與乳頭狀甲狀腺瘤相關(guān)的基因的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及與乳頭狀甲狀腺瘤相關(guān)的基因 及其PCR檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率增長(zhǎng)迅速，已成為最常見(jiàn)的惡性 腫瘤之一，也是近年來(lái)發(fā)病率增長(zhǎng)最快的一種實(shí)體腫瘤。其中，90%是乳頭狀甲狀腺癌 (papillary thyroid cancer, PTC)。雖然乳頭狀甲狀腺癌的死亡率和其他惡性腫瘤相比死 亡率比較低，但是乳頭狀甲狀腺癌轉(zhuǎn)移率很高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)30% -50%，如果乳頭狀 甲狀腺癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，病人沒(méi)能及時(shí)診斷，結(jié)果喪失最佳手術(shù)時(shí)機(jī)，死亡率則顯著升高，是 預(yù)后不良的重要指標(biāo)。
[0003] 流行病學(xué)證據(jù)表明，在中國(guó)很多地區(qū)，女性中乳頭狀甲狀腺癌的發(fā)病率已超過(guò)乳 腺癌，位居第一位。乳頭狀甲狀腺癌的發(fā)生是一個(gè)多基因、多步驟的病變過(guò)程，包括遺傳學(xué) 等一系列改變。病因?qū)W研宄揭示，該惡性腫瘤為遺傳因素貢獻(xiàn)最大的一種惡性腫瘤。越來(lái) 越多的證據(jù)表明，體細(xì)胞的基因突變?cè)斐傻陌┗蚣せ钆c抑癌基因失活在腫瘤的發(fā)生發(fā)展 過(guò)程中扮演著至關(guān)重要的作用，因此，對(duì)于乳頭狀甲狀腺癌體細(xì)胞突變篩查有助于發(fā)掘其 發(fā)病的驅(qū)動(dòng)基因。
[0004] 對(duì)甲狀腺癌的診斷目前主要依靠甲狀腺超聲以及穿刺活檢病理，雖然穿刺活檢病 理診斷甲狀腺癌已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床，但仍存在30%可疑或不確定是否為甲狀腺癌的診斷 結(jié)果，并且穿刺是一項(xiàng)有創(chuàng)檢查，給患者帶來(lái)較大痛苦。甲狀腺癌一般以手術(shù)治療，早期發(fā) 現(xiàn)進(jìn)行治療的患者五年生存率能達(dá)95%，晚期發(fā)現(xiàn)的患者五年生存率降至59%，因此為 提高甲狀腺癌診斷的準(zhǔn)確性和早期診斷率，有必要尋找一種創(chuàng)傷性小，靈敏度和特異度均 較高的新的診斷方法。
[0005] 由于腫瘤遺傳的復(fù)雜性，傳統(tǒng)的體細(xì)胞突變篩查方法無(wú)法對(duì)腫瘤有一個(gè)整體的認(rèn) 識(shí)。而作為一種高效和高靈敏度的技術(shù)，全基因外顯子組測(cè)序能發(fā)現(xiàn)外顯子區(qū)的絕大部分 的疾病相關(guān)變異，可檢測(cè)常見(jiàn)變異和頻率〈5%的低頻突變，通過(guò)對(duì)外顯子區(qū)域的基因突變 進(jìn)行測(cè)定，一方面有助于確定乳頭狀甲狀腺癌相關(guān)癌基因及抑癌基因，為其早期分子診斷 提供依據(jù)；另一方面有助于更好地定性腫瘤，揭示相似組織病理類型和不同臨床特征的亞 臨床分類，幫助確定不同亞型乳頭狀甲狀腺癌的治療敏感性和判斷預(yù)后；更為關(guān)鍵的是，外 顯子組測(cè)序技術(shù)有助于尋找乳頭狀甲狀腺癌基因突變相關(guān)的最佳藥物靶點(diǎn)，從而改變相應(yīng) 分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和相關(guān)代謝途徑，使乳頭狀甲狀腺癌個(gè)體化治療成為可能。
[0006] 本發(fā)明中所引述的文獻(xiàn)、著作、專利和專利申請(qǐng)公開(kāi)書(shū)，其中全部或局部都明確地 和獨(dú)立地都在本專利申請(qǐng)書(shū)引用參考。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種基因，該基因命名為GAS8-AS1，其序列如序列表SEQ ID NO :1 所示。
[0008] 本發(fā)明的另一目的在于提供的GAS8-AS1基因在制備篩選、檢測(cè)或輔助診斷乳頭 狀甲狀腺癌的試劑的用途。
[0009] 本發(fā)明的另一目的在于提供與GAS8-AS1基因在嚴(yán)格條件下雜交的核酸分子，用 于制備檢測(cè)GAS8-AS1基因的試劑。
[0010] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核酸分子的序列如SEQ ID N0 :2或SEQ ID NO : 3所示。
[0011] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括與GAS8-AS1基因 在嚴(yán)格條件下雜交的核酸分子，可用于檢測(cè)GAS8-AS1基因。
[0012] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述試劑盒為實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)試劑盒。
[0013] 在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述試劑盒中包括的核酸分子的序列如SEQ ID N0 :2 或 SEQ ID N0 :3 所示。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 參考隨附的附圖，本發(fā)明更多的目的、功能和優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)本發(fā)明實(shí)施方式的如下 描述得以闡明，其中：
[0015] 圖1為IncRNA GAS8-AS1基因及相關(guān)基因突變示意圖；
[0016] 圖2為RNAfold軟件預(yù)測(cè)IncRNA GAS8-AS1的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)圖；
[0017] 圖3為浙江隊(duì)列和淮安隊(duì)列中檢測(cè)乳頭狀甲狀腺癌組織及癌旁正常組織中， IncRNA GAS8-AS1的表達(dá)水平示意圖；
[0018] 圖4為轉(zhuǎn)染攜帶IncRNA GAS8-AS1基因質(zhì)粒后，乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞系GLAG66、 NPA和TPC-1的增殖情況示意圖；
[0019] 圖5為實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染攜帶IncRNA GAS8-AS1基因質(zhì)粒后乳頭狀甲狀腺癌 細(xì)胞系GLAG66、NPA和TPC-1中IncRNA GAS8-AS1的表達(dá)水平情況示意圖；
[0020] 圖6為轉(zhuǎn)染針對(duì)IncRNA GAS8-AS1的siRNAs后，乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞系GLAG66 和TPC-1的增殖情況示意圖；
[0021] 圖7為實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染針對(duì)IncRNA GAS8-AS1的siRNAs后乳頭狀甲狀腺 癌細(xì)胞系GLAG66和TPC-1中IncRNA GAS8-AS1的表達(dá)水平情況示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 通過(guò)以下的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)解釋及展述， 使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠更加容易地理解本發(fā)明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明所述 主題的范圍僅限于以下的實(shí)例及限制本發(fā)明的任何或所有權(quán)利，更不應(yīng)該背離本發(fā)明的精 神。
[0023] 本發(fā)明的目的在于提供一種基因，該基因命名為GAS8-AS1，其序列如序列表SEQ ID N0 :1 所示。
[0024]GAS8-AS1基因（NCBI-GeneID:750)，又名C16orf3基因（16號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框 3)，位于人類16號(hào)染色體GAS8基因2號(hào)內(nèi)含子中。GAS8-AS1基因不含任何內(nèi)含子序列， 與GAS8基因相反的方向轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一條長(zhǎng)鏈非編碼RNA (IncRNA)，該RNA不能翻譯成蛋白質(zhì)。 目前，對(duì)于該基因及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的生物學(xué)功能仍不清楚。
[0025] GAS8-AS1 的基因序列（NCBI Reference Sequence:NR_122031. 1)如下：
[0026] lacctgcagtc ccagctactg ggcagcctga agcagcagga tggtgtgaac ccaggaggtg
[0027] 61gagcttgcag tgagccgagg tcgcgccacc gcactccagc ctgggccaca cagcgagatt
[0028] 121ccgtcagaat cagttacttt tcgggcacag ccccaggcca cttactgtga gcctttttct
[0029] 181ttctcaacac cacattcccc acagggaaaa cacatttctc acctcaaaag aagacaagac
[0030] 241aacgagcaaa caagaaggag cagcaggagg ggttctgagc cgaggatgcc gggcagacat
[0031] 301gagggagaca cgcacccccg aatccaacca gtgcctcggc acaacgacaa atgtcttcac
[0032] 361gtcacagacc tttagaggct cctgggcaga gcctgaacca gggctcctga ctggtctgtt
[0033] 421tggctcacat ggtgttgaga ttttgccatc actcaatatt cagatttctt ataaatatcc
[0034] 481agatttccag cttctcttgg aaaatcagaa aaaaacagca ctgaactcct aggcccacaa
[0035] 541ggcactcccc agtgaacaga tgaaactgtc ctctgctgcg gggcaggagt ctccaggtca
[0036] 601cccccatccc tccccacctg cctggaccct gaagaagcct tctgagtctg tggctcaacg
[0037] 661tgcgatgtgc agtgcaaggg cctgccccgt agcctgcccc gtaggctgcc ccatagcctg
[0038] 721ccccgtaagc tgccccgtag cctgccccgt aggctgcccc gtaggctcca tggccactgc
[0039] 781cccacaaggc ctgtctccac aggaatggga agcggacagg gagacgggca gcagctcaca
[0040] 841tgctgggaca acgcagtgtt caatccattc tccatccagc agctccagac atctttccag
[0041] 901aacacaaacc tgacccca