一種從貝殼類原料中提取麻痹性貝類毒素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于有機化合物提取領(lǐng)域，尤其是涉及一種從貝殼類原料中提取麻痹性貝 類毒素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 麻搏性貝類毒素 （paralytic shellfish poisoning toxins, PSP)是一類對人體 神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生麻痹作用的海洋生物毒素，主要由有毒甲藻產(chǎn)生，可通過食物鏈在貝類，如： 翡翠貽貝、櫛孔扇貝、嵌條扇貝、文蛤、青蛤、近江牡蠣和織紋螺等生物體內(nèi)累積放大。當人 們誤食這些染毒的海產(chǎn)品時，就會發(fā)生中毒或死亡。麻痹性貝類毒素的在全球分布越來越 廣，頻率越來越高，每年發(fā)生2000起中毒事件，其中死亡率達到15%。PSP毒素是以石房蛤 毒素（Saxitoxin，STX)為骨架而衍生出來的一類四氫嘌呤的衍生物如式I所示，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn) 該類毒素有50余種結(jié)構(gòu)組成成分，根據(jù)R4基團的不同可將該毒素分為氨基甲酸酯類、N-磺 酰氨甲酰基類、脫氨甲酰基類和脫氧脫氨甲?；?。
【主權(quán)項】
1. 一種從貝殼類原料中提取麻痹性貝類毒素的方法，包括如下步驟： 1) 將貝殼類原料與醋酸水溶液混勻至混合物的pH值為2-4后，超聲破碎，再置于沸水 中加熱5-10min，冷卻后過濾，收集濾液； 2) 將步驟1)所得濾液減壓濃縮后冷凍離心，取上清液用三氯甲烷萃取，取上層萃取液 與乙醇混勻后于室溫攪拌20-24小時后，進行第二次離心，收集上清液減壓濃縮后干燥，再 用酸化甲醇溶解后過濾，收集濾液干燥后，溶于pH值為2-4的醋酸水溶液后，上樣于凝膠柱 進行柱層析，收集保留時間為160min-250min的流分，得到含有所述麻痹性貝類毒素的提 取液； 所述酸化甲醇由體積比為2-5 :95-98的乙酸和甲醇組成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中，所述醋酸水溶液的濃度 為 0. 05-0. 2M，具體為 0.1 M ; 混合物的pH值為2-3 ; 超聲破碎步驟中，功率為600-1500W，具體為600W，時間為8-30min，具體為8-10min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟2)冷凍離心步驟中，轉(zhuǎn)速 為4000-6000rpm，具體為4000-5000rpm ;離心半徑為4_6cm，具體為5cm ; 時間10_12min，具體為IOmin ; 溫度為3-7°C，具體為4°C ; 所述第二次離心步驟中，轉(zhuǎn)速為8000-10000rpm ;離心半徑為4-6cm，具體為5cm ;時間 為 8-lOmin。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步驟2)柱層析步驟中，上樣 量為所用凝膠柱體積的2-5%，具體為3-4% ; 洗脫劑為pH值為2-4的醋酸水溶液； 洗脫速度為〇. 4-0. 6mL/min，具體為0. 5mL/min ; 洗脫劑的用量為所用凝膠柱體積的3-5倍，具體為4倍； 所用凝膠柱中，凝膠的型號為SephadexG15或Bio-Gel-p-2 ; 長徑比為30-40 :1，具體為30 :1 ; 凝膠柱的長度為60-lOOcm ;直徑為l-5cm，具體為2cm。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述貝殼類原料為蝦夷扇貝或華 貴柿孔扇貝。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從貝類組織中提取麻痹性貝類毒素的方法。該方法，包括如下步驟：1）將貝殼類原料與醋酸混至混合物的pH值為2-4后，超聲破碎，置于沸水中加熱5-10min，冷卻過濾收集濾液；2）將濾液減壓濃縮冷凍離心，取上清液用三氯甲烷萃取，取上層萃取液與乙醇混勻后于室溫攪拌20-24小時后二次離心，收集上清液減壓濃縮后干燥，再用酸化甲醇溶解后過濾，收集濾液干燥后溶于pH值為2-4的醋酸水溶液，上樣于凝膠柱進行柱層析，收集保留時間為160min-250min的流分即得。本發(fā)明最大限度地提高了麻痹性貝類毒素的提取率，能有效地去除組織內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)、糖類等雜質(zhì)，并使毒素的生物活性損失減少到最低程度。
【IPC分類】C07D487-20
【公開號】CN104876939
【申請?zhí)枴緾N201410072059
【發(fā)明人】張松山, 哈益明, 靳靜, 李慶鵬, 楊寶路, 李詠富, 李珍, 耿乙文
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院原子能利用研究所
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2014年2月28日