本發(fā)明屬于生物，特別涉及一株生產(chǎn)啶南平a的菌株及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、雙丙環(huán)蟲酯，作為一種新型的高效低毒殺蟲劑，自上市以來便以其獨特的殺蟲機理和卓越的性能在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注。其獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用方式，為害蟲防治提供了新的解決方案，尤其在防控刺吸式口器害蟲方面，展現(xiàn)出了顯著的優(yōu)勢。雙丙環(huán)蟲酯是以啶南平a為前體通過兩步簡單高效的化學(xué)反應(yīng)合成，啶南平a的制備工藝是制備雙丙環(huán)蟲酯的關(guān)鍵因素。啶南平類化合物是由真菌產(chǎn)生的由吡啶環(huán)和α-吡喃酮結(jié)構(gòu)構(gòu)成的半萜類化合物，具有良好的殺蟲活性，最早在aspergillus?fumigatus?fo-1289中分離得到，共a、b、c、d四種啶南平衍生物，其中以啶南平a活性最好。已有研究者對化學(xué)合成啶南平a工藝進行研究，共需17步反應(yīng)，但總得率較低，僅為5.3%，故生物發(fā)酵法依然是制備啶南平a的最主要的方法。目前已發(fā)現(xiàn)煙曲霉、灰黃青霉、糞生青霉等微生物具備合成啶南平a的能力，然而發(fā)酵產(chǎn)量較低，報道最高的原始菌株灰黃青霉f1959，產(chǎn)量約為20mg/l。隨著啶南平a合成途徑的解析，孫鍵鵬等在米曲霉中異源表達(dá)neosartorya?fischeri啶南平a的合成基因簇，經(jīng)過發(fā)酵條件優(yōu)化，產(chǎn)量達(dá)到263.5mg/l，產(chǎn)量依然不高。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供從土壤中分離得到的一株高效生產(chǎn)啶南平a的菌株，并應(yīng)用該菌株發(fā)酵生產(chǎn)啶南平a的方法。本發(fā)明所提供的產(chǎn)啶南平a的菌株是從煙臺農(nóng)田土壤中分離得到，培養(yǎng)簡單、遺傳穩(wěn)定性強。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、一株產(chǎn)啶南平a的菌株，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏日期為2024年10月21日，分類命名為草酸青霉（penicillium?oxalicum），保藏編號為：cgmcc?no.41547。

4、進一步，該菌株的its基因序列如seq.no.1。

5、本發(fā)明還提供所述菌株在發(fā)酵生產(chǎn)啶南平a上的應(yīng)用。

6、進一步，作為優(yōu)選的實施方式，所述菌株發(fā)酵生產(chǎn)啶南平a的發(fā)酵條件為轉(zhuǎn)速220r/min，ph6.0～6.8，發(fā)酵溫度20～30℃，搖床振蕩培養(yǎng)5～10d；發(fā)酵培養(yǎng)基的成分及終濃度：碳源?20～50?g/l，?k2hpo4?1.5?g/l，酵母浸粉?1?g/l，黃豆粉?10?g/l，棉籽蛋白?5?g/l，硫酸鎂?0.3?g/l，kcl?0.5?g/l，feso4?0.01?g/l，cacl2?0.1?g/l，煙酸?0.5～2?g/l，泛酸鈣?2mg/l，核黃素?1mg/l，腺苷?2mg/l，znso4?1mg/l，cuso4?0.4?mg/l，鉬酸鈉?0.05mg/l。

7、進一步，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源是可溶性淀粉、葡萄糖、糊精和蔗糖中的一種或多種。

8、作為優(yōu)選的實施方式之一，所述應(yīng)用還包括菌株活化的步驟：挑取菌種劃線接種至固體保藏培養(yǎng)基，于恒溫培養(yǎng)箱20～30℃培養(yǎng)5～7d。

9、作為優(yōu)選的實施方式之一，所述應(yīng)用還包括液體種子制備：挑取活化菌株接種于裝有種子培養(yǎng)基的容器中，紗布封口，于20～30℃，180～220r/min搖床振蕩培養(yǎng)1～3d，得液體種子。

10、作為優(yōu)選的實施方式之一，所述應(yīng)用還包括液體發(fā)酵：按體積比5～15%接種量向發(fā)酵培養(yǎng)基接入制備的液體種子，裝液量為容器容積的?1/5。

11、作為優(yōu)選的實施方式之一，所述的固體保藏培養(yǎng)基的成分及終濃度：葡萄糖?20g/l，蛋白胨?20?g/l，酵母浸粉?10?g/l，瓊脂?20?g/l，ph6.5，121℃高壓蒸汽滅菌20?min。

12、作為優(yōu)選的實施方式之一，所述的液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖?20?g/l，蛋白胨?20g/l，酵母浸粉?10?g/l，葡萄糖?20?g/l，ph6.5，121℃高壓蒸汽滅菌20?min。

13、本發(fā)明還提供一種生物制劑，所述生物制劑中含有所述菌株的發(fā)酵產(chǎn)物。

14、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果：雙丙環(huán)蟲酯是重要的高效低毒殺蟲劑，具有廣闊的應(yīng)用前景，其重要前體化合物啶南平a是通過微生物發(fā)酵產(chǎn)生的，啶南平a的發(fā)酵產(chǎn)率高低對于雙丙環(huán)蟲酯的制造至關(guān)重要，而生產(chǎn)菌種又是合成啶南平a的關(guān)鍵因素。本發(fā)明所提供的草酸青霉tla16具有較高的發(fā)酵啶南平a生產(chǎn)能力，對環(huán)境適應(yīng)性強，配套的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件較為簡單，操作方便，工業(yè)應(yīng)用具有優(yōu)勢。

技術(shù)特征：

1.一株產(chǎn)啶南平a的菌株，其特征在于，所述菌株保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏日期為2024年10月21日，分類命名為草酸青霉，拉丁文為penicillium?oxalicum，保藏編號為：cgmcc?no.?41547。

2.一種生物制劑，其特征在于，所述生物制劑中含有權(quán)利要求1所述菌株的發(fā)酵產(chǎn)物。

3.權(quán)利要求1所述菌株的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為利用權(quán)利要求1所述菌株發(fā)酵生產(chǎn)啶南平a。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述菌株發(fā)酵生產(chǎn)啶南平a的發(fā)酵條件為轉(zhuǎn)速220?r/min，ph6.0～6.8，發(fā)酵溫度20～30℃，搖床振蕩培養(yǎng)5～10d；發(fā)酵培養(yǎng)基的成分及終濃度：碳源?20～50?g/l，?k2hpo4?1.5?g/l，酵母浸粉?1?g/l，黃豆粉?10?g/l，棉籽蛋白5?g/l，硫酸鎂?0.3?g/l，kcl?0.5?g/l，feso4?0.01?g/l，cacl2?0.1?g/l，煙酸?0.5～2?g/l，泛酸鈣?2mg/l，核黃素?1mg/l，腺苷?2mg/l，znso4?1mg/l，cuso4?0.4?mg/l，鉬酸鈉?0.05mg/l。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源是可溶性淀粉、葡萄糖、糊精和蔗糖中的一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一株產(chǎn)啶南平A的菌株及應(yīng)用。所述菌株分類命名為草酸青霉（Penicillium?oxalicum）Tla16，已于2024年10月21日保存于中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏，保藏編號：CGMCC?No.41547。本發(fā)明所提供的草酸青霉Tla16具有較高的發(fā)酵啶南平A生產(chǎn)能力，對環(huán)境適應(yīng)性強，配套的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件較為簡單，操作方便，工業(yè)應(yīng)用具有優(yōu)勢。

技術(shù)研發(fā)人員：馮志彬,李菁,陶美君,張懷媛,許梅,劉婧
受保護的技術(shù)使用者：魯東大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9