>7. 如權(quán)利要求1所述的原肝干細(xì)胞，其中所述原肝干細(xì)胞是膽管祖細(xì)胞的前體。
8. 如權(quán)利要求5所述的原肝干細(xì)胞，其中所述的近肝干細(xì)胞表達(dá)α -胎蛋白、白蛋白和 細(xì)胞角蛋白19。
9. 如權(quán)利要求8所述的原肝干細(xì)胞，其中所述的近肝干細(xì)胞還表達(dá)Ep-CAM、AC133、細(xì) 胞角蛋白8/18或者它們的組合。
10. -種含有人類近肝干細(xì)胞的組合物，其中所述的近肝干細(xì)胞是肝細(xì)胞或膽管祖細(xì) 胞的前體。
11. 如權(quán)利要求10所述的近肝干細(xì)胞，其中所述的近肝干細(xì)胞表達(dá)α-胎蛋白、白蛋白 和細(xì)胞角蛋白19。
12. 如權(quán)利要求11所述的近肝干細(xì)胞，其中所述的近肝干細(xì)胞還表達(dá)Ep-CAM、AC133、 細(xì)胞角蛋白8/18或者它們的組合。
13. -種分離來源于人類肝組織的人類肝祖細(xì)胞的方法，該方法包括鑒定表達(dá)Ep-CAM 和AC133的細(xì)胞。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的祖細(xì)胞還表達(dá)白蛋白。
15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的祖細(xì)胞還表達(dá)細(xì)胞角蛋白19。
16. 如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的祖細(xì)胞是干細(xì)胞。
17. 如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的祖細(xì)胞是干細(xì)胞。
18. 如權(quán)利要求13、14或15所述的方法，該方法還包括除去表達(dá)⑶45的細(xì)胞。
19. 如權(quán)利要求13、14或15所述的方法，其中所述的肝組織獲自于胎兒或新生兒。
20. 如權(quán)利要求13、14或15所述的方法，其中所述的肝組織獲自于兒童或成人。
21. 通過如權(quán)利要求19或20所述的方法分離的人類肝祖細(xì)胞，其中所述的肝祖細(xì)胞是 原肝干細(xì)胞。
22. 通過如權(quán)利要求19或20所述的方法分離的人類肝祖細(xì)胞，其中所述的肝祖細(xì)胞是 還表達(dá)N-CAM、CAM5. 2、c-kit、⑶146或其組合的原肝干細(xì)胞。
23. 通過如權(quán)利要求19或20所述的方法分離的人類肝祖細(xì)胞，其中肝所述的祖細(xì)胞是 近肝干細(xì)胞。
24. 通過如權(quán)利要求19或20所述的方法分離的人類肝祖細(xì)胞，其中所述的肝祖細(xì)胞是 還表達(dá)α _胎蛋白、白蛋白和細(xì)胞角蛋白19的近肝干細(xì)胞。
25. -種分離來源于人類肝組織的人類肝祖細(xì)胞的方法，包括鑒定表達(dá)Ep-CAM的細(xì) 胞。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，該方法還包括除去表達(dá)⑶45的細(xì)胞。
27. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的祖細(xì)胞還表達(dá)白蛋白。
28. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的肝組織獲自于成人。
29. 如權(quán)利要求25或27所述的方法，其中所述的肝祖細(xì)胞是原肝干細(xì)胞。
30. 如權(quán)利要求25或27所述的方法，其中所述的肝祖細(xì)胞是近肝干細(xì)胞。
31. 如權(quán)利要求25或27所述的方法，其中所述的祖細(xì)胞還表達(dá)AC133。
32. 通過如權(quán)利要求28所述的方法分離的人類肝干細(xì)胞，其中所述的肝干細(xì)胞是近肝 干細(xì)胞。
33. 通過如權(quán)利要求28所述的方法分離的人類肝干細(xì)胞，其中所述的肝干細(xì)胞是還表 達(dá)AC133的近肝干細(xì)胞。
34. -種分離人類原肝干細(xì)胞的方法，該方法包括： (a) 提供來源于人類肝組織的細(xì)胞混合物；和 (b) 在選擇人類原肝干細(xì)胞的條件下，在含有無血清培養(yǎng)基的表面上培養(yǎng)所述細(xì)胞混 合物，而形成包括人類原肝干細(xì)胞的集落，所述無血清培養(yǎng)基包括碳水化合物代謝調(diào)解劑、 鐵載脂蛋白和膜產(chǎn)生因子。
35. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的肝組織獲自于胎兒、新生兒、嬰兒、兒童或 成人。
36. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的細(xì)胞混合物來源于富集了實(shí)質(zhì)細(xì)胞的人類 肝組織。
37. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的表面未被涂敷。
38. 如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述的未涂敷的表面是塑膠表面。
39. 如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述的塑膠表面是帶電荷的。
40. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述的帶電荷的塑膠表面是組織培養(yǎng)塑膠。
41. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的碳水化合物代謝調(diào)解劑是胰島素。
42. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的鐵載脂蛋白是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
43. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的膜產(chǎn)生因子是含有一種或多種脂類的組合 物。
44. 如權(quán)利要求43所述的方法，其中所述的脂類是游離脂肪酸。
45. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的無血清培養(yǎng)基還包括皮質(zhì)醇。
46. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的無血清培養(yǎng)基還包括抗氧化劑。
47. 如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述的抗氧化劑是硒。
48. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的原肝干細(xì)胞是近肝干細(xì)胞、肝細(xì)胞祖細(xì)胞 或膽管祖細(xì)胞的前體。
49. 通過如權(quán)利要求34所述的方法分離的人類原肝干細(xì)胞。
50. 通過如權(quán)利要求34所述的方法分離的人類原肝干細(xì)胞，其中所述的原肝干細(xì)胞表 達(dá)Ep-CAM、AC133和白蛋白。
51. 通過如權(quán)利要求34所述的方法分離的人類原肝干細(xì)胞，其中所述的原肝干細(xì)胞表 達(dá)Ep-CAM、AC133、白蛋白、細(xì)胞角蛋白8/18和細(xì)胞角蛋白19。
52. 通過如權(quán)利要求34所述的方法分離的人類原肝干細(xì)胞，其中所述的原肝干細(xì)胞 還表達(dá)（i)Ep-CAM、AC133、白蛋白、細(xì)胞角蛋白8/18和細(xì)胞角蛋白19;以及（ii)N-CAM、 CAM5. 2、c-kit、CD146或者它們的組合。
53. 通過如權(quán)利要求34所述的方法分離的人類原肝干細(xì)胞，其中所述的原肝干細(xì)胞是 近肝干細(xì)胞的前體。
54. 通過如權(quán)利要求34所述的方法分離的人類原肝干細(xì)胞，其中所述的原肝干細(xì)胞是 子代肝干細(xì)胞的前體，其中所述的子代肝干細(xì)胞表達(dá)α-胎蛋白、白蛋白和細(xì)胞角蛋白19。
55. -種分離人類近肝干細(xì)胞的方法，該方法包括： (a) 提供來源于人類肝組織的細(xì)胞混合物； (b) 在選擇人類原肝干細(xì)胞的條件下，在含有無血清培養(yǎng)基的塑膠表面上培養(yǎng)所述細(xì) 胞混合物，而形成包括人類原肝干細(xì)胞的集落，所述無血清培養(yǎng)基包括碳水化合物代謝調(diào) 解劑、鐵載脂蛋白和膜產(chǎn)生因子；和 (c) 在包括至少一種發(fā)育因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)來自所述集落的細(xì)胞，從而產(chǎn)生包括人 類近肝干細(xì)胞的細(xì)胞。
56. -種分離人類近肝干細(xì)胞的方法，該方法包括： (a) 提供來源于人類肝組織的細(xì)胞混合物； (b) 在選擇人類原肝干細(xì)胞的條件下，在含有無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述細(xì)胞混合物，而 形成包括人類原肝干細(xì)胞的集落，所述無血清培養(yǎng)基包括碳水化合物代謝調(diào)解劑、鐵載脂 蛋白和膜產(chǎn)生因子；和 (c) 在包括至少一種發(fā)育因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)來自所述集落的細(xì)胞，從而產(chǎn)生包括人 類近肝干細(xì)胞的細(xì)胞。
57. 如權(quán)利要求55-56所述的方法，其中所述的發(fā)育因子由第二細(xì)胞提供。
58. 如權(quán)利要求57所述的方法，其中所述的第二細(xì)胞是飼養(yǎng)細(xì)胞。
59. 如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述的飼養(yǎng)細(xì)胞是STO飼養(yǎng)細(xì)胞。
60. 如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述的飼養(yǎng)細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞。
61. 如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述的飼養(yǎng)細(xì)胞是基質(zhì)細(xì)胞。
62. 如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述的基質(zhì)細(xì)胞是胚胎細(xì)胞。
63. 如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述的胚胎細(xì)胞是胚肝基質(zhì)細(xì)胞。
64. 如權(quán)利要求55-56所述的方法，其中所述的近肝干細(xì)胞是肝細(xì)胞或膽管祖細(xì)胞的 前體。
65. 通過如權(quán)利要求55或56所述的方法分離的人類近肝干細(xì)胞。
66. 通過如權(quán)利要求55或56所述的方法分離的人類近肝干細(xì)胞，其中所述的近肝干細(xì) 胞表達(dá)α-胎蛋白、白蛋白和細(xì)胞角蛋白19。
67. 如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述的人類原肝干細(xì)胞含有外源核酸。
68. 如權(quán)利要求10-11任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述的人類近肝干細(xì)胞含有外源核 酸。
69. -種治療肝機(jī)能障礙或疾病的方法，該方法包括向受試者給藥有效量的如權(quán)利要 求1-8、49-54或67任一項(xiàng)所述的人類原肝干細(xì)胞。
70. -種治療肝機(jī)能障礙或疾病的方法，該方法包括向受試者給藥有效量的如權(quán)利要 求1〇-11、65_66或68任一項(xiàng)所述的人類近肝干細(xì)胞。
71. 分離的人類原肝干細(xì)胞。
72. 分離的人類近肝干細(xì)胞。
【專利摘要】肝祖細(xì)胞包括兩個類群的人類肝干細(xì)胞，即原肝干細(xì)胞和近肝干細(xì)胞，以及兩個類群的定向祖細(xì)胞，一群是膽管細(xì)胞，一群是肝細(xì)胞。人類原肝干細(xì)胞是肝臟細(xì)胞群中非常小的部分，產(chǎn)生近肝干細(xì)胞，后者構(gòu)成大部分的肝。人類原肝干細(xì)胞生成膽管細(xì)胞及肝細(xì)胞定向祖細(xì)胞。原干細(xì)胞和近干細(xì)胞是人類肝中主要的干細(xì)胞。人類原肝干細(xì)胞可通過免疫選擇從人類肝中分離，或者通過在選擇人類原肝干細(xì)胞的條件下培養(yǎng)人類肝臟細(xì)胞分離。近肝干細(xì)胞可通過免疫選擇或通過在包括發(fā)育因子的條件下培養(yǎng)人類肝臟細(xì)胞分離。近肝干細(xì)胞也可以通過培養(yǎng)在包括發(fā)育因子的條件下培養(yǎng)包含原肝干細(xì)胞的集落分離。所得的組合物可用于治療肝紊亂和用于生產(chǎn)生物人工器官。
【IPC分類】C12N5-071, A61K35-12, C12N5-0789, C12N5-074, A61K35-407, A61P1-16, C12N5-10, A61K35-48
【公開號】CN104630129
【申請?zhí)枴緾N201410815377
【發(fā)明人】洛拉·里德, 尼古拉斯·G·莫斯, 馬克·E·福斯, 約翰·W·拉德洛, 安德魯·T·布魯斯
【申請人】北卡羅來納大學(xué)查伯山分校, 維思塔治療有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2003年3月14日
【公告號】CA2479510A1, CN1742082A, CN1742082B, EP1490480A2, EP1490480A4, US7413897, US8691523, US20040018621, US20070099297, US20140302601, WO2003078588A2, WO2003078588A3, WO2003078588A9