一種用于保護(hù)游離dna的血液抗凝劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種保護(hù)血液樣品的抗凝劑，具體是一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗 凝劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 不同用途的采血管中含有不同的添加劑或附加物。主要包括抗凝劑和促凝劑等， 添加劑可以是液體狀態(tài)、溶液干燥物、冷凍干燥物、粉狀等。
[0003] 在臨床中，由于肝素會(huì)抑制PCR過(guò)程，所以一般使用EDTA(包括乙二胺四乙酸二 鉀、乙二胺四乙酸三鉀、乙二胺四乙酸二鈉）、枸櫞酸鈉進(jìn)行血液的抗凝，抗凝血經(jīng)過(guò)離心 后，獲得的血漿再進(jìn)行后續(xù)研宄。
[0004] 抗凝后的血液通過(guò)離心，可獲得血漿。血漿DNA已經(jīng)成為臨床上重要的樣本。主 要用于兩方面的研宄，一是產(chǎn)前診斷，二是腫瘤相關(guān)標(biāo)志物、特異性靶標(biāo)的檢測(cè)。
[0005] 在產(chǎn)前診斷中通過(guò)對(duì)男胎孕婦血細(xì)胞、血衆(zhòng)和血清中Y-chromosomal的檢測(cè)， 80%的孕婦的血漿和血清中能檢測(cè)到胎兒源性的DNAi，且血漿DNA的靈敏度和準(zhǔn)確性更 高。而在未懷孕的女性中，均不能檢測(cè)出Y-chromosomal基因，三者的特異性一致。
[0006] 北京腫瘤醫(yī)院王潔教授2009年的一項(xiàng)研宄iimiv分析血漿DNA樣本EGFR19外 顯子和21外顯子的突變狀態(tài)，比較了血漿樣本和腫瘤組織的突變狀態(tài)，并確定了EGFR突變 情況和病人臨床預(yù)期結(jié)果的關(guān)聯(lián)性。腫瘤患者的血漿樣本與腫瘤組織的突變狀態(tài)的一致性 為87%，明確了如果無(wú)法獲得患者的腫瘤組織的情況下，血漿樣本可用于臨床腫瘤突變狀 態(tài)分析。
[0007] 雖然血漿DNA可用于臨床的預(yù)后及檢測(cè)等方面，但是在臨床過(guò)程中，由于實(shí)驗(yàn)條 件的限制或?qū)嶒?yàn)時(shí)間的限制，無(wú)法在得到血液后第一時(shí)間分離血漿，血液中的細(xì)胞破裂、血 漿中的DNA降解，造成無(wú)法進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的假陰性，從而無(wú)法為臨床提供有價(jià) 值的信息。
[0008] 有鑒于此，確有必要提供一種可有效防止細(xì)胞破裂，血漿游離DNA降解，為血漿提 供穩(wěn)定的環(huán)境，延長(zhǎng)血液的保質(zhì)期的血液抗凝劑，以減少對(duì)后續(xù)檢驗(yàn)檢測(cè)的干擾檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種可有效防止細(xì)胞破裂，血漿游離DNA降解，為血漿提 供穩(wěn)定的環(huán)境，延長(zhǎng)血液的保質(zhì)期，避免游離DNA降解的血液抗凝劑。
[0010] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0011] 一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，按重量體積比（w/v)計(jì)，包括以下組分：
[0012]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于，所述抗凝劑按重量體積比包 括：甲醛釋放劑0. 1~1. 5%，抗凝劑0. 15~0. 22%，嘌呤0. 014~0. 035g/l，磷酸二氫鹽 0.01%~0· 15%，氯化鹽0.4%~0· 10%，核酸酶抑制劑0.3~L4%。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：所述甲醛 釋放劑為1，3-二羥甲基-5, 5-二甲基海因，羥甲基甘氨酸鈉，尼泊金甲酯鈉，尼泊金乙酯鈉 或尼泊金丙酯鈉中的至少一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：所述抗凝 劑為乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸三鉀、乙二胺四乙酸二鈉或枸櫞酸鈉中的至少一種。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：所述嘌呤 為腺嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤中的至少一種。
5. 如權(quán)利要求1所述的一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：所述磷酸 二氫鹽為磷酸二氫鈉。
6. 如權(quán)利要求1所述的一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：所述氯化 鹽為氯化鈉、氯化鉀或氯化銨中的至少一種。
7. 如權(quán)利要求1所述的一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：所述核酸 酶抑制劑為尿素、DEPC、SDS或異硫氰酸胍的至少一種。
8. -種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑，其特征在于：按重量體積比計(jì)，包括以下組 分： 1，3-二羥甲基-5, 5-二甲基海因0. 8%，乙二胺四乙酸二鉀0. 18%，腺嘌呤0. 027g/l， 磷酸二氫鈉〇. 090 %，氯化鈉0. 498 %，尿素0. 7 %。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于保護(hù)游離DNA的血液抗凝劑。所述抗凝劑按重量體積比(W/V)包括：甲醛釋放劑占0.1～1.5％，抗凝劑占1.5～2.2g/L，嘌呤占0.014～0.035g/L，磷酸二氫鹽占0.01％～0.15％，氯化鹽占0.4％～1.0％，核酸酶抑制劑占0.3～1.4％。本發(fā)明是一種可有效防止細(xì)胞破裂，并減緩血漿中游離DNA的降解，為血漿提供穩(wěn)定的環(huán)境，延長(zhǎng)血液的穩(wěn)定性的血液保護(hù)劑，避免由于血液變質(zhì)、DNA降解而影響后續(xù)的檢測(cè)。
【IPC分類】C12N15-10
【公開(kāi)號(hào)】CN104830830
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510132774
【發(fā)明人】劉云芬, 林清華, 蔡阿莎, 宋慶濤, 鄭立謀
【申請(qǐng)人】廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年3月25日