本發(fā)明涉及提取膠原蛋白領(lǐng)域，具體涉及一種酶法提取牦牛皮膠原蛋白的方法。

二、

背景技術(shù)：

膠原蛋白是一種白色、不透明、無支鏈的纖維蛋白質(zhì)，主要存在于動物的皮、骨、肌腱等當(dāng)中，是構(gòu)成動物支撐組織的結(jié)構(gòu)蛋白，能有效的增加皮膚組織細胞的儲水功能，增加肌膚彈性，保持皮膚柔軟、細嫩，也能使人體內(nèi)的血管和神經(jīng)保持韌性和彈性，對人體抗衰老及美容具有特殊功效。

目前，膠原蛋白的提取方法主要有酸法、堿法和酶法。酸水解法迅速而徹底，但色氨酸會全部被破壞，且產(chǎn)率較低；堿水解法會破壞含羥基和巰基氨基酸，并產(chǎn)生消旋作用；酶法提取膠原蛋白破壞性小，能更好更完全地得到活性蛋白。周玉惠（周玉惠，葉正濤，肖麗芳，等.豬皮膠原蛋白的提取及其結(jié)構(gòu)表征[J].湖北大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2008,30（3）：287-289）等人研究了酶法提取豬皮中膠原蛋白的方法，鄭元生（鄭元生.從魚皮中提取魚膠原蛋白的方法[P].中國專利：201010170443.7）發(fā)明了利用蛋白酶從魚皮中提取膠原蛋白的方法，王全凱（王全凱，李慶杰，王蓮萍，等.一種鹿皮膠原蛋白的提取方法[P].中國專利：201410465783.0）等人發(fā)明了一種鹿皮膠原蛋白的提取方法，但未曾有牦牛皮膠原蛋白提取相關(guān)的研究。牦牛皮是青藏高原地區(qū)豐富的自然資源，目前主要用于制革，使得牦牛皮的利用價值和產(chǎn)品附加值普遍較低。

三、

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述技術(shù)問題本發(fā)明提供了一種酶法提取牦牛皮膠原蛋白的方法，其特征在于：包括以下工序完成：脫毛→粉碎→脫脂→酶解→純化；

所述脫毛的工序的工藝條件為：將牦牛皮平鋪在地面上，皮面向下，毛被向上，將配制好的脫毛膏涂抹在毛被上，堆置3～5h推毛，沖洗后得到裸皮，裸皮備用；

粉碎工序的工藝條件為：將得到的裸皮粉碎成2～5mm大小的皮顆粒備用；

脫脂工序的工藝條件為：在三口瓶中加入備用的皮顆粒，同時加入皮顆粒重量2～3倍的水和2%～5%的脫脂材料，以100～150r/min的速度保溫攪拌2～3h，物料備用；

酶解工序的工藝條件為：將脫脂的工序中備用的皮顆粒沖洗后加入400%～500%的水和皮顆粒質(zhì)量的2%～2.5%的堿性物質(zhì)和1%～2%的酶制劑，在35～40℃溫度下以100～150r/min攪拌8～10h后得到膠原蛋白溶液備用；

純化工序的工藝條件為：將酶解工序中備用的膠原蛋白溶液在8000～10000r/min、4℃的條件下離心30～40min后收集上清液，用濃度為0.1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)上清液pH，并加入無機鹽至濃度為2～3mol/L，靜置2～3h，在上述條件下離心收集所述上清液的沉淀，干燥后得到牦牛皮膠原蛋白；

所述的脫毛膏由100份水、10～12份硫化鈉和30～35份熟石灰混合均勻后制備而成，同時脫毛膏的用量為每張牦牛皮1～1.6kg；

所述的脫脂材料為皮顆粒質(zhì)量1%～2%的純堿和1%～3%的表面活性劑，其中表面活性劑為HLB在9～15的所有陰離子表面活性劑，如：十二烷基苯磺酸鈉、脂肪酸甲酯磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、烷基萘磺酸鹽、雷米邦A(yù)等；所述的保溫溫度為35～40℃；

所述的堿性物質(zhì)為小蘇打，用量為皮顆粒重量的4%～6%；所述的酶制劑為堿性蛋白酶，用量為皮顆粒重量的0.5%～0.8%；所述的溫度為30～40℃；

所述的上清液pH為4.8～5.2，所述的無機鹽為氯化鈉。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明以牦牛皮為原料，發(fā)明了一種酶法提取牦牛皮膠原蛋白的方法，旨在得到性能優(yōu)良的膠原蛋白，提高牦牛皮的產(chǎn)品價值和經(jīng)濟效益；本發(fā)明經(jīng)過脫毛、脫脂后利用酶制劑水解制備的膠原蛋白純度高、色澤均勻、無異味，提取過程綠色環(huán)保、工藝簡單，并能擴牦牛皮的利用范圍，增加牦牛皮的利用價值。

四、具體實施方式

實施例1

一種酶法提取牦牛皮膠原蛋白的方法：1）將一張牦牛皮平鋪在地面上，皮面向下，毛被向上，在毛被上涂抹1kg脫毛膏（由100份水、10份硫化鈉和35份熟石灰混合而成），堆置4h后推毛，沖洗得到裸皮；

2）將得到的裸皮粉碎成2～5mm大小的皮顆粒；

3）在三口瓶中加入100份皮顆粒，同時加入皮顆粒重量200%的水、2%的純堿和1.5%的十二烷基苯磺酸鈉，在38℃下以100r/min的速度攪拌反應(yīng)2.5h；

4）將3）中得到的皮顆粒沖洗后加入皮顆粒重量400%的水、4%的小蘇打和0.5%的堿性蛋白酶，在38℃下攪拌以120r/min的速度攪拌反應(yīng)8h后得到膠原蛋白溶液；

5）將得到的膠原蛋白溶液在10000r/min、4℃的條件下離心30min后收集上清液，用濃度為0.1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)上清液pH為5.0，并加入一定量的氯化鈉使其濃度為2mol/L，靜置2h，在10000r/min、4℃的條件下離心30min后收集所述上清液的沉淀，干燥后得到牦牛皮膠原蛋白。

實施例2

一種酶法提取牦牛皮膠原蛋白的方法：1）將一張牦牛皮平鋪在地面上，皮面向下，毛被向上，在毛被上涂抹1.6kg脫毛膏（由100份水、12份硫化鈉和30份熟石灰混合而成），堆置5h后推毛，沖洗得到裸皮；

2）將得到的裸皮粉碎成2～5mm大小的皮顆粒；

3）在三口瓶中加入120份皮顆粒，同時加入皮顆粒重量300%的水、2.5%的純堿和2%的脂肪酸甲酯磺酸鈉（MES），在40℃下以120r/min的速度攪拌反應(yīng)3h；

4）將3）中得到的皮顆粒沖洗后加入皮顆粒重量450%的水、6%的小蘇打和0.6%的堿性蛋白酶，在40℃下攪拌以100r/min的速度攪拌反應(yīng)9h后得到膠原蛋白溶液；

5）將得到的膠原蛋白溶液在9000r/min、4℃的條件下離心35min后收集上清液，用濃度為0.1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)上清液pH為5.2，并加入一定量的氯化鈉使其濃度為2.5mol/L，靜置2h，在9000r/min、4℃的條件下離心35min后收集所述上清液的沉淀，干燥后得到牦牛皮膠原蛋白。

實施例3

一種酶法提取牦牛皮膠原蛋白的方法：1）將一張牦牛皮平鋪在地面上，皮面向下，毛被向上，在毛被上涂抹1.2kg脫毛膏（由100份水、11份硫化鈉和32份熟石灰混合而成），堆置3h后推毛，沖洗得到裸皮；

2）將得到的裸皮粉碎成2～5mm大小的皮顆粒；

3）在三口瓶中加入110份皮顆粒，同時加入皮顆粒重量200%的水、1.3%的純堿和3%的十二烷基硫酸鈉，在35℃下以150r/min的速度攪拌反應(yīng)2h；

4）將3）中得到的皮顆粒沖洗后加入皮顆粒重量500%的水、5%小蘇打和0.8%堿性蛋白酶，在30℃下攪拌以150r/min的速度攪拌反應(yīng)10h后得到膠原蛋白溶液；

5）將得到的膠原蛋白溶液在8000r/min、4℃的條件下離心40min后收集上清液，用濃度為0.1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)上清液pH為4.8，并加入一定量的氯化鈉使其濃度為3mol/L，靜置3h，在8000r/min、4℃的條件下離心40min后收集所述上清液的沉淀，干燥后得到牦牛皮膠原蛋白。