本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法。

背景技術(shù)：

1、誘導(dǎo)多能干細胞(induced?pluripotent?stem?cells，ipscs)是一種體細胞經(jīng)重編程而來的具有胚胎干細胞特性的無限增殖和多向分化潛能的干細胞。由于其不涉及倫理爭議問題，其無限增殖和多向分化的特性，促使誘導(dǎo)多能干細胞在疾病建模、神經(jīng)退行性疾病治療、腫瘤治療、再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的關(guān)注運用。

2、目前，t細胞重編程為ipsc的技術(shù)，在實際應(yīng)用中仍存在諸多問題，例如獲得的t細胞數(shù)目少，活力低，增殖活性差，重編程為ipsc的成功率不高，體系不穩(wěn)定、耗時長等問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的是提出一種t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，旨在解決目前t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的耗時長、不穩(wěn)定、成功率不高以及安全性能低的問題。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出一種t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，包括以下步驟：

3、獲取分離的外周血單個核細胞；

4、將所述分離的外周血單個核細胞進行分選，收集總t細胞；

5、將總t細胞與重編程質(zhì)?；旌?，進行質(zhì)粒核轉(zhuǎn)，得核轉(zhuǎn)完成的總t細胞；

6、將所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與激活因子混合分階段進行培養(yǎng)、誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞；

7、其中，所述激活因子包括cd3/cd28和il2。

8、在一些實施方式，步驟“將所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與激活因子混合分階段進行培養(yǎng)、誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞”包括：

9、將所述所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與激活因子混合進行激活、再與多種培養(yǎng)基混合分階段進行培養(yǎng)、并誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞，其中，所述多種培養(yǎng)基包括matrigel膠。

10、在一些實施方式，所述重編程質(zhì)粒包括pce-hoct3/4、pce-hsk、pce-hul和pce-mp53dd；和/或，

11、所述多種培養(yǎng)基包括t細胞培養(yǎng)基、誘導(dǎo)培養(yǎng)基n2b27和mtesr?plus干細胞培養(yǎng)基。

12、在一些實施方式，步驟“將所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與激活因子混合進行激活、再與多種培養(yǎng)基混合分階段進行培養(yǎng)、并誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞，其中，所述多種培養(yǎng)基包括matrigel膠、所述多種培養(yǎng)基包括t細胞培養(yǎng)基、誘導(dǎo)培養(yǎng)基n2b27和mtesr?plus干細胞培養(yǎng)基”包括：

13、將所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與t細胞培養(yǎng)基混合培養(yǎng)，得第一培養(yǎng)液；

14、將所述第一培養(yǎng)液與激活因子和誘導(dǎo)培養(yǎng)基n2b27混合培養(yǎng)，直至出現(xiàn)早期誘導(dǎo)多能干細胞，得第二培養(yǎng)液；

15、將所述第二培養(yǎng)液更換為mtesr?plus干細胞培養(yǎng)基混合培養(yǎng)，得誘導(dǎo)多能干細胞。

16、在一些實施方式，步驟“獲取分離的外周血單個核細胞”包括：

17、采取人體靜脈外周血；

18、將所述人體靜脈外周血與干細胞保護液和淋巴分離液混合、離心、洗滌、純化、培養(yǎng)，得分離的外周血單個核細胞。

19、在一些實施方式，步驟“將所述分離的外周血單個核細胞進行分選，收集總t細胞”中：分選的方式為磁珠分選。

20、在一些實施方式，步驟“將總t細胞與重編程質(zhì)?；旌希M行質(zhì)粒核轉(zhuǎn)，得核轉(zhuǎn)完成的總t細胞”包括：

21、將總干細胞重懸總t細胞，得重懸液；

22、將所述重懸液與t細胞核轉(zhuǎn)反應(yīng)液、重編程質(zhì)?；旌线M行質(zhì)粒核轉(zhuǎn)，得核轉(zhuǎn)完成的總t細胞。

23、本發(fā)明提供一種誘導(dǎo)多能干細胞，所述誘導(dǎo)多能干細胞由如上所述任一項所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法制得。

24、本發(fā)明提供一種藥物組合物，所述組合物包括如上所述的誘導(dǎo)多能干細胞和/或所述誘導(dǎo)多能干細胞中的活性成分。

25、本發(fā)明提供的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，采用cd3/cd28和il-2在總t細胞核轉(zhuǎn)后進行激活，不僅能使得t細胞獲得更高的活力進行重編程誘導(dǎo)，同時，可以使得t細胞在更短的時間、更高的成功率、更簡便安全的有效的實現(xiàn)ipsc生成。

技術(shù)特征：

1.一種t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，步驟“將所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與激活因子混合分階段進行培養(yǎng)、誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞”包括：

3.如權(quán)利要求2所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，

4.如權(quán)利要求3所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，步驟“將所述核轉(zhuǎn)完成的總t細胞與激活因子混合進行激活、再與多種培養(yǎng)基混合分階段進行培養(yǎng)、并誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞，其中，所述多種培養(yǎng)基包括matrigel膠、所述多種培養(yǎng)基包括t細胞培養(yǎng)基、誘導(dǎo)培養(yǎng)基n2b27和mtesr?plus干細胞培養(yǎng)基”包括：

5.如權(quán)利要求1所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，步驟“獲取分離的外周血單個核細胞”包括：

6.如權(quán)利要求1所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，步驟“將所述分離的外周血單個核細胞進行分選，收集總t細胞”中：分選的方式為磁珠分選。

7.如權(quán)利要求1所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，其特征在于，步驟“將總t細胞與重編程質(zhì)?；旌?，進行質(zhì)粒核轉(zhuǎn)，得核轉(zhuǎn)完成的總t細胞”包括：

8.一種誘導(dǎo)多能干細胞，其特征在于，所述誘導(dǎo)多能干細胞由如權(quán)利要求1～7任一項所述的t細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法制得。

9.一種藥物組合物，其特征在于，所述組合物包括如權(quán)利要求8所述的誘導(dǎo)多能干細胞和/或所述誘導(dǎo)多能干細胞中的活性成分。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種T細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，包括以下步驟：獲取分離的外周血單個核細胞；將所述分離的外周血單個核細胞進行分選，收集總T細胞；將總T細胞與重編程質(zhì)?；旌希M行質(zhì)粒核轉(zhuǎn)，得核轉(zhuǎn)完成的總T細胞；將所述核轉(zhuǎn)完成的總T細胞與激活因子混合分階段進行培養(yǎng)、誘導(dǎo)得誘導(dǎo)多能干細胞；其中，所述激活因子包括CD3/CD28和IL2本發(fā)明提供的T細胞重編程為誘導(dǎo)多能干細胞的方法，采用CD3/CD28和IL?2進行T細胞的激活，不僅能使得T細胞獲得更高的活力進行重編程誘導(dǎo)，同時，可以使得T細胞在更短的時間、更高的成功率、更簡便安全的有效的實現(xiàn)iPSC生成。

技術(shù)研發(fā)人員：許珍汝,李尊雄,李宇雯,李俊儀,王晨
受保護的技術(shù)使用者：許珍汝
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6