專利名稱:人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及到一種人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法。
背景技術：
由于胰島素在臨床上的重要性和巨大的市場需求，極大地吸引著人們通過DNA 重組技術生產胰島素。因此，有關基因工程中胰島素的報道很多，而生物反應器也成為近 年來許多生物技術研究部門十分關注的領域，諸如奶牛、奶山羊乳腺生產反應器生產人的 生長因子，在植物反應器中利用馬鈴薯生產乙肝疫苗等。在人胰島素降糖方面，也有報 道，如中國專利數(shù)據(jù)庫公開號為CN1376778利用轉基因真菌生產胰島素的方法、公開號為 CN1295129利用轉基因番茄生產人胰島素的方法，公開號為CN1382734利用轉基因生菜生 產人胰島素的方法等，但尚未見到利用家蠅作為生物反應器表達人胰島素的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明旨在于克服現(xiàn)有技術的不足，在現(xiàn)有技術的基礎上，利用家蠅作為生物反
應器，研制出了一種人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法。
本發(fā)明的人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法，其制備方法如下
a、利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒，采用點轉移技術對家蠅的受精卵
進行轉基因操作，對子一代受精卵、子二代受精卵反復轉基因操作，達到最大表達量后孵化
成成蛹；
b、選籽粒飽滿的蛹置于零上1 5°C的條件下儲藏備用；
c、取b步驟中的轉基因蛹置于28t:、相對濕度為60X環(huán)境下孵化成成蟲、產卵并 孵化幼蟲，培養(yǎng)4日齡幼蟲后從培養(yǎng)基取出，靜置12小時后依次進行清水漂洗、雙氧水浸 泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗；
d、將經上述處理的幼蟲進行粉碎、干燥、凍干20小時，在10萬級凈化環(huán)境下粉碎 即制成成品。
通過本發(fā)明的方法制得的口服降糖蛋白，其降血糖效果顯著，對人體無副作用。
具體實施方式
本發(fā)明的人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法，其制備方法如下 a、利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒，采用點轉移技術對家蠅的受精卵 進行轉基因操作，對子一代受精卵、子二代受精卵反復轉基因操作，達到最大表達量后孵化 成成蛹；
b、選籽粒飽滿的蛹置于零上1 5°C的條件下儲藏備用；
c、取b步驟中的轉基因蛹置于28°C 、相對濕度為60 %環(huán)境下孵化成成蟲、產卵并 孵化幼蟲，培養(yǎng)成4日齡幼蟲后從培養(yǎng)基取出，靜置12小時后依次進行清水漂洗、雙氧水浸 泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗；[0014] d、將經上述處理的幼蟲進入膠體磨粉碎后上真空冷凍干燥機凍干20小時取出， 在10萬級凈化環(huán)境下粉碎灌裝腸溶膠囊即制成成品。
權利要求
人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法，其制備方法如下a、利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒，采用點轉移技術對家蠅的受精卵進行轉基因操作，對子一代受精卵、子二代受精卵反復轉基因操作，達到最大表達量后孵化成成蛹；b、選籽粒飽滿的蛹置于零上1～5℃的條件下儲藏備用；c、取b步驟中的轉基因蛹置于28℃、相對濕度為60％環(huán)境下孵化成成蟲、產卵并孵化幼蟲，培養(yǎng)成4日齡幼蟲后從培養(yǎng)基取出，靜置12小時后依次進行清水漂洗、雙氧水浸泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗；d、將經上述處理的幼蟲進行粉碎、干燥、凍干20小時，在10萬級凈化環(huán)境下粉碎即制成成品。
專利摘要
本發(fā)明的一種人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法，是利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒，采用點轉移技術對家蠅的受精卵進行轉基因操作，對子一代受精卵、子二代受精卵反復轉基因操作，達到最大表達量后孵化成成蛹；選籽粒飽滿的蛹置于零上1～5℃的條件下儲藏備用，再置于28℃、相對濕度為60％環(huán)境下孵化成成蟲，培養(yǎng)4日齡幼蟲后從培養(yǎng)基取出，靜置12小時后依次進行清水漂洗、雙氧水浸泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗后進入膠體磨粉碎后上真空冷凍干燥機凍干20小時后取出，在10萬級凈化環(huán)境下粉碎即制成成品。通過本發(fā)明的方法制得的口服降糖蛋白，其降血糖效果顯著，對人體無副作用。
文檔編號C12N15/85GKCN101698679SQ200910308757
公開日2010年4月28日 申請日期2009年10月24日
發(fā)明者孟慶煜 申請人:孟慶煜導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan