一種新型細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)材料及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種新型細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)材料的制備及其應(yīng)用，屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是指在人工條件下(設(shè)定ph、溫度、溶氧等)，在細(xì)胞生物反應(yīng)器中高密度大量培養(yǎng)細(xì)胞用于生產(chǎn)生物制品的技術(shù)。目前大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞主要采用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)和不銹鋼罐培養(yǎng)系統(tǒng)。轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)存在以下問題:其表面積有限，細(xì)胞生長密度低；培養(yǎng)時(shí)監(jiān)測和控制環(huán)境條件(pH、溶氧等)不穩(wěn)定，影響產(chǎn)品質(zhì)量；勞動強(qiáng)度大，占用空間大，污染率高。不銹鋼罐培養(yǎng)存在以下問題:需要復(fù)雜的在位清洗(CIP)或在位滅菌(SIP)管路，工藝流程運(yùn)行之間交叉污染的可能性；每生產(chǎn)批次準(zhǔn)備時(shí)間長，生產(chǎn)人員勞動強(qiáng)度大；攪拌系統(tǒng)剪切力大，細(xì)胞損傷嚴(yán)重。
[0003]公開號為CN101448932的中國專利介紹了一種三維細(xì)胞培養(yǎng)，包括將前脂肪細(xì)胞引入到三維支持物基質(zhì)中，和容許所述細(xì)胞在所述支持物基質(zhì)中體外分化為脂肪細(xì)胞。所述基質(zhì)可以是膠原基質(zhì)。本方法可以用于研宄干細(xì)胞的發(fā)育，或用于研宄脂肪細(xì)胞對刺激的響應(yīng)。本方法提供了這樣的系統(tǒng)，由此具有與體內(nèi)的那些類似生物特征的脂肪細(xì)胞能夠在體外生長。
[0004]公開號為CN203429183U的中國專利介紹了一種三維細(xì)胞培養(yǎng)板，其包括細(xì)胞生長板和儲液板，所述的細(xì)胞生長板安裝于所述儲液板的上部；所述細(xì)胞生長板的下表面設(shè)有生長孔，所述儲液板的上表面設(shè)有儲液孔，所述的生長孔與所述的儲液孔相互配合；所述的生長孔中設(shè)有進(jìn)樣孔和環(huán)狀隔離槽，所述的進(jìn)樣孔位于所述生長孔的中心并貫穿其中，所述的環(huán)狀隔離槽位于所述進(jìn)樣孔的外周。本發(fā)明所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)板，具有成本低廉、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，可方便地應(yīng)用于倒置培養(yǎng)法中進(jìn)行三維細(xì)胞培養(yǎng)。
[0005]公開號為203559059U的中國專利介紹了一種全自動三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，包括基座、電源適配器、培養(yǎng)皿；所述基座內(nèi)裝有旋轉(zhuǎn)馬達(dá)；所述電源適配器上設(shè)有轉(zhuǎn)速表；所述培養(yǎng)皿為培養(yǎng)盤或培養(yǎng)管柱，培養(yǎng)盤或培養(yǎng)管柱背側(cè)均設(shè)有硅膠氣體交換膜；所述培養(yǎng)皿裝在基座上；所述基座與電源適配器連接。本發(fā)明中的細(xì)胞或組織在生長過程中是以自由落體的狀態(tài)懸浮，沒有攪拌器、氣泡等破壞性壓力，故組織在培養(yǎng)液中得以自由降落、翻轉(zhuǎn)并與培養(yǎng)液充分混合，其容器內(nèi)各方向的力量達(dá)到平衡，所以細(xì)胞或組織不會受到單一方向的力量影響，可朝任意方向均勻生長，增加細(xì)胞增殖速率，減少細(xì)胞死亡和有效增加細(xì)胞產(chǎn)物分泌的系統(tǒng)，解決了三維細(xì)胞培養(yǎng)的內(nèi)生(ingrowth)不足的限制。
[0006]公開號為CN102188752A的中國專利介紹了一種制備骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-管道支架復(fù)合物的方法及裝置，包括:(I)細(xì)胞接種:將供細(xì)胞立體培養(yǎng)的管道支架經(jīng)消毒處理后，吸取第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞懸液，均勻滴加至管道支架外表面，待吸收完全后將管道支架置于注射器內(nèi)，負(fù)壓抽吸2?5次；(2)靜態(tài)培養(yǎng):將接種后的管道支架置于細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，添加干細(xì)胞培養(yǎng)液中靜態(tài)培養(yǎng)20?30小時(shí)；(3)灌流培養(yǎng):將管道支架置于灌流培養(yǎng)槽中，所述灌流培養(yǎng)槽內(nèi)徑與所述管道支架外徑相匹配，軸心位置設(shè)置有與所述管道支架中央通道相匹配的實(shí)心柱體，管道支架放置于柱體與外壁間的空腔內(nèi)，空腔底部有供培養(yǎng)液流通的多孔底板；往灌流培養(yǎng)槽中通入干細(xì)胞培養(yǎng)液，在0.1?0.3mL/min流速下灌流培養(yǎng)10?15天，制備得到所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-管道支架復(fù)合物。該發(fā)明方法提高了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在PCL管道支架內(nèi)的接種效率，并提高了細(xì)胞在管道支架外壁內(nèi)的均勻分布和擴(kuò)增能力，利用這種方法可獲得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均勻以及高密度分布的復(fù)合管道支架，有望應(yīng)用于臨床上管道組織損傷的修復(fù)。
[0007]公開號為CN102935246A的中國專利介紹了一種三維細(xì)胞培養(yǎng)支架及其制備方法和應(yīng)用，包括:固相磷酸鈣含量為50?55% (重量體積比)的料漿的配制；聚甲基丙烯酸甲酯微球的制備；多孔磷酸鈣支架的制備；將步驟3制備的多孔磷酸鈣支架放入質(zhì)量百分含量為4?7%的海藻酸鈉鹽酸溶液中，真空浸泡l_2h，用超純水反復(fù)洗滌三次，即得。該支架具有制備簡單，便于操作和運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還提供該三維培養(yǎng)支架的制備方法和應(yīng)用。
[0008]公開號為CN102517211A的中國專利介紹了一種可快速解離型三維細(xì)胞培養(yǎng)載體及制備方法。是以羧甲基改性的殼聚糖為原料，將其溶解于PH = 5?8的磷酸鹽或2-(N-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中，然后加入碳二亞胺活化的二硫代二元酸交聯(lián)劑，通過羧甲基殼聚糖中氨基與交聯(lián)劑中羧基間的酰胺化反應(yīng)形成三維化學(xué)交聯(lián)的水凝膠，最后通過冷凍干燥得到三維多孔載體。該載體材料中的二硫鍵可被其還原劑迅速還原斷裂，實(shí)現(xiàn)多孔載體快速解離而溶解，能滿足多種體外三維細(xì)胞培養(yǎng)和培養(yǎng)結(jié)束后需要細(xì)胞-載體材料有效分離的特殊需求。本發(fā)明的殼聚糖基水凝膠三維細(xì)胞培養(yǎng)載體具有原料易得、工藝簡單、易生物活性改性，以及載體理化性質(zhì)、力學(xué)性能和降解速率可控等優(yōu)點(diǎn)，在各種三維細(xì)胞培養(yǎng)中具有良好的應(yīng)用前景。
[0009]公開號為CN101626781的中國專利介紹了一種制備具有抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)細(xì)胞群的方法，包括將腫瘤與單個(gè)核細(xì)胞置于三維細(xì)胞培養(yǎng)裝置中共同培養(yǎng)，以及從獲得的培養(yǎng)物中分離擴(kuò)增具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞群。本發(fā)明還公開了采用本方法獲得的具有抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞群及含有所述細(xì)胞群的試劑盒。
[0010]公開號為CN101611132的中國專利介紹了一種高效透氣裝置及培養(yǎng)細(xì)胞的方法，包括使用透氣培養(yǎng)室，以減少空間的使用，同時(shí)維持均勻的培養(yǎng)條件，并且更適合自動液體操作。它們包括將透氣材料集成至傳統(tǒng)的多層形式以解決培養(yǎng)條件不均勻的問題。它們包括培養(yǎng)裝置，其使用由透氣材料構(gòu)成的表面，充有等離子體的硅酮，并且集成傳統(tǒng)的附著表面，例如由傳統(tǒng)的經(jīng)組織培養(yǎng)處理的聚苯乙烯構(gòu)成的那些表面。它們包括集成了透氣透液膜的培養(yǎng)裝置。這樣產(chǎn)生多種優(yōu)點(diǎn)，包括放大期間更優(yōu)化的培養(yǎng)條件，以及對存量空間、培養(yǎng)箱空間和處理空間更有效的利用。還有，可以減少工作量和污染風(fēng)險(xiǎn)。
[0011]公開號為CN101611133的中國專利介紹了一種高效裝置及培養(yǎng)細(xì)胞的方法包括使用透氣培養(yǎng)室，以減少空間的使用，同時(shí)維持均勻的培養(yǎng)條件，并且更適合自動液體操作。它們包括將透氣材料集成至傳統(tǒng)的多層形式以解決培養(yǎng)條件不均勻的問題。它們包括培養(yǎng)裝置，其使用由透氣材料構(gòu)成的表面，充有等離子體的硅酮，并且集成傳統(tǒng)的附著表面，例如由傳統(tǒng)的經(jīng)組織培養(yǎng)處理的聚苯乙烯構(gòu)成的那些表面。它們包括集成了透氣透液膜的培養(yǎng)裝置。這樣產(chǎn)生多種優(yōu)點(diǎn)，包括放大期間更優(yōu)化的培養(yǎng)條件，以及對存量空間、培養(yǎng)箱空間和處理空間更有效的利用，還能減少工作量和污染風(fēng)險(xiǎn)。
[0012]公開號為CN102166380A的中國專利介紹了一種基于雙層硝酸纖維素膜灌流式的生物人工肝反應(yīng)器，包括箱體和設(shè)置在箱體內(nèi)腔中的細(xì)胞支架，其中，箱體上設(shè)置進(jìn)液口、出液口、進(jìn)氣口、排氣口 ；所述的細(xì)胞支架為雙層硝酸纖維素膜，該雙層硝酸纖維素膜的兩長邊緊貼于箱體的前側(cè)和后側(cè)的內(nèi)壁上，其兩端固定在箱體的左、右兩側(cè)的內(nèi)壁上，將箱體內(nèi)腔分隔成上、下兩個(gè)獨(dú)立空間，培養(yǎng)液在上、下兩個(gè)獨(dú)立空間中流動進(jìn)行物質(zhì)交換；所述雙層硝酸纖維素膜間的間隔空間作為肝細(xì)胞的三維生長空間，細(xì)胞在間隔空間內(nèi)生長，能在進(jìn)行充分的物質(zhì)傳輸?shù)耐瑫r(shí)避免液體流動時(shí)剪切力對細(xì)胞的傷害，