一株彎曲乳酸桿菌(Lactobacillus crispatus)及其制藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一株分離自人體的可用于防治細菌性陰道病 的彎曲乳酸桿菌（Lactobacilluscrispatus)。
【背景技術(shù)】
[0002] 微生物棲息在人體幾乎每一個部位，如皮膚、口腔、腸道、生殖道等各部位都存在 著大量的細菌，其中包括多種不同種類的細菌，可粗略分為"有益菌"和"條件致病菌"兩大 類，在健康人體這些細菌的數(shù)量和比例保持穩(wěn)定的平衡狀態(tài)。婦女陰道內(nèi)可存在多種細菌， 其中，乳酸桿菌是維持陰道健康微生態(tài)環(huán)境最常見和最重要的有益菌，乳酸桿菌占健康婦 女陰道細菌總量的90%以上。它們主要通過產(chǎn)酸、過氧化氫來抑制病原菌和其他條件致病 菌的生長。如果某些因素引起陰道內(nèi)乳桿菌數(shù)量減少，甚至完全缺失，則可導(dǎo)致陰道內(nèi)許多 條件治病菌異常增殖，出現(xiàn)以明顯的陰道微生態(tài)環(huán)境紊亂為主要特征的細菌性陰道病。
[0003] 細菌性陰道病是育齡期婦女最為常見但又未受到重視的多發(fā)病，在健康婦女中的 患病率約為20%，孕婦約為15%。細菌性陰道病是"小疾病，大麻煩"，患者生活質(zhì)量明顯下 降，精神負擔很重；而且感染艾滋病、淋病、非淋菌性尿道炎等性病的風險明顯增加；患病 孕婦可出現(xiàn)一系列妊娠并發(fā)癥，如早產(chǎn)及絨毛膜羊膜炎等。目前，細菌性陰道病的治療主要 依靠甲硝唑或林可霉素等抗生素，但治療效果不佳，治愈率不到50%，而且復(fù)發(fā)的比例高。 一半患者即使大量應(yīng)用抗生素亦不能治愈，臨床癥狀持續(xù)存在，患者備受煎熬，醫(yī)生苦無良 策。如何控制復(fù)發(fā)、徹底根治細菌性陰道病是婦產(chǎn)科醫(yī)生亟需解決的棘手問題。
[0004] 為了提高細菌性陰道病的治療效果，臨床上急需新的治療方案。由于抗生素治療 細菌性陰道病效果欠佳和抗生素治療引起的肝、腎損害等毒副作用，國內(nèi)外一直在努力探 索基于益生菌乳桿菌制劑的微生態(tài)療法。微生態(tài)治療是將以殺滅微生物為主要的治療方法 變?yōu)樵黾右嫔?、恢?fù)陰道正常微生態(tài)環(huán)境為目的的新型治療理念。即在利用抗生素清除 致病菌后，直接補充自健康婦女陰道分離的乳桿菌活菌制劑，使其粘附定植下來，促進其天 然的抵抗致病菌生長的能力。
[0005] 健康婦女陰道內(nèi)存在多種乳桿菌，具有個體差異性，且彎曲乳酸桿菌各株間抗致 病菌能力差異明顯。選擇乳桿菌益生菌時，需要綜合考慮乳桿菌的種類，其產(chǎn)酸、產(chǎn)H2o2能 力，及與陰道上皮細胞粘附的能力，其中乳酸桿菌能否在陰道成功定植，是乳桿菌持續(xù)作用 的基礎(chǔ)，也是乳桿菌發(fā)揮療效的關(guān)鍵因素。
[0006] 由于不同的乳桿菌株對陰道上皮細胞有不同的粘附親和力，親和力強的菌株定植 能力強，才能起到抑殺多種病原微生物的作用。如果乳桿菌活菌制劑不能定植在陰道上皮 細胞，體外實驗中再強的抑殺多種病原微生物的作用都無從談起，變?yōu)榭疹^支票。
[0007] -個完善而有效的益生菌菌種，其本身至少必須具備下述標準：（1)須為宿主應(yīng) 用位置正常定植菌；（2)能在宿主應(yīng)用位置存活并生長；（3)可提供宿主有益的作用；（4) 相關(guān)產(chǎn)品制成及儲存期間須可維持活性及存活能力。
[0008] 目前，國內(nèi)陰道益生菌菌劑只有一種，其主要成分是德氏乳桿菌活菌。雖然它是從 健康婦女陰道分離出來的一種乳桿菌，但不是我國婦女陰道菌群中的主要有益菌，我國健 康婦女陰道細菌以彎曲乳酸桿菌為主。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明人基于上述領(lǐng)域的空白，從我國健康婦女體內(nèi)分離了一種彎曲乳酸桿菌 (Lactobacilluscrispatus)菌株。本發(fā)明還證明了該菌株對陰道上皮細胞具有較強的黏 附作用，同時還證實該菌株具有較強的產(chǎn)生H202的能力，該菌制成的菌劑在存儲期間能夠 維持較高的活性和存活能力，說明可以用于防治細菌性陰道病。
[0010] 本發(fā)明請求保護的技術(shù)方案如下：
[0011]一株彎曲乳酸桿菌菌株IMC-105(Lactobacilluscrispatus)，其保藏號為CGMCC NO. 9467。
[0012] 用于預(yù)防和/或治療細菌性陰道病的制品，其特征在于：所述制品的活性成分包 括所述的彎曲乳酸桿菌菌株IMC-105。
[0013] 用于預(yù)防和/或治療細菌性陰道病的制品，其特征在于：所述制品的活性成分是 所述的彎曲乳酸桿菌菌株MC-105。
[0014] 所述的制品還含有制備菌劑的常規(guī)輔料成分。
[0015]用于抑制致病性細菌的制品，其特征在于：所述制品的活性成分包括所述的彎曲 乳酸桿菌菌株IMC-105。
[0016] 用于抑制致病性細菌的制品，其特征在于：所述制品的活性成分是所述的彎曲乳 酸桿菌菌株IMC-105。
[0017] 所述制品還含有制備菌劑的常規(guī)輔料成分。
[0018] 所述的彎曲乳酸桿菌菌株頂C-105在制備預(yù)防和/或治療細菌性陰道病的制品中 的用途，其特征在于，所述制品的活性成分包括所述的彎曲乳酸桿菌菌株IMC-105。
[0019] 所述的彎曲乳酸桿菌菌株頂C-105在制備預(yù)防和/或治療細菌性陰道病的制品中 的用途，其特征在于：所述制品的活性成分是所述的彎曲乳酸桿菌菌株IMC-105。
[0020] 所述的彎曲乳酸桿菌菌株MC-105用于體外抑制環(huán)境中致病性細菌的用途。
[0021] 本發(fā)明根據(jù)益生菌菌種的公認標準，從我國健康婦女體內(nèi)分離了陰道內(nèi)優(yōu)勢菌 群一彎曲乳酸桿菌，并從中篩選出了一株具有較高的產(chǎn)H202能力和與陰道上皮細胞粘附定 植能力強的益生菌株一彎曲乳酸桿菌頂C-105。實驗證明，將所述彎曲乳酸桿菌MC-105， 按照106cfu/ml的密度接種于MRS液體培養(yǎng)基，于厭氧環(huán)境下，37°C靜置培養(yǎng)21h后，轉(zhuǎn)換 為振蕩培養(yǎng)3h，轉(zhuǎn)速為220rpm，最終所得培養(yǎng)液上清中H202的濃度高達220. 2yM。高效產(chǎn) 生過氧化氫，可有效抑制外來的病原菌和其他條件致病菌的生長；同時，該彎曲乳酸桿菌對 每個陰道上皮細胞平均粘附數(shù)量達到204,這也證實該菌株對陰道上皮細胞具有較強的粘 附作用，保證了菌株在陰道上皮的定植。
[0022] 該菌株已經(jīng)送保藏，保藏名稱為MC-105,保藏號為CGMCCNO. 9467。大小約1-2 毫米、不透明、突起的乳白色菌落，菌落邊緣整齊、較濕潤，大小形態(tài)穩(wěn)定（如圖1)。處于對 數(shù)生長期的所述菌株MC-105,經(jīng)涂片、革蘭染色，光學(xué)顯微鏡下觀察菌體的形態(tài)為：革蘭 染色陽性，無芽胞桿菌，無鞭毛。彎曲乳酸桿菌MC-105兼性厭氧，生長最適溫度37-42°C， 最適pH5. 8-6. 2 ;可發(fā)酵葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖等多種糖。
[0023] 根據(jù)實驗證實的該菌株的產(chǎn)H202能力和對陰道上皮細胞的粘附能力，本發(fā)明還請 求保護以該菌為活性的用于預(yù)防和/或治療細菌性陰道病的制品。制備方法是本領(lǐng)域技 術(shù)人員熟知的常規(guī)手段，例如但不限于如《一種穩(wěn)定安全的微生態(tài)制劑及其制備方法和用 途》（CN1663573B)，《滅活的乳酸菌微生態(tài)制劑及其制備方法》（CN101612169B)，《一種乳酸 桿菌微生態(tài)制劑的制備方法》（CN101530160A)，《作為人體陰道中的益生微生物的乳酸產(chǎn)生 細菌》(CN1308436)等現(xiàn)有技術(shù)中公開的制備方法或操作步驟，目前市場上公開銷售使用的 "乳酸菌陰道膠囊"、"陰道用乳桿菌活菌膠囊（定君生）"的制備工藝，以所述彎曲乳酸桿菌 MC-105為活性成分，通過所述常規(guī)手段和/或現(xiàn)有技術(shù)文獻中公開的制備方法或操作步 驟或目前市場上公開銷售使用的產(chǎn)品的制備工藝，可以獲得用于預(yù)防和/或治療細菌性陰 道病的制品，或者用于抑制致病性細菌的制品。
[0024] 本發(fā)明請求保護的所述制品的劑型優(yōu)選但不限于：膠囊劑。
[0025] 根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員對乳桿菌的用途方面的常識，基于本發(fā)明請求保護的菌株在 產(chǎn)過氧化氫方面的能力，該菌株可用于體外抑制環(huán)境中存在的致病性細菌。
[0026] 保藏信息
[0027] 菌種保藏名稱：IMC_105
[0028]保藏號：CGMCCNo. 9467
[0029] 分類命名：彎曲乳桿菌
[0030]拉丁名：Lactobacilluscrispatus
[0031] 保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0032] 保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0033] 保藏日期：2014年7月16日
【附圖說明】
[0034] 圖1為從健康人引導(dǎo)分離的彎曲乳酸桿菌IMC-105菌落。
[0035]圖2為彎曲乳酸桿菌MC-105對陰道上皮細胞的粘附作用示意圖。