本發(fā)明屬于分子生物學(xué)，具體涉及一種與結(jié)球甘藍(lán)抽薹時(shí)間相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、甘藍(lán)為世界廣泛種植的主要蔬菜作物之一，其栽培歷史悠久，品種資源及其豐富，目前我國結(jié)球甘藍(lán)每年種植面積在40萬公頃以上，占全國蔬菜種植面積的25%~30%，是東北、西北、華北等地區(qū)春、夏、秋季栽培的主要蔬菜，在南方也有大積栽培。

2、抽薹開花是其生產(chǎn)中的重要農(nóng)藝性狀，“先期抽薹”降低產(chǎn)品的產(chǎn)量和品質(zhì)，是春季結(jié)球甘藍(lán)生產(chǎn)的主要問題，給生產(chǎn)帶來巨大損失。因此，開發(fā)一種與結(jié)球甘藍(lán)抽薹時(shí)間相關(guān)的分子標(biāo)記并應(yīng)用其篩選和鑒定結(jié)球甘藍(lán)早抽薹品種極為重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的之一是提供一種indel分子標(biāo)記在鑒定或篩選結(jié)球甘藍(lán)抽薹時(shí)間早晚中的應(yīng)用，所述indel分子標(biāo)記的核苷酸序列為tcaatcaactagtggagacaaaaacaaa，該序列存在于早抽薹結(jié)球甘藍(lán)dna基因組3號(hào)染色體的非編碼區(qū)，不存在于晚抽薹結(jié)球甘藍(lán)dna基因組3號(hào)染色體的非編碼區(qū)。

2、本發(fā)明的目的之二是提供引物對bb3在鑒定或篩選結(jié)球甘藍(lán)抽薹時(shí)間早晚中的應(yīng)用，所述引物對bb3的序列如下：

3、bb3f：gtcaatcaactagtggagac；

4、bb3r：aggtcgctactttctgccaa。

5、本發(fā)明的目的之三是提供一種鑒定結(jié)球甘藍(lán)早抽薹品種或材料的方法，包括以下步驟：

6、步驟1，提取待鑒定品種或材料的基因組dna；

7、步驟2，以步驟1提取的dna為模板，利用引物對bb3其進(jìn)行pcr擴(kuò)增，引物對bb3的序列如下：

8、bb3f：gtcaatcaactagtggagac

9、bb3r：aggtcgctactttctgccaa；

10、步驟3，以步驟2的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，獲得各樣品的帶型，如果得到448bp的片段，則說明待鑒定品種或者材料為早抽薹。

11、進(jìn)一步地，步驟2中pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系為20?μl，其中含基因組dna?1?μl，上下游引物各1?μl，2xeasytaq?pcr?supermix?for?page?10μl。

12、進(jìn)一步地，步驟2中pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3min；94℃?變性50?s，56℃50?s，72℃延伸60?s，35個(gè)循環(huán)；72℃?延伸10min。

13、本發(fā)明以保存的早晚抽薹材料為基礎(chǔ)，根據(jù)其基因組重測序結(jié)果結(jié)合多年表型鑒定結(jié)果進(jìn)行差異序列分析，進(jìn)行差異目標(biāo)區(qū)段功能注釋分析，篩選出與抽薹性狀密切相關(guān)的分子標(biāo)記，對早晚抽薹結(jié)球甘藍(lán)dna進(jìn)行pcr擴(kuò)增，并結(jié)合其連續(xù)多年的抽薹期表型，進(jìn)一步驗(yàn)證該分子標(biāo)記與抽薹性狀密切相關(guān)，利用該分子標(biāo)記的引物對實(shí)現(xiàn)在甘藍(lán)苗期階段晚早晚抽薹結(jié)球甘藍(lán)的早期快速分子標(biāo)記鑒定，提高甘藍(lán)耐抽薹品種的育種效率。

14、本發(fā)明提供的鑒定結(jié)球甘藍(lán)抽薹早晚的分子標(biāo)記及其引物對，可用于早期耐抽薹結(jié)球甘藍(lán)育種材料的快速鑒定，克服了傳統(tǒng)方法所需時(shí)間周期長、不準(zhǔn)確性高等缺點(diǎn)；同時(shí)還有利于結(jié)球甘藍(lán)耐抽薹分子標(biāo)記輔助育種體系的建立。因此，本發(fā)明在甘藍(lán)類蔬菜育種實(shí)踐及耐抽薹理論研究上均具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.?indel分子標(biāo)記在鑒定或篩選結(jié)球甘藍(lán)抽薹時(shí)間早晚中的應(yīng)用，其特征在于，所述indel分子標(biāo)記的核苷酸序列為tcaatcaactagtggagacaaaaacaaa，該序列存在于早抽薹結(jié)球甘藍(lán)dna基因組3號(hào)染色體的非編碼區(qū)，不存在于晚抽薹結(jié)球甘藍(lán)dna基因組3號(hào)染色體的非編碼區(qū)。

2.引物對bb3在鑒定或篩選結(jié)球甘藍(lán)抽薹時(shí)間早晚中的應(yīng)用，其特征在于，所述引物對bb3的序列如下：

3.一種鑒定結(jié)球甘藍(lán)早抽薹品種或材料的方法，其特征在于，包括以下步驟：

4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系為20?μl，其中含基因組dna?1?μl，上下游引物各1?μl，2xeasytaq?pcr?supermix?for?page?10μl。

5.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3min；94℃?變性50?s，56℃?50?s，72℃延伸60?s，35個(gè)循環(huán)；72℃?延伸10min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種與結(jié)球甘藍(lán)抽薹早晚相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。本發(fā)明以保存的早晚抽薹材料為基礎(chǔ)，根據(jù)其基因組重測序結(jié)果結(jié)合多年表型鑒定結(jié)果進(jìn)行差異序列分析，進(jìn)行差異目標(biāo)區(qū)段功能注釋分析，篩選出與抽薹性狀密切相關(guān)的分子標(biāo)記，對早晚抽薹結(jié)球甘藍(lán)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并結(jié)合其連續(xù)多年的抽薹期表型，進(jìn)一步驗(yàn)證該分子標(biāo)記與抽薹性狀密切相關(guān)，利用該分子標(biāo)記的引物對實(shí)現(xiàn)在甘藍(lán)苗期階段晚早晚抽薹結(jié)球甘藍(lán)的早期快速分子標(biāo)記鑒定，提高甘藍(lán)耐抽薹品種的育種效率。

技術(shù)研發(fā)人員：許園園,曾愛松,邢苗苗,盧昱宇,嚴(yán)繼勇
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9