一種幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基及其制備與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基及其制備與應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori, Hp)是一種革蘭陰性微需氧桿菌。2005年 的諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獲得者Warren及Marshall在1983從慢性胃炎病人的胃鏡活檢 標(biāo)本中分離出Hp以來(lái)，受到國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界眾多學(xué)者的高度關(guān)注。Hp感染呈全球性分布，Hp 和一些上消化道疾病發(fā)生有緊密聯(lián)系，是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍的重要致病因素，與胃 癌、胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤發(fā)生密切相關(guān)，世界衛(wèi)生組織已將其列為一類致病因子。
[0003] 現(xiàn)階段的臨床檢測(cè)，主要有侵入性和非侵入性兩大類，前者有細(xì)菌培養(yǎng)、快速尿酶 試驗(yàn)等，后者有尿呼吸試驗(yàn)、抗體檢測(cè)等。細(xì)菌培養(yǎng)為診斷幽門螺桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)。幽門螺桿 菌穩(wěn)定生長(zhǎng)需要依賴微需氧環(huán)境，其次在培養(yǎng)時(shí)需保持環(huán)境相對(duì)濕度達(dá)到90%以上，以及 最適生長(zhǎng)的溫度為37°C，pH值為中性。幽門螺桿菌在自然環(huán)境中不能生長(zhǎng)繁殖，臨床從采 集樣本到真正開(kāi)始培養(yǎng)檢測(cè)還需要一段時(shí)間，而這段時(shí)間對(duì)于幽門螺桿菌的后續(xù)培養(yǎng)繁殖 是至關(guān)重要的，臨床上往往由于樣本保存不當(dāng)，即使采用最好的培養(yǎng)基，也會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性檢出 率大大降低。目前國(guó)內(nèi)對(duì)標(biāo)本的運(yùn)輸保存條件研宄得還比較少，或者說(shuō)是關(guān)注度還不高。本 發(fā)明解決的正是樣本從采集后到開(kāi)始培養(yǎng)的這段時(shí)間如何有效地保證幽門螺桿菌存活率 的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中所存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于，提供一種幽門螺桿菌運(yùn)送培 養(yǎng)基，以長(zhǎng)時(shí)間地保存所采集到的種幽門螺桿菌樣本，提高幽門螺桿菌的陽(yáng)性檢出率。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于，提供所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基的制備方法及其應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的再一目的在于，提供一種提高幽門螺桿菌的陽(yáng)性檢出率的方法。
[0007] 本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 本發(fā)明通過(guò)在瓊脂中添加還原劑，研發(fā)出一種能夠提供適合幽門螺桿菌穩(wěn)定生長(zhǎng) 所需氣體環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)成分的運(yùn)送培養(yǎng)基。
[0009] 本發(fā)明的第一方面提供了一種幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基，每1000ml所述幽門螺桿 菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂3. 0-8. 0g ;抗壞血酸5. 0-15. Omg ;葡萄糖5. 0-10. 0g ;甘氨酸 10. 0-50.0 mg ;二硫蘇糖醇 5. 0-15. Omg ;硫酸亞鐵按 3. 0-8. Omg ;硼氫化鈉 3. 0-8. Omg。
[0010] 優(yōu)選地，每1000ml所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂5. 0g。
[0011] 優(yōu)選地，每l〇〇〇ml所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂5. 0g，葡萄糖7. 0g，二 硫蘇糖醇10. 〇mg。
[0012] 更優(yōu)選地，每1000ml所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂5. 0g;抗壞血 酸l〇mg ;葡萄糖7. 0g ;甘氨酸30.0 mg ;二硫蘇糖醇10.0 mg ;硫酸亞鐵按5. Omg ;硼氫化鈉 5. Omg〇
[0013] 本發(fā)明第二方面提供了一種制備所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基的方法，包括步驟： 按重量份稱取各組分，加入至去離子水中，溶解，高壓滅菌，分裝即可。
[0014] 本發(fā)明第三方面提供了所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基在運(yùn)送幽門螺桿菌中的用途。
[0015] 優(yōu)選地，所述用途為將所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基用于運(yùn)送幽門螺桿菌樣本以提 高幽門螺桿菌陽(yáng)性檢出率。
[0016] 本發(fā)明的第四方面提供了一種運(yùn)送幽門螺桿菌樣本的方法，包括步驟：將采集的 幽門螺桿菌樣本放入所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中運(yùn)送。
[0017] 本發(fā)明的第五方面還提供了一種提高幽門螺桿菌陽(yáng)性檢出率的方法，包括步驟： 將采集的幽門螺桿菌樣本放入前述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送，再進(jìn)行后續(xù)的培養(yǎng)檢測(cè)。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] (1)本發(fā)明的幽門螺桿菌轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基配制簡(jiǎn)單，成本低廉。
[0020] (2)本發(fā)明的幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基為半固體培養(yǎng)基，運(yùn)輸方便，易攜帶?？朔?液體狀的培養(yǎng)基在運(yùn)輸過(guò)程中容易與瓶口接觸，導(dǎo)致開(kāi)蓋關(guān)蓋染菌幾率大大提高的缺陷。 而本發(fā)明的半固體的培養(yǎng)基由于其流動(dòng)性差，就大大降低這種染菌情況的發(fā)生。
[0021] ⑶本發(fā)明所添加的還原劑，能有效地保證幽門螺桿菌的一種微需氧環(huán)境，因而能 盡可能長(zhǎng)時(shí)間保存臨床樣本的活性狀態(tài)，在非培養(yǎng)狀態(tài)下存活的時(shí)間可達(dá)48h以上，有利 于標(biāo)本遠(yuǎn)距離的轉(zhuǎn)運(yùn)，利于醫(yī)院和檢驗(yàn)人員的靈活安排標(biāo)本的檢驗(yàn)時(shí)間。
[0022] (4)本發(fā)明的幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基由于能長(zhǎng)時(shí)間保存樣本的活性狀態(tài)，因而對(duì) 后續(xù)的培養(yǎng)有很好的促進(jìn)作用，能夠避免采集到的幽門螺桿菌變成非可培養(yǎng)態(tài)的狀態(tài)，大 大提高陽(yáng)性檢出率。與以往不采用的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基相比，采用本發(fā)明的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，陽(yáng)性檢出 率提高40%以上。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1 :為本發(fā)明半固體狀的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基示意圖。
[0024] 圖2 :為本發(fā)明實(shí)施例5采樣具體流程示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 在進(jìn)一步描述本發(fā)明【具體實(shí)施方式】之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于下 述特定的具體實(shí)施方案；還應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明實(shí)施例中使用的術(shù)語(yǔ)是為了描述特定的具體 實(shí)施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0026]當(dāng)實(shí)施例給出數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)理解，除非本發(fā)明另有說(shuō)明，每個(gè)數(shù)值范圍的兩個(gè)端 點(diǎn)以及兩個(gè)端點(diǎn)之間任何一個(gè)數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術(shù)和 科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實(shí)施例中使用的具體方法、設(shè)備、 材料外，根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本 發(fā)明實(shí)施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來(lái)實(shí) 現(xiàn)本發(fā)明。
[0027] 除非另外說(shuō)明，本發(fā)明中所公開(kāi)的實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)方法、制備方法均采用本技術(shù) 領(lǐng)域常規(guī)的分子生物學(xué)、生物化學(xué)、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和分析、分析化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、重組DNA技 術(shù)及相關(guān)領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)在現(xiàn)有文獻(xiàn)中已有完善說(shuō)明，具體可參見(jiàn)Sambrook等MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarbor LaboratoryPress，1989andThirdedition，2001;Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSIN MOLECULARBIOLOGY,Johnffiley&Sons,NewYork,1987andperiodicupdates；theseries METHODSINENZYMOLOGY,AcademicPress,SanDiego；ffolffe,CHROMATINSTRUCTUREAND FUNCTION,Thirdedition,AcademicPress,SanDiego,1998 ；METH0DSINENZYMOLOGY, Vol. 304,Chromatin(P.M.ffassarmanandA.P.ffolffe,eds.),AcademicPress，SanDiego， 1999;和METHODSINMOLECULARBIOLOGY，Vol. 119,ChromatinProtocols(P.B.Becker， ed.)HumanaPress，Totowa，1999 等。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 本發(fā)明所述的運(yùn)送培養(yǎng)基配制方法為，按下表組分稱量：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基，每1000 ml所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂 3. 0-8.Og;抗壞血酸 5. 0-15.Omg;葡萄糖 5. 0-10.Og;甘氨酸 10. 0-50.Omg;二硫蘇糖醇 5. 0-15.Omg;硫酸亞鐵按 3. 0-8.Omg;硼氫化鈉 3. 0-8.Omg。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基，其特征在于，每1000ml所述幽門螺 桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂5. Og。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基，其特征在于，每1000 ml所述幽門螺 桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂5. 0g，葡萄糖7. 0g，二硫蘇糖醇10.Omg。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基，其特征在于，每1000ml所述幽門螺 桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中含有：瓊脂5.Og;抗壞血酸10.Omg;葡萄糖7.Og;甘氨酸30.Omg;二硫蘇 糖醇10.Omg;硫酸亞鐵按5.Omg;硼氫化鈉5.Omg。
5. -種制備如權(quán)利要求1~4任一權(quán)利要求所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基的方法，包括 步驟：按重量份稱取各組分，加入至去離子水中，溶解，高壓滅菌，分裝即可。
6. 如權(quán)利要求1~4任一權(quán)利要求所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基在運(yùn)送幽門螺桿菌樣本 中的用途。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述用途為將所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng) 基用于運(yùn)送幽門螺桿菌樣本以提高幽門螺桿菌陽(yáng)性檢出率。
8. -種運(yùn)送幽門螺桿菌樣本的方法，包括步驟：將采集的幽門螺桿菌樣本放入如權(quán)利 要求1~4任一權(quán)利要求所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中運(yùn)送。
9. 一種提高幽門螺桿菌陽(yáng)性檢出率的方法，包括步驟：將采集的幽門螺桿菌樣本先放 入如權(quán)利要求1~4任一權(quán)利要求所述幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基中運(yùn)送，再進(jìn)行后續(xù)的培養(yǎng) 檢測(cè)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基及其制備與應(yīng)用。所述運(yùn)送培養(yǎng)基包括瓊脂和還原劑等，能有效地保證幽門螺桿菌的一種微需氧環(huán)境，因而能盡可能長(zhǎng)時(shí)間保存臨床樣本的活性狀態(tài)，在非培養(yǎng)狀態(tài)下存活的時(shí)間可達(dá)48h以上，有利于標(biāo)本遠(yuǎn)距離的轉(zhuǎn)運(yùn)，利于醫(yī)院和檢驗(yàn)人員的靈活安排標(biāo)本的檢驗(yàn)時(shí)間。本發(fā)明的幽門螺桿菌運(yùn)送培養(yǎng)基由于能長(zhǎng)時(shí)間保存樣本的活性狀態(tài)，因而對(duì)后續(xù)的培養(yǎng)有很好的促進(jìn)作用，能夠避免采集到的幽門螺桿菌變成非可培養(yǎng)態(tài)的狀態(tài)，大大提高陽(yáng)性檢出率。與以往不采用的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基相比，采用本發(fā)明的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，陽(yáng)性檢出率提高40%以上。
【IPC分類】C12Q1-04, C12N1-20, C12R1-01
【公開(kāi)號(hào)】CN104762235
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510167773
【發(fā)明人】郭堯
【申請(qǐng)人】上海千麥博米樂(lè)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2015年4月10日