位為升；干品的重量與二氯甲烷的體積之比為1: (6~10)，各次濾渣的重量 與二氯甲烷的體積之比為1: (6~10)，干品的重量單位為公斤，濾渣的重量單位為公斤，二 氯甲烷的體積單位為升。
[0028] 上述方法，步驟（5)中粗品II的重量與乙腈的體積之比為1: (2~3)，粗品II的重 量單位為公斤，乙腈的體積單位為升。
[0029] 上述方法，步驟（6)中重結(jié)晶的操作是：將晶體加入丙酮或乙醇中，在攪拌下加熱 到40°C~70°C并保持該溫度，當(dāng)丙酮或乙醇中的晶體完全溶解后停止加熱和攪拌，靜置到 室溫后過(guò)濾，將濾液在真空度-0. 〇6Mpa~-0. 08Mpa、溫度60°C~70°C下減壓或常壓濃縮回 收丙酮或乙醇至有晶體析出為止，然后在室溫、常壓下自然結(jié)晶6~12小時(shí)，繼后過(guò)濾并將 所得晶體真空干燥。
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0031] 1、由于本發(fā)明所述方法中采用了中藥提取方法中的醇溶液滲漉提取，提取時(shí)溶劑 由于重力作用而向下流動(dòng)，上層流下的浸出液置換下層的溶劑，不斷造成濃度差，滲漉法相 當(dāng)于無(wú)數(shù)次浸漬，是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，可連續(xù)操作，加之醇溶液對(duì)10-脫乙酰基巴卡亭III的溶 解性好，浸出效率高；此外，因室溫提取，無(wú)需加熱，因而保證了提取液成分的穩(wěn)定，同時(shí)降 低了能耗。
[0032] 2、本發(fā)明采用大孔樹(shù)脂吸附層析代替萃取，可操作性強(qiáng)，克服了萃取時(shí)不分層、收 率低，有機(jī)溶劑損耗大等不足；同時(shí)將所產(chǎn)生的廢水用于曼地亞紅豆杉基地的施水與施肥， 既有利于環(huán)境保護(hù)，又變廢為寶。
[0033] 3、本發(fā)明采用不同單一溶劑對(duì)粗品進(jìn)行溶解，除掉了大量的不溶雜質(zhì)，再經(jīng)多次 結(jié)晶最終得到高純度的10-脫乙?；涂ㄍII，該方法代替了現(xiàn)有技術(shù)中硅膠色譜層析、 再次大孔樹(shù)脂吸附層析以及反相樹(shù)脂層析的工藝步驟，工藝簡(jiǎn)單，成本低，操作易于掌握。
[0034] 4、乙腈結(jié)晶時(shí)總有一部分產(chǎn)品會(huì)進(jìn)入乙腈溶液中，且產(chǎn)品雜質(zhì)多，進(jìn)入乙腈中的 產(chǎn)品亦多，因此應(yīng)在保證粗品能被乙腈全部溶解的前題下應(yīng)盡量少加乙腈，本發(fā)明采用溶 解法先去掉粗品中大量的雜質(zhì)，提高產(chǎn)品的含量，再用乙腈結(jié)晶即達(dá)到了此目的，提高了產(chǎn) 品收率。而這步工藝是現(xiàn)有技術(shù)中所沒(méi)有的。
【附圖說(shuō)明】
[0035] 圖1為實(shí)施例3制得的純度為99. 4%的10-脫乙酰基巴卡亭III液相色譜圖。
[0036] 圖2為實(shí)施例1制得的純度為98. 2%的10-脫乙酰基巴卡亭III液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0037] 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述以曼地亞紅豆杉枝葉為原材料制備高純度10-脫 乙酰基巴卡亭III的方法作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0038] 下述實(shí)施例中，所使用的D-101型、AB-8型、HP-20型大孔樹(shù)脂，西安藍(lán)曉科技有限 公司公司生產(chǎn)，凈品級(jí)。所使用的甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙腈等化學(xué)試劑均為分析純。 所使用的高效液相色譜儀型號(hào)為L(zhǎng)C-10AT，日本島津公司生產(chǎn)。
[0039] 實(shí)施例1
[0040] 本實(shí)施例工藝步驟如下：
[0041] ⑴粗提